本文關(guān)鍵詞：基于惡性瘧原蟲PHIST特有基因的環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)的建立與評價

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【摘要】：目的建立基于編碼惡性瘧原蟲PHIST蛋白特有基因的環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)。方法在Plasmo DB數(shù)據(jù)庫中,搜索并篩選編碼PHIST、在環(huán)狀體或裂殖體期高表達且惡性瘧原蟲特有的基因。利用在線軟件Primer Explorer V4設(shè)計目的基因LAMP引物。采集惡性瘧原蟲濾紙血并提取基因組DNA。將提取后的惡性瘧原蟲DNA用超純水進行10~(-1)、10~(-2)、10~(-3)、10~(-4)倍比稀釋,用LAMP法檢測其敏感性;采用間日瘧原蟲、約氏瘧原蟲、牛帶絳蟲和日本血吸蟲基因組DNA作為對照,用LAMP法評價其特異性。結(jié)果共篩選出61個編碼惡性瘧原蟲PHIST的基因。選取環(huán)狀體期高表達的特有基因PF3D7_1372300和裂殖體期高表達的特有基因PF3D7_1401600建立LAMP技術(shù)。基于PF3D7_1372300和PF3D7_1401600基因的LAMP法檢測惡性瘧原蟲的最低限度分別為130.5個/μl和1 305.3個/μl,所獲得的惡性瘧原蟲擴增產(chǎn)物其檢測管染色后呈綠色,即陽性。基于PF3D7_1372300和PF3D7_1401600基因的LAMP法擴增惡性瘧原蟲產(chǎn)物檢測管染色后呈綠色,即陽性;而間日瘧原蟲、約氏瘧原蟲、牛帶絳蟲和日本血吸蟲的LAMP擴增產(chǎn)物檢測管染色后仍呈棕色,即陰性。結(jié)論基于PF3D7_1372300基因的LAMP法檢測惡性瘧原蟲敏感、特異、簡便、實用,可用于惡性瘧流行區(qū)現(xiàn)場調(diào)查和臨床診斷。
【作者單位】： 湖北醫(yī)藥學(xué)院;湖北省武漢市疾病預(yù)防控制中心;江蘇省血吸蟲病防治研究所;第三軍醫(yī)大學(xué);廣東省潮州市中心醫(yī)院;
【關(guān)鍵詞】： 惡性瘧原蟲 PHIST蛋白 環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)
【基金】：湖北省自然科學(xué)基金(2014CFB648)
【分類號】：R531.3
【正文快照】： 瘧疾是嚴(yán)重危害人類健康的全球三大公共衛(wèi)生問題之一[1],其中以惡性瘧原蟲感染引起的惡性瘧最為危險致命。該病在撒哈拉以南非洲地區(qū)流行普遍,發(fā)病率和死亡率極高,特別是孕婦和5歲兒童深受其害[2]。WHO發(fā)布的《2015年世界瘧疾報告》顯示,2014年全球約有2.14億新增瘧疾病例,其

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2 張國瑩;法屬圭亞那惡性瘧原蟲有限的遺傳多樣性和較高的自交率[J];國外醫(yī)學(xué)(寄生蟲病分冊);2001年01期

3 陳慧紅;惡性瘧原蟲基因組結(jié)構(gòu)研究進展[J];國外醫(yī)學(xué)(寄生蟲病分冊);2001年04期

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2 徐勁;葉苓;吳忠道;陳守義;余新炳;;惡性瘧原蟲己糖轉(zhuǎn)運體編碼基因的初步研究[A];中國動物學(xué)會第七屆全國青年寄生蟲學(xué)工作者學(xué)術(shù)討論會論文摘要集[C];2002年

3 雷俊川;繆軍;李s，

本文編號：1101572