發(fā)布時間：2021-07-22 19:07

　　研究背景:前列腺癌（prostate cancer,PCa）是泌尿系統(tǒng)常見的惡性腫瘤。在美國,PCa已成為第一位危害男性健康的惡性腫瘤,死亡率排第二位。中國PCa的發(fā)病率也在逐年上升,已經成為影響我國男性健康的難題之一。PCa進展相對緩慢,對于局限性及局部晚期PCa來說,其5年生存率大于99%,而晚期患者的5年生存率明顯降低至3 0%左右。由雄激素依賴性前列腺癌（hormone-sensitive prostate cancer,HSPC）向去勢抵抗性前列腺癌（castration resistant prostate cancer,CRPC）的轉化及腫瘤的遠處轉移是導致治療效果不佳及生存率下降的主要原因,且目前仍缺乏有效的治療手段。因此,抑制前列腺癌的轉移并尋求新的治療靶點,具有極為重要的意義。上皮間質轉化（epithelial mesenchymal transition,EMT）是指上皮細胞在特定的生理或病理情況下向間充質細胞轉化的現(xiàn)象,其特征通常是間充質細胞標記物如波形蛋白（vimentin）、N-鈣粘蛋白（N-cadherin）的表達上調和上皮細胞標記物如E-鈣粘蛋白（E-c... 

【文章來源】：山東大學山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：179 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１?ＶＰＡ干預對前列腺癌細胞ＥＭＴ的影響??圖１?Ａ：?ＶＰＡ干預ＬＮＣａＰ細胞，Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ的表達明顯上調，Ｎ－ｃａｄｈｅｒｉｎ、??ｖｉｍｅｎｔｉｎ的表達明顯下調，與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義（Ｐ＜０．０５）

ｌ?Ｙ的２個慢??病毒分別為ｌｖ－ｓｈ－ＴＩＦｌ?ｙ?－１、ｌｖ－ｓｈ－ＴＩＦｌ?ｙ?－２，過表達ＴＩＦ１?ｙ的３個慢病毒分別為??ｌｖ－ＴＩＦｌＹ－１、ｌｖ－ＴＩＦｌｙ－２、ｌｖ－ＴＩＦｌｙ－３。取?ＭＯＩ＝２０，通過高內涵顯微鏡熒觀察??發(fā)現(xiàn)，感染７２ｈ，?ｌｖ－ｓｈ－ＴＩＦｌｙ感染ＬＮＣａＰ、ＰＣ３的感染效率均可達到９０％?（圖??２）。用含有嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞，無明顯細胞死亡時代表＇￣敲減??ＴＩＦ１?丫的穩(wěn)轉株篩選成功。??■?■??ＬＮＣａＰ?ＰＣ３??圖２慢病毒轉染ＬＮＣａＰ及ＰＣ３細胞高內涵顯微鏡下熒光成像??攜帶ｓｈＲＮＡ－ＴＩＦｌ?ｙ的慢病毒以Ｍ０Ｉ＝２０轉染ＬＮＣａＰ及ＰＣ３細胞１２ｈ，培養(yǎng)７２ｈ??后，高內涵顯微鏡觀察轉染效率＞９０％，細胞狀態(tài)良好。??隨后，在敲減ＴＩＦ１?Ｙ表達的ＬＮＣａＰ細胞穩(wěn)轉株中，ｑＲＴ－ＰＣＲ實驗檢測沉默??效率，結果顯示：ＴＩＦｌｙ的ｍＲＮＡ表達明顯降低，ＴＩＦｌｙ的蛋白表達也明顯降??低（敲減效率大于８０％），且ｌｖ－ｓｈ－ＴＩＦｌｙ－２的敲減效率更高。因此，在ＬＮＣａＰ??５５??

Ｄ＾ｍｍ?／／／?／／／?／Ｖ，／??ＰＣ３??Ｃ?，Ｄ??ＴｉＦｉＹ｜ｆｗ？?ｍｍ?ｍｍ?ｉＳ］ｉ５〇ＫＤ?２０ｎ?ｃ?６ｎ????￣??＞?■?ＬＮＣａＰ?〇?？?ｍ?ＬＮＣａＰ??ｇａｐｄｈ?＼ｍｍ?ｍｍ?ｍｍ?ｍｍ?３５ｋｄ?二?￥?？?■?ＰＣ３?ｇ?Ｔ?ｍ?ｐ〇３??ＬＮｃａｐ?．?ｉｆ?Ｊ?ｉ．??購?Ｌ￡＾ｍ腦＾ｉ＞ｉｌｌ?ｉＨｌ?ｉ?Ｊｉ＞！）?ｉｌｌ）??ＧＡＰＤＨ?［ｍｍ?３ｓｋｄ?＾／／／?ｙ／／?ｔ？ＫＶ／Ａ＞??ＰＣ３??圖３敲減及過表達ＴＩＦＩｙ的ＰＣ３、ＬＮＣａＰ細胞穩(wěn)轉株的篩選??敲減及過表達ＴＩＦ１?丫的慢病毒載體轉染ＬＮＣａＰ、ＰＣ３細胞。Ａ：?ＷＢ法檢測??ＬＮＣａＰ、ＰＣ３細胞分別轉染兩株慢病毒后的ＴＩＦＩｙ的沉默效率。結果顯示，??ｓｈ－ＴｌＦｌｙ－２的沉默效率最高。Ｂ：?ｑＲＴ－ＰＣＲ檢測ＰＣ３、ＬＮＣａＰ細胞分別轉染兩??株慢病毒后的ＴＩＦｌ?ｙ的ｍＲＮＡ的沉默效率，結果顯示，ｓｈ－ＴＩＦｌ?ｙ?－２的沉默效率??最高。Ｃ：?ＷＢ法檢測ＰＣ３和ＬＮＣａＰ細胞分別轉染三株慢病毒后的ＴＩＦｌ?Ｙ的過??表達效果。結果顯示，ＬＮＣａＰ細胞中，ＴＩＦｙ－３的過表達效果最佳；ＰＣ３細胞中，??ＴＩＦｌ?ｙ?－２的過表達效果最佳。Ｄ：?ｑＲＴ－ＰＣＲ檢測ＰＣ３和ＬＮＣａＰ細胞分別轉染三??株慢病毒后的ＴＩＦＩｙ的ｍＲＮＡ的過表達效果，結果顯示，ＬＮＣａＰ細胞中，??ＴＩＦＩｙ－３的過表達效果最佳；ＰＣ３細胞中，ＴＩＦＩｙ－２的過表達效果最佳。＊表示??與對照組相比，＊Ｐ＜〇．〇５，?ｎ＝３。??２．２．?ＴＩＦｌ?Ｙ在抑制ＰＣ３、ＬＮＣａＰ細胞ＥＭＴ中發(fā)

【參考文獻】：
期刊論文
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