本文關(guān)鍵詞：新疆出血熱病毒實時熒光RT-PCR檢測方法的假病毒陽性對照品制備

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【摘要】：目的制備安全、穩(wěn)定的新疆出血熱病毒實時熒光RT-PCR檢測陽性對照品。方法人工合成含實時熒光RT-PCR擴增片段的新疆出血熱病毒核苷酸序列,連接入慢病毒載體,將重組慢病毒載體與慢病毒包裝載體共轉(zhuǎn)染293T細胞,培養(yǎng)48 h后采用實時熒光RT-PCR方法檢測假病毒包裝情況,隨后將包裝成功的假病毒顆粒加核酸保護劑制備成陽性對照品,并進行穩(wěn)定性試驗。結(jié)果重組慢病毒載體與慢病毒包裝載體共轉(zhuǎn)染293T細胞后,將收集到的細胞培養(yǎng)上清采用實時熒光RT-PCR進行檢測,結(jié)果顯示10、100、1 000、10 000倍4個倍比稀釋度擴增后所得的Ct值分別為13、19、25、33,顯示含高濃度的假病毒顆粒。取經(jīng)1 000倍稀釋后制備的陽性對照品于37℃孵箱中放置0、3、7、15、21和30 d后,提取的RNA經(jīng)實時熒光RT-PCR檢測,所得Ct值在25~28之間,表明陽性對照品有較高的熱穩(wěn)定性。結(jié)論本研究通過慢病毒包裝技術(shù)制備的假病毒顆粒,是新疆出血熱病毒熒光RT-PCR核酸檢測過程中理想的陽性對照品。
【作者單位】： 廣東檢驗檢疫技術(shù)中心;
【基金】：國家質(zhì)檢總局科技計劃項目(2013IK223,2015IK066)
【分類號】：R512.8;R440
【正文快照】： 新疆出血熱病毒是克里米亞-剛果出血熱病毒在我國新疆南部地區(qū)的一種流行株[1],屬于內(nèi)羅病毒屬中的一種,可導(dǎo)致人類出現(xiàn)病死率極高的出血性疾病;病毒通過蜱傳播,可引起地區(qū)性的人間疫情,對公眾是一種嚴重的威脅[2-3]�；驒z測技術(shù)是目前快速鑒定新疆出血熱病毒的最佳方法之一

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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3 韓磊;抗新疆出血熱病毒核蛋白單克隆抗體的制備及診斷應(yīng)用[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2002年

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本文編號：1184908