本文關(guān)鍵詞：Nrf2信號通路抑制后對細粒棘球蚴原頭節(jié)生長的影響

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【摘要】：目的:本實驗以體外培養(yǎng)的細粒棘球蚴原頭節(jié)為研究對象,觀察維甲酸(RA)對細粒棘球蚴原頭節(jié)內(nèi)Nrf2信號通路的抑制作用,并進一步探討Nrf2信號通路抑制后體外對細粒棘球蚴原頭節(jié)的作用。方法:無菌條件下,從自然感染細粒棘球蚴病的綿羊肝臟中獲取細粒棘球蚴原頭節(jié),并置RPMI 1640培養(yǎng)基中體外培養(yǎng)。將不同濃度的RA(2、4、6、8和10μmol/L)體外作用于細粒棘球蚴原頭節(jié),并設(shè)立空白對照組。采用共聚焦免疫熒光技術(shù)檢測原頭節(jié)內(nèi)Nrf2的定位及表達變化;通過WST法及ELISA法測定RA作用后原頭節(jié)GST及HO-1的活性變化。各組原頭節(jié)經(jīng)0.1%伊紅溶液染色后于光鏡下觀察活力及形態(tài)變化,實驗獨立重復(fù)3次,并繪制活力曲線。用掃描電子顯微鏡(SEM)觀察原頭節(jié)表面超微結(jié)構(gòu)改變。不同濃度RA作用原頭節(jié)24h、48h后,用caspase-3檢測試劑盒檢測caspase-3酶活性。結(jié)果:免疫熒光定位表明Nrf2綠色熒光主要分布于細粒棘球蚴原頭節(jié)的細胞質(zhì)中,8μmol/LRA作用后,綠色熒光強度及定位均未見明顯改變。RA作用后的原頭節(jié)GST和HO-1活性均顯著下降(P0.05),且呈時間及劑量依賴性。不同濃度RA均有抑制原頭節(jié)生長的作用,以8μmol/L和10μmol/LRA對原頭節(jié)殺傷作用較明顯,至培養(yǎng)第5d,8μmol/L組原頭節(jié)活力僅為9.58%,而10μmol/L組原頭節(jié)已全部死亡。隨著藥物作用時間的延長,RA對原頭節(jié)的殺傷作用越明顯。SEM觀察顯示,RA可明顯破壞原頭節(jié)表面超微結(jié)構(gòu),引起蟲體表層塌陷、頂突變形及微毛脫落,當藥物濃度及作用時間增加后,損傷加重,出現(xiàn)頂突界面缺損、吸盤變形,體表還可見大量蟲蝕樣改變及指狀突起。此外,不同濃度RA作用原頭節(jié)24h、48h后,caspase-3酶活性較正常對照組顯著增高(P0.05)。結(jié)論:1.維甲酸可有效抑制細粒棘球蚴原頭節(jié)內(nèi)Nrf2調(diào)控的下游GST、HO-1的活性,但對Nrf2的表達水平?jīng)]有影響。2.維甲酸體外作用可明顯抑制細粒棘球蚴原頭節(jié)生長,促進其凋亡。
【關(guān)鍵詞】：細粒棘球蚴原頭節(jié) Nrf2 維甲酸 免疫熒光定位
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R532.32
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-7
• 英文縮略語表7-8
• 前言8-11
• 材料11-14
• 1.實驗原頭節(jié)采集11
• 2.主要實驗試劑11-12
• 3.主要實驗儀器12-13
• 4.主要溶液配制13-14
• 方法14-20
• 1.細粒棘球蚴原頭節(jié)的獲取及體外培養(yǎng)14
• 2.RA體外作用于細粒棘球蚴原頭節(jié)14
• 3.共聚焦免疫熒光技術(shù)檢測Nrf2在細粒棘球蚴原頭節(jié)的表達14-15
• 4.WST試劑盒檢測原頭節(jié)GST活性15-16
• 5.ELISA試劑盒檢測原頭節(jié)HO-1 活性16-17
• 6.光學(xué)顯微鏡觀察原頭節(jié)形態(tài)和活力變化17
• 7.掃描電子顯微鏡觀察原頭節(jié)表面超微結(jié)構(gòu)變化17
• 8.RA作用后原頭節(jié)內(nèi)caspase-3 活性檢測17-19
• 9.統(tǒng)計學(xué)分析19-20
• 結(jié)果20-27
• 1.熒光共聚焦顯微鏡觀察細粒棘球蚴原頭節(jié)Nrf2的定位及表達變化20-21
• 2.RA體外作用后細粒棘球蚴原頭節(jié)GST和HO-1 的活性變化21-23
• 3.RA體外作用對細粒棘球蚴原頭節(jié)形態(tài)的影響23-24
• 4.RA體外作用對細粒棘球蚴原頭節(jié)活力的影響24
• 5.RA體外作用對細粒棘球蚴原頭節(jié)表面超微結(jié)構(gòu)的影響24-25
• 6.RA體外作用后細粒棘球蚴原頭節(jié)caspase-3 酶活性的變化25-27
• 討論27-30
• 結(jié)論30-31
• 參考文獻31-36
• 綜述36-46
• 參考文獻42-46
• 致謝46-47
• 作者簡介47-48
• 導(dǎo)師評閱表48

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本文編號：1101580