本文關(guān)鍵詞：丹酚酸B通過PPAR-γ和LXRα途徑促進(jìn)巨噬細(xì)胞ABCA1依賴的膽固醇流出，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景與研究目的隨著社會物質(zhì)的極大豐富及飲食結(jié)構(gòu)的巨大改變,世界人口中血脂異常人群的比例明顯高于以前。血脂異常作為代謝綜合癥的組分之一,與多種疾病如肥胖癥、2型糖尿病、高血壓、冠心病、腦卒中等密切相關(guān)。長期血脂異�？蓪�(dǎo)致動脈粥樣硬化、增加心腦血管病的發(fā)病率和死亡率。動脈粥樣硬化性疾病已成為全世界人群死亡的主要原因,占總死亡率的50%。動脈粥樣硬化的形成是一個(gè)需要經(jīng)歷許多年過程。內(nèi)皮激活／損傷,LDL攝取、滯留和氧化,單核細(xì)胞浸潤轉(zhuǎn)變成巨噬細(xì)胞并最終變成富含脂質(zhì)的泡沫細(xì)胞,動脈中層平滑肌細(xì)胞增殖遷移至內(nèi)膜,以及血栓形成構(gòu)成動脈粥樣硬化病變。過多的膽固醇被巨噬細(xì)胞吞噬后變成了泡沫細(xì)胞,此過程是動脈粥樣硬化的早期重要特征,也是動脈粥樣硬化病變的起始機(jī)制和重要病理基礎(chǔ)。膽固醇從巨噬細(xì)胞流出可以防止動脈粥樣硬化的進(jìn)展。HDL-C與其他脂蛋白相比,最主要特點(diǎn)是顆粒最小,密度最高,蛋白質(zhì)和脂肪含量約各占一半,載脂蛋白以ApoA Ⅰ和ApoA Ⅱ?yàn)橹鳌DL的生理功能是將外周組織包括動脈壁在內(nèi)的膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟進(jìn)行代謝,這一過程稱為膽固醇的逆轉(zhuǎn)運(yùn),是HDL抗動脈粥樣硬化作用的主要機(jī)制。膽固醇的逆轉(zhuǎn)運(yùn)是機(jī)體排除過多膽固醇的唯一途徑,對維持生物體膽固醇代謝穩(wěn)態(tài)具有重要意義,也是目前認(rèn)為機(jī)體對抗動脈粥樣硬化發(fā)生的主要機(jī)制之一。膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)的影響因素及調(diào)控機(jī)制多而復(fù)雜。ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)子A1(ABCA1)是一種整合膜蛋白,它以ATP為能源,促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)游離膽固醇和磷脂流出至細(xì)胞外貧脂的ApoA I。ABCA1基因突變的Tangier病患者和ABCA1基因敲除的小鼠均表現(xiàn)出細(xì)胞內(nèi)膽固醇外流障礙。ABCA1首先介導(dǎo)泡沫細(xì)胞內(nèi)的磷脂流出,磷脂流出后與細(xì)胞外ApoAⅠ結(jié)合,形成盤狀復(fù)合物；在其誘導(dǎo)下,使細(xì)胞內(nèi)的游離膽固醇流出并與該復(fù)合物相結(jié)合,從而形成前β-HDL,接著在卵磷脂膽固醇酯酰轉(zhuǎn)移酶作用下,前β-HDL轉(zhuǎn)變?yōu)槌墒斓腍DL。因此,ABCA1是調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)膽固醇外流關(guān)鍵的限速蛋白,ABCA1在膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)過程中發(fā)揮了非常關(guān)鍵的作用。ABCA1在體內(nèi)的表達(dá)受多個(gè)因素所調(diào)節(jié),研究較多的是核受體家族,如過氧化物酶體增殖激活型受體(PPARs)、肝孤兒受體(LXR)、視黃醇X受體(RXR)等,它們均可在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控ABCA1的表達(dá)。PPARs包括PPAR-α, PPAR-β和PPAR-γ三種亞型。其中PPAR-γ是核受體家族最重要的成員之一,現(xiàn)在認(rèn)為PPAR-γ參與調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞脂質(zhì)代謝和細(xì)胞分化。PPAR-γ作為一個(gè)關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子,可調(diào)控多個(gè)介導(dǎo)膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)的基因表達(dá)。LXR是核受體超家族成員,有LXRα和LXRβ兩種亞型。LXRα可調(diào)節(jié)肝臟、巨噬細(xì)胞和小腸內(nèi)膽固醇代謝相關(guān)的許多靶基因。研究證實(shí),LXR激動劑可上調(diào)巨噬細(xì)胞ABCA1的表達(dá),導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)膽固醇的流出。丹酚酸B (Salvianolic acid B, Sal B)是提取的丹參干燥根及根莖中的有效成分。Sal B為一分子咖啡酸和三分子丹參素縮合而成,是丹參活性最強(qiáng)的水溶性提取物之一,也是研究較多的丹參酚酸。以往的研究已證實(shí),Sal B能改善血流動力學(xué),降低氧化損傷和修復(fù)血管內(nèi)皮功能。在過去的幾年中Sal B以及其他的丹參提取物質(zhì)在中國甚至有些西方國家已廣泛用于動脈粥樣硬化性血管疾病包括冠心病和中風(fēng)。Sal B能夠清除羥自由基,超氧陰離子自由基,抑制脂質(zhì)過氧化,因而被視為一種抗氧化劑。Sal B被證實(shí)是一種有效的CD36拮抗劑,抑制巨噬細(xì)胞依賴于CD36對修飾型低密度脂蛋白的攝取。Sal B能抑制血小板的聚集和活化,通過降低基質(zhì)金屬蛋白酶2和基質(zhì)金屬蛋白酶9穩(wěn)定粥樣斑塊改善預(yù)后。在飲食誘導(dǎo)的高膽固醇血癥兔模型中,Sal B能抑制LDL的氧化修飾,降低血漿膽固醇水平,改善內(nèi)皮損傷和動脈粥樣硬化的嚴(yán)重程度。上述研究結(jié)果表明,膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)被證實(shí)是脂質(zhì)代謝HDL防止動脈粥樣硬化的主要機(jī)制。Sal B在脂質(zhì)代謝和抗動脈粥樣硬化過程中扮演了重要角色。然而,目前關(guān)于Sal B對膽固醇流出影響的研究較少,本研究以PMA誘導(dǎo)THP-1源性巨噬細(xì)胞為研究對象,檢測Sal B對膽固醇流出的影響。在蛋白和-nRNA水平測定THP-1源性巨噬細(xì)胞ABCA1表達(dá),及PPAR-γ和LXRa蛋白水平的表達(dá)。采用PPAR-γ和LXRa激動劑及拮抗劑檢測Sal B誘導(dǎo)的促進(jìn)脂質(zhì)外排過程中的作用,從而澄清Sal B與膽固醇流出的關(guān)系及其可能的作用機(jī)制。研究方法1.THP-1源性巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)：人THP-1單核細(xì)胞在160nmol/ml PMA作用72h,誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞分化生成巨噬細(xì)胞。2.THP-1源性巨噬細(xì)胞在50mg/L ox-LDL和1.0μCi/ml [3H]-膽固醇作用24h,誘導(dǎo)生成負(fù)載膽固醇的巨噬細(xì)胞。3. Sal B (0,0.1,1 and 10μM)作用于荷脂的THP-1源性巨噬細(xì)胞24h,及10μM Sal B作用于細(xì)胞0、3、6、12、24 h。液體閃爍法測定放射性物質(zhì)進(jìn)出細(xì)胞,評價(jià)Sal B對膽固醇流出的影響。4. Sal B作用于THP-1源性巨噬細(xì)胞,Real-time PCR方法檢測ABCA1 mRNA水平的表達(dá)；Western blot方法檢測ABCA1蛋白水平的變化。5.Sal B作用于THP-1源性巨噬細(xì)胞,Western blot方法檢測PPAR-γ和LXRα蛋白水平的表達(dá)。6. PPAR-γ和LXRα激動劑及拮抗劑分別與Sal B共同作用于THP-1源性泡沫細(xì)胞24h, Real-time PCR方法檢測ABCA1 mRNA水平的表達(dá)；Western blot方法檢測ABCA1蛋白水平的變化。7. PPAR-γ和LXRa激動劑及拮抗劑分別與Sal B共同作用于荷脂THP-1源性巨噬細(xì)胞24h,測定膽固醇流出率。研究結(jié)果1. Sal B對負(fù)載膽固醇THP-1源性巨噬細(xì)胞膽固醇流出率的影響：在ApoA-I, HDL2或HDL3存在情況下,用不同濃度的Sal B (0,0.1,1 and 10μM)處理荷脂的THP-1源性巨噬細(xì)胞24h。與對照組比,1μM Sal B能促進(jìn)膽固醇流出至ApoA Ⅰ和HDL2 (P0.05),10μM Sal B促進(jìn)膽固醇流出至ApoAⅠ和HDL2約是對照組2.5倍和3.2倍(P0.01)。同時(shí),10μM Sal B也能促進(jìn)膽固醇流出至HDL3 (P0.05)。10μM Sal B處理負(fù)載膽固醇的THP-1源性巨噬細(xì)胞0、3、6、12、24 h。結(jié)果顯示,6h之內(nèi)Sal B不能發(fā)揮對膽固醇流出至三種介質(zhì)的作用；12h后Sal B明顯增強(qiáng)膽固醇流出(P0.05),培養(yǎng)24h后可顯著增強(qiáng)膽固醇流出至ApoA Ⅰ和HDL2(P0.01)。以上結(jié)果表明Sal B以濃度和時(shí)間依賴模式促進(jìn)THP-1源性巨噬細(xì)胞膽固醇外排至ApoA Ⅰ、HDL2和HDL3。2.Sal B對THP-1源性巨噬細(xì)胞ABCA1在蛋白和mRNA水平表達(dá)的影響：不同濃度的Sal B (0,0.1,1 and 10μM)處理THP-1源性巨噬細(xì)胞24h。與對照組比較,0.1μM Sal B處理THP-1源性巨噬細(xì)胞后ABCA1蛋白和mRNA水平表達(dá)無明顯改變,而1μM(P0.05)和10μM(P0.01)Sal B處理后,ABCA1蛋白和mRNA水平表達(dá)均明顯提高。用10μM Sal B處理THP-1巨噬細(xì)胞0、3、6、12、24 h。結(jié)果顯示,與對照組比較,10μM Sal B處理3h和6h對ABCA1蛋白水平表達(dá)無明顯影響(P0.05). 10μM Sal B刺激12h和24h ABCA1蛋白水平表達(dá)明顯升高(P0.01)。ABCA1 mRNA水平表達(dá)在10μM Sal B處理達(dá)6h后明顯升高(P0.01)。上述結(jié)果表明,Sal B可以濃度和時(shí)間依賴模式增強(qiáng)THP-1巨噬細(xì)胞ABCA1在蛋白水平和mRNA水平的表達(dá)。3. Sal B對THP-1源性巨噬細(xì)胞PPAR-γ和LXRa在蛋白水平表達(dá)的影響：不同濃度的Sal B (0,0.1,1 and 10μM處理THP-1源性巨噬細(xì)胞24h。與對照組比較,1μM和10μM Sal B處理后PPAR-γ和LXRa的表達(dá)顯著增加(P0.01); 0.1μM Sal B處理后PPAR-γ和LXRα的表達(dá)無明顯改變(P0.05)。4. PPAR-γ和LXRa激動劑及拮抗劑對Sal B誘導(dǎo)THP-1源性巨噬細(xì)胞ABCA1表達(dá)的影響：PPAR-γ拮抗劑GW9662和LXRa拮抗劑GGPP (20μM)均顯著抑制Sal B誘導(dǎo)的ABCA1在蛋白和mRNA水平的表達(dá)(P0.01),而PPAR-y激動劑羅格列酮(1μM)和LXRa激動劑GW3965 (5μM)大大增強(qiáng)ABCA1在蛋白和mRNA水平的表達(dá)(P0.01)。5. PPAR-γ和LXRa激動劑及拮抗劑對Sal B誘導(dǎo)荷脂的THP-1源性巨噬細(xì)胞膽固醇流出的影響：PPAR-γ和LXRα激動劑及拮抗劑分別與Sal B共同孵育負(fù)載膽固醇的THP-1源性巨噬細(xì)胞24h。與對照組比較,Sal B顯著促進(jìn)膽固醇流出至ApoA I (P0.01)、HDL2(P0.01)和HDL3 (P0.05)。PPAR-γ拮抗劑 GW9662和LXRα拮抗劑GGPP均明顯抑制Sal B誘導(dǎo)的膽固醇流出(P0.01)。PPAR-γ激動劑羅格列酮和LXRβ激動劑GW3965均明顯增強(qiáng)Sal B誘導(dǎo)膽固醇流向ApoA I、HDL2和HDL3 (P0.01)。結(jié)論1. Sal B可以時(shí)間和濃度依賴模式促進(jìn)體外培養(yǎng)的負(fù)載膽固醇的THP-1源性巨噬細(xì)胞膽固醇流出。2. Sal B可以濃度和時(shí)間依賴模式增強(qiáng)THP-1巨噬細(xì)胞ABCA1在蛋白水平和mRNA水平的表達(dá)。3. Sal B促進(jìn)THP-1源性巨噬細(xì)胞ABCA1表達(dá)是通過PPAR-γ和LXRa途徑。4. Sal B誘導(dǎo)負(fù)載膽固醇的THP-1源性巨噬細(xì)胞膽固醇的流出是通過ABCA1/PPAR-γ/LXRa途徑。
【關(guān)鍵詞】：膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn) 丹酚酸B ABCA1 PPAR-γ 肝X受體
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R285
【目錄】：

• 中文摘要6-11
• 英文摘要11-17
• 符號說明17-18
• 前言18-22
• 實(shí)驗(yàn)材料22-24
• 實(shí)驗(yàn)方法24-32
• 結(jié)果32-34
• 討論34-38
• 結(jié)論38-39
• 附圖表39-43
• 參考文獻(xiàn)43-49
• 綜述49-60
• 參考文獻(xiàn)56-60
• 致謝60-61
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果61-62
• 外文論文62-98
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表98

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉麗莉;王煥;任廣躍;段續(xù);;丹參葉綠茶的保質(zhì)干燥技術(shù)研究[J];干燥技術(shù)與設(shè)備;2013年06期

2 Hyun Woo Byun;Eun Mi Hong;Soo Hee Park;Dong Hee Koh;Min Ho Choi;Hyun Joo Jang;Sea Hyub Kae;Jin Lee;;Pravastatin activates the expression of farnesoid X receptor and liver X receptor alpha in Hep3B cells[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2014年01期

3 Bojan Stanimirov;Karmen Stankov;Momir Mikov;;Bile acid signaling through farnesoid X and TGR5 receptors in hepatobiliary and intestinal diseases[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2015年01期

4 張?jiān)?王階;吳廣均;劉瑞華;;丹參酚酸B抑制TLR4-NFκB-TNFα炎癥損傷通路防治心肌細(xì)胞的缺氧損傷[J];遼寧中醫(yī)雜志;2012年01期

5 婁崢;彭軍;;丹參乙酸鎂的心腦血管保護(hù)作用及機(jī)制研究進(jìn)展[J];中國動脈硬化雜志;2013年09期

6 欒兆進(jìn);曲緒仙;賀建寧;柳楠;;羊肌內(nèi)脂肪調(diào)控研究進(jìn)展[J];家畜生態(tài)學(xué)報(bào);2014年09期

7 肖玲芳;張衛(wèi)芳;龔志成;;丹酚酸B的心血管藥理研究進(jìn)展[J];中南醫(yī)學(xué)科學(xué)雜志;2015年01期

8 蔣校文;魯坤;張?zhí)?楊壽康;孫國良;;高壓氧治療促進(jìn)局部丹參和確炎舒松注射治療口腔粘膜下纖維性變的研究[J];口腔醫(yī)學(xué)研究;2015年02期

9 王哲;袁子民;張會宗;;HPLC法測定六君保玄顆粒中鹽酸小檗堿、丹酚酸B含量[J];遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2015年08期

10 Jinnan Zhang;Wei Lu;Qiang Lei;Xi Tao;Hong You;Pinghui Xie;;Salvianolate increases heat shock protein expression in a cerebral ischemia-reperfusion injury model[J];Neural Regeneration Research;2013年25期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張馮筱;1型多聚ADP核糖合成酶調(diào)控代謝性核受體轉(zhuǎn)錄激活的機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2013年

2 喻冬柯;化合物B192和EGCG的藥效和藥理作用機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

3 朱云霞;高級糖基化終末產(chǎn)物（AGEs）對糖尿病胰島β細(xì)胞損傷的作用研究[D];南京師范大學(xué);2013年

4 葉魯思;FXR在MCT誘導(dǎo)肺動脈高壓大鼠心肺組織中的表達(dá)及作用的初步研究[D];中南大學(xué);2013年

5 扈曉杰;巖藻黃素和豆渣膳食纖維對肥胖的預(yù)防作用及其機(jī)理研究[D];浙江大學(xué);2013年

6 崔瑩雪;艾灸及艾煙對ApoE~(-/-)小鼠動脈粥樣硬化膽固醇代謝和炎性反應(yīng)的影響[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2014年

7 劉鵬;兩類FXR拮抗劑的設(shè)計(jì)、合成與構(gòu)效關(guān)系研究及芳炔參與的反應(yīng)研究[D];華東理工大學(xué);2014年

8 張馮筱;1型多聚ADP核糖合成酶調(diào)控代謝性核受體轉(zhuǎn)錄激活的機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2013年

9 徐揚(yáng);以CLA-1為靶標(biāo)的微生物來源抗動脈粥樣硬化活性化合物的分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定及分子機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2010年

10 彭墨;飼料脂肪水平和脂肪酸組成對大菱鲆幼魚脂沉積的影響[D];中國海洋大學(xué);2014年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉小花;核受體FXR下調(diào)載脂蛋白M表達(dá)的分子機(jī)制[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

  本文關(guān)鍵詞：丹酚酸B通過PPAR-γ和LXRα途徑促進(jìn)巨噬細(xì)胞ABCA1依賴的膽固醇流出，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：341141