發(fā)布時(shí)間：2017-04-24 05:10

  本文關(guān)鍵詞：血小板膜糖蛋白去唾液酸化效應(yīng)與ITP一線治療療效關(guān)系的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景原發(fā)免疫性血小板減少癥(ITP)是一種臨床常見(jiàn)的出血性疾病,目前對(duì)難治性ITP的發(fā)病機(jī)制尚未明確,且無(wú)有效的治療方法。。ITP雖不是血液系統(tǒng)惡性疾病,但對(duì)于反復(fù)出現(xiàn)血小板重度減低,療效不佳的患者來(lái)說(shuō),生存質(zhì)量極差,而且死亡風(fēng)險(xiǎn)也是極大的。ITP病理生理機(jī)制是多方面的,至今仍未完全明晰,目前得到公認(rèn)的是,絕大多數(shù)的ITP的產(chǎn)生都是由體液免疫和細(xì)胞免疫共同介導(dǎo)的血小板破壞。ITP的一線治療藥物有糖皮質(zhì)激素和靜脈注射免疫球蛋白(IVIG),其產(chǎn)生治療作用的主要機(jī)理包括抑制自身抗體的產(chǎn)生,封閉Fc受體的信號(hào)傳導(dǎo)通路,抑制巨噬細(xì)胞的吞噬功能,促進(jìn)巨核細(xì)胞產(chǎn)生血小板等,最終達(dá)到提升患者的血小板計(jì)數(shù)水平。近年不同的研究組均發(fā)現(xiàn),對(duì)于抗GPⅡb/Ⅲa抗體介導(dǎo)的ITP,應(yīng)用糖皮質(zhì)激素和IVIG的一線治療效果尚可,但是,若患者體內(nèi)存在抗GPⅠb-Ⅴ-Ⅸ復(fù)合物抗體,治療上給予上述一線治療效果往往較差。在目前較為明確的血小板清除的Fc受體依賴(lài)途徑外,是否存在其他的途徑導(dǎo)致血小板的清除呢?最新的體外及體內(nèi)的實(shí)驗(yàn)研究確認(rèn)了是存在非FcR依賴(lài)的血小板清除途徑的。血小板膜上的糖蛋白在神經(jīng)氨酸酶作用下去唾液酸化而暴露乙酰葡糖胺及半乳糖等殘基,這些去唾液酸化后的血小板通過(guò)表面血管性血友病因子(VWF)受體復(fù)合物的聚集,改變了信號(hào)傳導(dǎo),并結(jié)合到肝臟枯否氏細(xì)胞的MAC-1受體或肝細(xì)胞的去唾液酸糖蛋白受體(Ashwell-Morell受體),在肝臟枯否細(xì)胞和肝細(xì)胞內(nèi)清除,這不同于以往的血小板在脾臟清除的過(guò)程。然而在ITP患者體內(nèi)血小板的變化如何,是否也存在這種非Fc受體依賴(lài)的血小板清除途徑,導(dǎo)致一部分ITP患者應(yīng)用常規(guī)的一線治療效果不佳,目前尚未得到證實(shí)。研究目的本課題旨在研究：(1)比較ITP患者血小板膜表面糖蛋白去唾液酸化標(biāo)記物雞冠刺桐凝集素(ECL)、蓖麻凝集素(RCA-1)的結(jié)合水平與正常人的差異,分析ITP患者血小板膜表面糖蛋白去唾液酸化的狀況；(2)血小板膜表面膜表面糖蛋白去唾液酸化效應(yīng)與ITP一線治療療效關(guān)系,間接為血小板清除的非Fc受體依賴(lài)途徑的存在提供依據(jù),以利于進(jìn)一步探索有效的治療方法；(3)研究抗GPIba抗體與ITP患者血小板膜表面糖蛋白去唾液酸化相關(guān)性；(4)ITP與其他疾病對(duì)照組的血小板膜表面糖蛋白去唾液酸化水平的比較,探討在不同疾病中,去唾液酸化致血小板減少的發(fā)病機(jī)制存在的可能性。研究方法1.自2013年3月至2015年1月收集安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院住院ITP患者作為研究對(duì)象,并以伴血小板減少的初診風(fēng)濕免疫系統(tǒng)疾病、骨髓增生異常綜合征(MDS)、再生障礙性貧血(AA)和急性髓系白血病(AML)患者作為其他疾病對(duì)照組,安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院體檢中心20例健康成年人作為正常對(duì)照組。2.流式細(xì)胞術(shù)(FCM)分析我們通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)血小板表面ECL及RCA-1標(biāo)記的情況確定其膜表面糖蛋白去唾液酸化水平,ITP患者、其他疾病對(duì)照組及正常對(duì)照組的血小板分別與ECL和RCA-1孵育后上機(jī)檢測(cè),測(cè)得ECL及RCA-1結(jié)合百分比為去唾液酸化水平。3.改良單克隆抗體特異性俘獲血小板抗原法(MAIPA)分析檢測(cè)ITP患者主要抗體類(lèi)型,包括抗GPⅡbⅢa及GPⅠba特異性自身抗體,對(duì)ITP患者進(jìn)行分類(lèi)選擇。4.患者治療方法：61例ITP患者主要接受一線治療：首先地塞米松,劑量為40mg/d,3～5 d,不聯(lián)合或聯(lián)合大劑量靜脈丙種球蛋白,劑量為0.4 g·kg·1-d-1,3～5d,后改為口服潑尼松,劑量為1mg·kg-1·d-1,并據(jù)療效逐步減量,維持治療一個(gè)月以上,期間監(jiān)測(cè)血常規(guī),觀察療效。療效的具體判斷標(biāo)準(zhǔn)為：①完全反應(yīng)(CR)：治療后血小板數(shù)_100x109/L且沒(méi)有出血；②有效(R)：治療后血小板數(shù)≥30×109/L,并且至少比基礎(chǔ)血小板數(shù)增加兩倍,且沒(méi)有出血；③無(wú)效(NR)：治療后血小板數(shù)30x109/L或者血小板數(shù)增加不到基礎(chǔ)值的兩倍或者有出血。按療效對(duì)患者分成CR、R、NR三組。研究結(jié)果1.正常人與ITP患者這兩組在性別、年齡上的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(性別：χ2=2.796,P=0.094；年齡：t=-0.352,P=0.726),但兩組血小板計(jì)數(shù)的差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,t=21.914,P0.001,ITP患者的血小板水平是明顯減低的。2.正常人及ITP患者血小板膜表面糖蛋白去唾液酸化水平(ECL, RCA-1)的差異有著顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001),ITP患者血小板的膜表面糖蛋白去唾液酸化水平是明顯增高的。3.61例ITP患者按療效分成CR、R、NR三組,運(yùn)用Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)方法分析,上述三組ECL、RCA-1水平的比較,差異具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.01。血小板去唾液酸化水平與ITP一線治療療效的spearman相關(guān)系數(shù)分析提示二者是相關(guān)的,ECL (r=0.391, P=0.002), RCA-1 (r=0.395, P=0.002),提示去唾液酸化的指標(biāo)越高,療效越差。4.因標(biāo)本留置問(wèn)題,本實(shí)驗(yàn)中的61例ITP患者中僅29例患者進(jìn)行了改良MAIPA方法檢測(cè),對(duì)這29例ITP患者按照抗GPⅠbα抗體陽(yáng)性組、抗GPⅡb /Ⅲa抗體單陽(yáng)性組及雙抗體陰性組分為3組,運(yùn)用Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)方法分析,各組ECL及RCA-1的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05。5.其他疾病對(duì)照組患者血小板膜表面糖蛋白去唾液酸化水平分析：風(fēng)濕免疫系統(tǒng)疾病、MDS、AA和AML其他疾病對(duì)照組的血小板膜表面糖蛋白去唾液酸化水平與正常對(duì)照組比較均有不同程度的升高(P0.05),而AML組的去唾液酸化水平與正常對(duì)照組比較無(wú)顯著差異(P0.05)。包括ITP在內(nèi)的五個(gè)疾病組之間去唾液酸化水平存在差異(P0.05)。其中ITP、風(fēng)濕病及MDS去唾液酸化水平均較高。結(jié)論1.ITP患者血小板膜糖蛋白去唾液酸化水平較正常人明顯升高；2.ITP患者血小板膜糖蛋白去唾液酸化水平與一線治療療效相關(guān),隨著ITP患者血小板膜糖蛋白去唾液酸化水平的提高,患者的一線治療療效越差,肝臟內(nèi)的血小板破壞在ITP的發(fā)病機(jī)制中占有重要地位,支持了ITP患者血小板清除的非Fc受體依賴(lài)途徑,利于對(duì)患者病情的判斷,治療方案的考慮選擇,為應(yīng)用神經(jīng)氨酸酶抑制劑治療ITP的提供了可能性；3.由于進(jìn)行抗GPⅠbα抗體與ITP患者血小板膜糖蛋白去唾液酸化相關(guān)性分析的病例數(shù)較少,各抗體分組的ITP患者去唾液酸化水平無(wú)差異,但是在兩組去唾液酸化水平的統(tǒng)計(jì)圖上可以看到存在抗GPⅠbα抗體組的去唾液酸化水平有略高的趨勢(shì),由于這組數(shù)據(jù)較少,抗GPⅠbα抗體與去唾液酸化水平以及最終一線治療療效的關(guān)系有待后續(xù)擴(kuò)大樣本量進(jìn)行研究。4.風(fēng)濕病組、MDS組、AA組的血小板膜糖蛋白去唾液酸化水平與正常對(duì)照組比較均有不同程度的升高,而AML組的去唾液酸化水平與正常對(duì)照組比較無(wú)顯著差異。ITP組的去唾液酸化水平與其他疾病對(duì)照組中的風(fēng)濕病組、MDS組及AA組的去唾液酸化水平相當(dāng),與AL組比較存在差異,需要考慮風(fēng)濕病、MDS及AA這三組疾病在血小板減少的發(fā)病機(jī)制中的相似性,可能都存在去唾液酸化作用導(dǎo)致的血小板破壞清除過(guò)程。
【關(guān)鍵詞】：免疫性血小板減少癥 糖蛋白 Ibα 去唾液酸化 自身抗體
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R558.2
【目錄】：

• 英文縮略詞表6-9
• 中文摘要9-13
• ABSTRACT13-20
• 1 引言20-34
• 1.1 原發(fā)免疫性血小板減少癥(ITP)概述20-24
• 1.1.1 ITP簡(jiǎn)介20-22
• 1.1.2 ITP發(fā)病機(jī)制22-24
• 1.2 血小板膜糖蛋白(GP)概述24-29
• 1.2.1 GP簡(jiǎn)介24-25
• 1.2.2 血小板膜GP的結(jié)構(gòu)、種類(lèi)和分布25-28
• 1.2.3 血小板膜GP與ITP28-29
• 1.3 抗血小板膜GP抗體概述29-31
• 1.3.1 抗血小板膜GP抗體種類(lèi)30
• 1.3.2 抗血小板膜GP抗體和ITP30-31
• 1.4 神經(jīng)氨酸酶(NEU)概述31-33
• 1.4.1 NEU132
• 1.4.2 NEU1與ITP32-33
• 1.5 本研究的立項(xiàng)與意義33-34
• 2 材料與方法34-42
• 2.1 主要儀器和設(shè)備34
• 2.2 主要試劑及耗材34-35
• 2.3 研究對(duì)象的選擇及分組35-37
• 2.4 實(shí)驗(yàn)方法及步驟37-40
• 2.4.1 標(biāo)本采集37
• 2.4.2 流式細(xì)胞術(shù)(FCM)分析37-39
• 2.4.3 改良單克隆抗體特異性俘獲血小板抗原法(MAIPA)分析39-40
• 2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理40-42
• 3 結(jié)果42-51
• 4 討論51-63
• 5 結(jié)論63-65
• 6 參考文獻(xiàn)65-76
• 7 附錄76-78
• 致謝78-79
• 綜述79-85
• 參考文獻(xiàn)83-85

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