研究背景:前列腺癌（prostate cancer,PCa）是泌尿系統(tǒng)常見的惡性腫瘤。在美國,PCa已成為第一位危害男性健康的惡性腫瘤,死亡率排第二位。中國PCa的發(fā)病率也在逐年上升,已經(jīng)成為影響我國男性健康的難題之一。PCa進(jìn)展相對緩慢,對于局限性及局部晚期PCa來說,其5年生存率大于99%,而晚期患者的5年生存率明顯降低至3 0%左右。由雄激素依賴性前列腺癌（hormone-sensitive prostate cancer,HSPC）向去勢抵抗性前列腺癌（castration resistant prostate cancer,CRPC）的轉(zhuǎn)化及腫瘤的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致治療效果不佳及生存率下降的主要原因,且目前仍缺乏有效的治療手段。因此,抑制前列腺癌的轉(zhuǎn)移并尋求新的治療靶點(diǎn),具有極為重要的意義。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial mesenchymal transition,EMT）是指上皮細(xì)胞在特定的生理或病理情況下向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化的現(xiàn)象,其特征通常是間充質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物如波形蛋白（vimentin）、N-鈣粘蛋白（N-cadherin）的表達(dá)上調(diào)和上皮細(xì)胞標(biāo)記物如E-鈣粘蛋白（E-c... 

【文章來源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１?ＶＰＡ干預(yù)對前列腺癌細(xì)胞ＥＭＴ的影響??圖１?Ａ：?ＶＰＡ干預(yù)ＬＮＣａＰ細(xì)胞，Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ的表達(dá)明顯上調(diào)，Ｎ－ｃａｄｈｅｒｉｎ、??ｖｉｍｅｎｔｉｎ的表達(dá)明顯下調(diào)，與對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）

ｌ?Ｙ的２個慢??病毒分別為ｌｖ－ｓｈ－ＴＩＦｌ?ｙ?－１、ｌｖ－ｓｈ－ＴＩＦｌ?ｙ?－２，過表達(dá)ＴＩＦ１?ｙ的３個慢病毒分別為??ｌｖ－ＴＩＦｌＹ－１、ｌｖ－ＴＩＦｌｙ－２、ｌｖ－ＴＩＦｌｙ－３。取?ＭＯＩ＝２０，通過高內(nèi)涵顯微鏡熒觀察??發(fā)現(xiàn)，感染７２ｈ，?ｌｖ－ｓｈ－ＴＩＦｌｙ感染ＬＮＣａＰ、ＰＣ３的感染效率均可達(dá)到９０％?（圖??２）。用含有嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，無明顯細(xì)胞死亡時代表＇￣敲減??ＴＩＦ１?丫的穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選成功。??■?■??ＬＮＣａＰ?ＰＣ３??圖２慢病毒轉(zhuǎn)染ＬＮＣａＰ及ＰＣ３細(xì)胞高內(nèi)涵顯微鏡下熒光成像??攜帶ｓｈＲＮＡ－ＴＩＦｌ?ｙ的慢病毒以Ｍ０Ｉ＝２０轉(zhuǎn)染ＬＮＣａＰ及ＰＣ３細(xì)胞１２ｈ，培養(yǎng)７２ｈ??后，高內(nèi)涵顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率＞９０％，細(xì)胞狀態(tài)良好。??隨后，在敲減ＴＩＦ１?Ｙ表達(dá)的ＬＮＣａＰ細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株中，ｑＲＴ－ＰＣＲ實(shí)驗(yàn)檢測沉默??效率，結(jié)果顯示：ＴＩＦｌｙ的ｍＲＮＡ表達(dá)明顯降低，ＴＩＦｌｙ的蛋白表達(dá)也明顯降??低（敲減效率大于８０％），且ｌｖ－ｓｈ－ＴＩＦｌｙ－２的敲減效率更高。因此，在ＬＮＣａＰ??５５??

Ｄ＾ｍｍ?／／／?／／／?／Ｖ，／??ＰＣ３??Ｃ?，Ｄ??ＴｉＦｉＹ｜ｆｗ？?ｍｍ?ｍｍ?ｉＳ］ｉ５〇ＫＤ?２０ｎ?ｃ?６ｎ????￣??＞?■?ＬＮＣａＰ?〇?？?ｍ?ＬＮＣａＰ??ｇａｐｄｈ?＼ｍｍ?ｍｍ?ｍｍ?ｍｍ?３５ｋｄ?二?￥?？?■?ＰＣ３?ｇ?Ｔ?ｍ?ｐ〇３??ＬＮｃａｐ?．?ｉｆ?Ｊ?ｉ．??購?Ｌ￡＾ｍ腦＾ｉ＞ｉｌｌ?ｉＨｌ?ｉ?Ｊｉ＞�。�?ｉｌｌ）??ＧＡＰＤＨ?［ｍｍ?３ｓｋｄ?＾／／／?ｙ／／?ｔ？ＫＶ／Ａ＞??ＰＣ３??圖３敲減及過表達(dá)ＴＩＦＩｙ的ＰＣ３、ＬＮＣａＰ細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株的篩選??敲減及過表達(dá)ＴＩＦ１?丫的慢病毒載體轉(zhuǎn)染ＬＮＣａＰ、ＰＣ３細(xì)胞。Ａ：?ＷＢ法檢測??ＬＮＣａＰ、ＰＣ３細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染兩株慢病毒后的ＴＩＦＩｙ的沉默效率。結(jié)果顯示，??ｓｈ－ＴｌＦｌｙ－２的沉默效率最高。Ｂ：?ｑＲＴ－ＰＣＲ檢測ＰＣ３、ＬＮＣａＰ細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染兩??株慢病毒后的ＴＩＦｌ?ｙ的ｍＲＮＡ的沉默效率，結(jié)果顯示，ｓｈ－ＴＩＦｌ?ｙ?－２的沉默效率??最高。Ｃ：?ＷＢ法檢測ＰＣ３和ＬＮＣａＰ細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染三株慢病毒后的ＴＩＦｌ?Ｙ的過??表達(dá)效果。結(jié)果顯示，ＬＮＣａＰ細(xì)胞中，ＴＩＦｙ－３的過表達(dá)效果最佳；ＰＣ３細(xì)胞中，??ＴＩＦｌ?ｙ?－２的過表達(dá)效果最佳。Ｄ：?ｑＲＴ－ＰＣＲ檢測ＰＣ３和ＬＮＣａＰ細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染三??株慢病毒后的ＴＩＦＩｙ的ｍＲＮＡ的過表達(dá)效果，結(jié)果顯示，ＬＮＣａＰ細(xì)胞中，??ＴＩＦＩｙ－３的過表達(dá)效果最佳；ＰＣ３細(xì)胞中，ＴＩＦＩｙ－２的過表達(dá)效果最佳。＊表示??與對照組相比，＊Ｐ＜〇．〇５，?ｎ＝３。??２．２．?ＴＩＦｌ?Ｙ在抑制ＰＣ３、ＬＮＣａＰ細(xì)胞ＥＭＴ中發(fā)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3297723