本文關(guān)鍵詞：載STAT3 decoy ODN固體脂質(zhì)納米粒對人卵巢癌靶向治療的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景卵巢癌是常見的女性生殖系統(tǒng)三大惡性腫瘤之一,在婦科惡性腫瘤中其死亡率高居首位。卵巢癌發(fā)病隱匿,早期不容易被發(fā)現(xiàn),約70%的患者就診時已進展到晚期。盡管目前在卵巢癌的臨床治療方案、手術(shù)技巧和新型化療藥物等方面都取得了一些進步和陸續(xù)投入臨床使用,但卵巢癌的病死率仍然高居不下,5年生存率很低,Ⅲ期和Ⅳ期患者的5年生存率僅有29%和13%。因此,探討卵巢癌的發(fā)生發(fā)展機制、尋找新型的合理有效的治療方法,對于改善卵巢癌的預(yù)后具有重要的臨床意義。隨著基因轉(zhuǎn)移技術(shù)的日趨成熟,基因治療成為生物科學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)的研究熱點之一。目前腫瘤基因治療存在兩大方面難題：(1)尋找合理、有效的靶基因；(2)尋找高效、低毒的基因載體。只有找到有效的基因靶點以及合理的載體,才能將基因治療真正應(yīng)用到疾病的臨床治療中,為人類最終攻克腫瘤提供新的思路。信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3 (signal transducer and activator of transcription 3, STAT3)是Janus蛋白酪氨酸激酶/信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子(Janus kinase/signal transducer and activator of transcription, JAK/STAT)信號通路中一個重要的核轉(zhuǎn)錄因子,參與細(xì)胞信號傳導(dǎo)的過程,由細(xì)胞因子、生長因子等多肽類配體激活。STAT3在多種腫瘤細(xì)胞系與腫瘤組織中呈持續(xù)激活狀態(tài)。STAT3的持續(xù)激活與腫瘤細(xì)胞的增殖分化、血管生成、侵襲轉(zhuǎn)移、免疫和惡性轉(zhuǎn)化等過程密切相關(guān),目前已被定義為癌基因,是腫瘤基因治療的一個有發(fā)展前景的新靶點。轉(zhuǎn)錄因子誘騙技術(shù)是一種阻斷基因轉(zhuǎn)錄的有效方法。體外合成誘騙寡核苷酸(decoy oligodeoxynucleotides, decoy ODN)轉(zhuǎn)染細(xì)胞后,可以競爭性抑制特定轉(zhuǎn)錄因子與靶基因DNA序列上的相應(yīng)順式元件結(jié)合,阻止靶基因的轉(zhuǎn)錄,是目前基因治療重要策略之一。具有易合成、成本低、穩(wěn)定性高、特異性強等優(yōu)點,已應(yīng)用于肺癌、卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌和神經(jīng)膠質(zhì)瘤等多種腫瘤的研究中。然而,裸露的基因序列易被核酸酶降解,轉(zhuǎn)染效率很低。尋找一種安全高效的基因載體是基因治療面臨的一個至關(guān)重要的問題。固體脂質(zhì)納米粒(Cationic solid lipid nanoparticles, SLN)是新一代的納米給藥系統(tǒng),以天然或者合成類脂為材料,具備生物相容性好、安全性高、靶向性強以及較好的核苷酸保護作用和控制所包裹的藥物釋放等優(yōu)點,成本較低且可進行大規(guī)模生產(chǎn)。被作為藥物新劑型研發(fā)的基礎(chǔ),目前已越來越多的應(yīng)用于多種藥物給藥系統(tǒng)。SLN作為基因載體是目前納米技術(shù)研究的熱點之一。本課題旨在以STAT3為靶點、以陽離子固體脂質(zhì)納米粒為載體,構(gòu)建載STAT3 decoy ODN陽離子固體脂質(zhì)納米粒復(fù)合物,通過體內(nèi)外的實驗研究探討其對卵巢癌的靶向治療作用及機制。第一部分 載STAT3誘騙寡核苷酸陽離子固體脂質(zhì)納米粒的制備及表征研究目的：1.制備空白陽離子固體脂質(zhì)納米粒(SLN)并檢測其粒徑、表面電位、穩(wěn)定性等特征。2.探討SLN對卵巢癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性。3.制備載STAT3誘騙寡核苷酸陽離子固體脂體納米粒(SLN-STAT3 decoy ODN).檢測其粒徑、表面電位等特征。研究方法：1.采用單硬脂酸甘油酯和卵磷脂為脂質(zhì)材料,以十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)為表面活性劑,采用溶劑擴散法制備空白SLN。2.將制備的SLN與適當(dāng)比例的STAT3 decoy ODN復(fù)合,制備SLN-STAT3 decoyODN,采用瓊脂糖凝膠阻滯分析法驗證SLN-STAT3 decoy ODN的形成。3.采用透射電鏡觀察SLN和SLN-STAT3 decoy ODN的形態(tài)特征,采用DelsaTM Nano粒度測定儀測定其粒徑和表面電位。4.采用MTT法檢測SLN對卵巢癌細(xì)胞系SKOV3和A2780的細(xì)胞毒性。研究結(jié)果：1.SLN及SLN-STAT3 decoy ODN的形態(tài)、粒徑和Zeta電位成功制備CTAB修飾的空白SLN與SLN-STAT3 decoy ODN。電鏡下見空白SLN和SLN-STAT3 decoy ODN均呈規(guī)則的球體或者類球體。所制備的空白SLN和SLN-STAT3 decoy ODN粒徑較小(分別為67.53±7.74 nm，，101.30±11.89nm),粒度分布較窄(多分散指數(shù)分別為0.25±0.04,0.24±0.03),表面呈正電位(zeta電位分別為44.18 ± 3.12 mV,20.03 ±0.93mV)。2.SLN對卵巢癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性檢測：與空白處理組相比,在實驗所考察的SLN濃度范圍內(nèi),卵巢癌細(xì)胞SKOV3和A2780的細(xì)胞存活率隨SLN的濃度增加而降低,但統(tǒng)計學(xué)分析無明顯差異(P0.05)；與商品化的脂質(zhì)體LipofectamineTM 2000 (Lipo)組相比,SLN各處理組的細(xì)胞存活率明顯高于Lipo組(P0.05)。3.SLN的穩(wěn)定性考察SLN在4℃的條件下保存,4周之內(nèi)平均粒徑保持在59.44-67.53nm之間,穩(wěn)定性較好。4.復(fù)合物凝膠電泳阻滯分析隨著SLN量的增加,SLN與STAT3 decoy ODN的縮合越完全。當(dāng)SLN和STAT3 decoy ODN的質(zhì)量比為20：1時,二者基本完全縮合。研究結(jié)論：1.成功制備了SLN載體體系和SLN-STAT3 decoy ODN復(fù)合物。2.SLN生物安全性好,對卵巢癌細(xì)胞SKOV3和A2780無明顯的細(xì)胞毒性。第二部分 SLN-STAT3 decoy ODN復(fù)合物靶向阻斷STAT3對人卵巢癌細(xì)胞體外抑制作用及機制研究研究目的：1.檢測卵巢癌細(xì)胞對SLN-STAT3 decoy ODN的攝取能力。2.檢測SLN-STAT3 decoy ODN在體外對卵巢癌細(xì)胞的生長抑制作用。3.探討SLN-STAT3 decoy ODN在體外對卵巢癌細(xì)胞凋亡、自噬和侵襲遷移能力的影響。研究方法：1.應(yīng)用SLN-STAT3 decoy ODN轉(zhuǎn)染卵巢癌細(xì)胞SKOV3和A2780,采用熒光顯微鏡及流式細(xì)胞術(shù)檢測FITC標(biāo)記的SLN-STAT3 decoy ODN在卵巢癌細(xì)胞中的細(xì)胞攝取情況,Western blot法檢測STAT3, p-STAT3蛋白的表達情況。采用商品化的LipofectamineTM 2000 (Lipo)介導(dǎo)STAT3 decoy ODN的轉(zhuǎn)染作為陽性對照。2.MTT法檢測SLN-STAT3 decoy ODN (0,12.5,25,50nmol/L)轉(zhuǎn)染卵巢癌細(xì)胞SKOV3和A2780后不同時間(24h,48h,72h)的細(xì)胞存活率。檢測轉(zhuǎn)染48h后,不同處理組(NC, SLN, SLN-STAT3 decoy ODN, Lipo-STAT3 decoy ODN, naked STAT3 decoy ODN, SLN-STAT3 scrambled ODN, Lipo)的細(xì)胞存活率。3.Annexin V-FITC/PI雙染色法檢測SLN-STAT3 decoy ODN對卵巢癌細(xì)胞凋亡的影響；Western blot法檢測SLN-STAT3 decoy ODN對卵巢癌細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達的影響。4.透射電鏡下觀察SLN-STAT3 decoy ODN轉(zhuǎn)染卵巢癌細(xì)胞后細(xì)胞內(nèi)自噬體及自噬溶酶體的形態(tài)。吖啶橙染色檢測SLN-STAT3 decoy ODN對卵巢癌細(xì)胞自噬水平的影響。Western blot法檢測SLN-STAT3 decoy ODN對卵巢癌細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白表達的影響。5.采用細(xì)胞劃痕實驗檢測SLN-STAT3 decoy ODN對卵巢癌細(xì)胞遷移能力的影響。采用Transwell侵襲小室實驗檢測SLN-STAT3 decoy ODN對卵巢癌細(xì)胞侵襲能力的影響。Western blot法檢測SLN-STAT3 decoy ODN對卵巢癌細(xì)胞侵襲遷移相關(guān)蛋白表達的影響。研究結(jié)果：1.卵巢癌細(xì)胞攝取SLN-STAT3 decoy ODN的能力檢測在熒光顯微鏡下FITC標(biāo)記的SLN-STAT3 decoy ODN呈綠色熒光。當(dāng)轉(zhuǎn)染濃度為25nmol/L時,轉(zhuǎn)染48h后SLN-STAT3 decoy ODN在SKOV3和A2780細(xì)胞中的攝取率分別為(80.00±2.97)%和(70.73±9.49)%。與裸STAT3 decoy ODN組(SKOV3 7.09±1.72%, A2780 4.30±1.44%)相比細(xì)胞攝取率顯著提高(P0.01)。與Lipo-STAT3 decoy ODN在兩細(xì)胞系中的攝取率相當(dāng),無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。轉(zhuǎn)染48h后,空白對照組(NC)、陰性對照SLN-STAT3 scrambledODN組、實驗組SLN-STAT3 decoy ODN組和陽性對照Lipo-STAT3 decoy ODN組中STAT3, p-STAT3(Tyr705)、p-STAT3(Ser727)蛋白表達無明顯改變。2. SLN-STAT3 decoy ODN對卵巢癌細(xì)胞的生長抑制作用SLN-STAT3 decoy ODN對卵巢癌細(xì)胞的生長抑制作用呈現(xiàn)時間和濃度依賴性。當(dāng)SLN-STAT3 decoy ODN濃度為25nmol/L時,轉(zhuǎn)染24h,48h,72h后,SKOV3細(xì)胞的細(xì)胞存活率為(75.14±3.82)%,(65.25±0.9)%,(59.92±0.98)%；A2780細(xì)胞的存活率為(80.89±3.26)%,(64.07±2.76)%,(62.92±2.09)%。在兩細(xì)胞系中,SLN-STAT3 decoy ODN組與Lipo-STAT3 decoy ODN組細(xì)胞存活率幾乎等同,無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),但與其他5個對照組相比,細(xì)胞存活率明顯降低,差異具有顯著性(P0.05)。3. SLN-STAT3 decoy ODN對卵巢癌細(xì)胞凋亡的影響轉(zhuǎn)染濃度為25nmol/L時,將空白組(NC), SLN-STAT3 decoy ODN組,裸STAT3 decoy ODN組,Lipo-STAT3 decoy ODN組,SLN-STAT3 scrambled ODN組及SLN組在轉(zhuǎn)染細(xì)胞48h后,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞的凋亡情況。結(jié)果顯示SLN-STAT3 decoy ODN組、Lipo-STAT3 decoy ODN組細(xì)胞凋亡率顯著高于空白對照組(P0.01),但兩組之間無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。裸STAT3 decoyODN組,SLN-STAT3 scrambled ODN組及SLN組的細(xì)胞凋亡率與空白對照組無明顯差異(P0.05)。將SLN-STAT3 decoy ODN, Lipo-STAT3 decoy ODN和SLN-STAT3 scrambledODN轉(zhuǎn)染SKOV3和A2780細(xì)胞48h后,采用western blot方法檢測細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白的表達情況。結(jié)果顯示：與NC組和SLN-STAT3 scrambled ODN組相比,SLN-STAT3 decoy ODN組和Lipo-STAT3 decoy ODN組中的Bcl-2, pro caspases 3和Survivin表達下調(diào),而Bax和cleaved caspase 3表達上調(diào)。4. SLN-STAT3 decoy ODN對卵巢癌細(xì)胞自噬的影響SLN-STAT3 decoy ODN以25nmol/L濃度轉(zhuǎn)染細(xì)胞48h后,透射電鏡下在SKOV3和A2780細(xì)胞中可以見到大量的自噬相關(guān)空泡(自噬體和自噬溶酶體)的形成,高倍鏡下可以見到雙層膜環(huán)繞的自噬空泡以及包裹著細(xì)胞器的自噬空泡。吖啶橙染色后,熒光顯微鏡下SLN-STAT3 decoy ODN組細(xì)胞內(nèi)可見大量的紅色熒光區(qū)域,而NC和SLN-STAT3 scrambled ODN組細(xì)胞內(nèi)僅見少量紅色熒光區(qū)域。Western blot法檢測兩種細(xì)胞中自噬相關(guān)蛋白的表達,結(jié)果顯示：與NC組和SLN-STAT3 scrambled ODN組相比,SLN-STAT3 decoy ODN組LC3-I向LC3-Ⅱ轉(zhuǎn)化增多,Beclin-1表達上調(diào),與Lipo-STAT3 decoy ODN組一致。在兩種細(xì)胞中,p-mTOR、p-Akt表達下調(diào),而Akt總蛋白的表達水平無明顯變化,在SKOV3細(xì)胞中mmTOR表達輕微下調(diào),但差異不顯著(P0.05)。5. SLN-STAT3 decoy ODN對卵巢癌細(xì)胞侵襲遷移能力的影響5.1 SLN-STAT3 decoy ODN對卵巢癌細(xì)胞遷移能力的影響SLN-STAT3 decoy ODN以25nmol/L濃度轉(zhuǎn)染細(xì)胞后,待細(xì)胞生長至90%左右融合時,行細(xì)胞劃痕實驗,分別于24h和48h顯微鏡下觀察。結(jié)果顯示：SLN-STAT3 decoy ODN組在劃痕后24h和48h的相對劃痕寬度明顯大于NC組和SLN-STAT3 scrambled ODN組(P0.05),與Lipo-STAT3 decoy ODN組相比差異不明顯(P0.05)。SLN-STAT3 decoy ODN轉(zhuǎn)染細(xì)胞后,SKOV3和A2780細(xì)胞的遷移能力顯著下降。5.2 SLN-STAT3 decoy ODN對卵巢癌細(xì)胞侵襲能力的影響以25nmol/L濃度轉(zhuǎn)染SKOV3和A2780細(xì)胞48h后,Transwell侵襲實驗顯示,SLN-STAT3 decoy ODN組穿過聚碳酸酯膜的細(xì)胞數(shù)目明顯減少,與NC組和SLN-STAT3 scrambled ODN組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),與Lipo-STAT3 decoy ODN比無顯著差異(P0.05)。提示SLN-STAT3 decoy ODN可顯著抑制SKOV3和A2780細(xì)胞的體外侵襲能力。5.3 SLN-STAT3 decoy ODN對卵巢癌細(xì)胞侵襲相關(guān)蛋白表達的影響SLN-STAT3 decoy ODN, Lipo-STAT3 decoy ODN和SLN-STAT3 scrambledODN轉(zhuǎn)染SKOV3和A2780細(xì)胞48h后,與NC組和SLN-STAT3 scrambled ODN組相比,SLN-STAT3 decoy ODN組細(xì)胞中E-cadherin表達上調(diào),而Snail, MMP-9表達下調(diào)。研究結(jié)論：1. SLN-STAT3 decoy ODN能夠被卵巢癌細(xì)胞SKOV3和A2780高效攝取。2. SLN-STAT3 decoy ODN能夠抑制卵巢癌細(xì)胞的生長,誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞發(fā)生凋亡和自噬性細(xì)胞死亡,抑制卵巢癌細(xì)胞的侵襲和遷移能力。3. SLN-STAT3 decoy ODN有望成為卵巢癌基因治療的新策略。第三部分 SLN-STAT3 decoy ODN復(fù)合物靶向阻斷STAT3對人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的治療作用及機制研究研究目的：1.建立人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,探討SLN-STAT3 decoy ODN對荷瘤裸鼠的體內(nèi)抗瘤效應(yīng)。2.探討SLN-STAT3 decoy ODN體內(nèi)抗瘤效應(yīng)的機制。3.探討SLN-STAT3 decoy ODN在裸鼠體內(nèi)應(yīng)用的安全性。研究方法：1.采用皮下注射法將人卵巢癌細(xì)胞SKOV3接種到裸鼠右側(cè)肩部皮下,建立裸鼠卵巢癌移植瘤模型。2.接種后第14天,可觸及裸鼠皮下腫瘤結(jié)節(jié)時,將裸鼠隨機分為四組,每組5只,分別給予PBS, SLN-STAT3 scrambled ODN, naked STAT3 decoy ODN和SLN-STAT3 decoy ODN隔日進行瘤內(nèi)多點注射,連續(xù)處理30天。每4日測量腫瘤體積。3.治療結(jié)束后,取裸鼠腫瘤組織、心臟、肝臟及腎臟,制作石蠟切片,行HE染色,顯微鏡下觀察。取裸鼠血液,檢測SLN-STAT3 decoy ODN對血常規(guī),肝腎功能的影響。4.TUNEL法檢測SLN-STAT3 decoy ODN在裸鼠體內(nèi)對卵巢癌細(xì)胞凋亡的影響。5.透射電鏡下觀察裸鼠腫瘤組織的超微結(jié)構(gòu)。6. Western blot法檢測SLN-STAT3 decoy ODN對裸鼠腫瘤組織中凋亡、自噬和侵襲相關(guān)蛋白表達的影響。研究結(jié)果：1. SLN-STAT3 decoy ODN對裸鼠皮下移植瘤的生長抑制作用接種人卵巢癌細(xì)胞SKOV3后14天左右,在裸鼠注射部位均可觸及結(jié)節(jié),大小不等,邊界不清,質(zhì)韌；全部成瘤。治療結(jié)束后,PBS組,SLN-STAT3 scrambledODN組,naked STAT3 decoy ODN組和SLN-STAT3 decoy ODN組的腫瘤平均體積分別為(1033.92±310.30) mm3, (909.61±124.19) mm3, (296.67±66.23) mm3,(185.43-27.76)mm3。統(tǒng)計學(xué)分析顯示,SLN-STAT3 decoy ODN組和：naked STAT3 decoy ODN組的腫瘤體積明顯小于其他兩個對照組(P0.01),而SLN-STAT3 decoy ODN組的腫瘤體積比naked STAT3 decoy ODN組減小更顯著(P0.01)。摘除腫瘤組織后稱重,SLN-STAT3 decoy ODN組和naked STAT3 decoy ODN組的腫瘤重量明顯低于其他兩個對照組(P0.01),而SLN-STAT3 decoy ODN組的腫瘤重量比naked STAT3 decoy ODN組降低更明顯(P0.01)。2. SLN-STAT3 decoy ODN在裸鼠體內(nèi)對卵巢癌細(xì)胞STAT3表達的影響Western blot結(jié)果顯示,PBS, SLN-STAT3 scrambled ODN, naked STAT3 decoyODN和SLN-STAT3 decoy ODN治療組腫瘤組織中STAT3, p-STAT3(Tyr705)、 p-STAT3(Ser727)表達無明顯差異。3. SLN-STAT3 decoy ODN在裸鼠體內(nèi)對卵巢癌細(xì)胞凋亡的影響TUNEL法檢測結(jié)果顯示,PBS組,SLN-STAT3 scrambled ODN組,STAT3 decoy ODN組和SLN-STAT3 decoy ODN組每高倍鏡視野中凋亡細(xì)胞數(shù)分別為(13±4)個,(13+3)個,(34±4)個,(48±8)個。統(tǒng)計學(xué)分析顯示,SLN-STAT3 decoy ODN組和naked STAT3 decoy ODN組的凋亡細(xì)胞數(shù)高于其他兩個對照組(P0.01),而SLN-STAT3 decoy ODN組比naked STAT3 decoy ODN組的凋亡細(xì)胞數(shù)的增高更顯著(P0.01)。Western blot結(jié)果顯示,SLN-STAT3 decoy ODN和naked STAT3 decoy ODN在體內(nèi)能夠下調(diào)pro-caspase 3, Bcl-2和Survivin的表達,上調(diào)cleaved caspase 3和Bax的表達。SLN-STAT3 decoy ODN比naked STAT3 decoy ODN對蛋白表達的影響更明顯。4. SLN-STAT3 decoy ODN在裸鼠體內(nèi)對卵巢癌細(xì)胞自噬的影響透射電鏡下觀察發(fā)現(xiàn),SLN-STAT3 decoy ODN組裸鼠腫瘤組織中可以見到較多的自噬細(xì)胞,細(xì)胞質(zhì)中含有多個膜狀結(jié)構(gòu)的自噬空泡(自噬體或自噬溶酶體),位于胞核周圍,有些自噬空泡內(nèi)包裹著細(xì)胞器和蛋白酶等顆粒。Western blot結(jié)果顯示,與PBS組和SLN-STAT3 scrambled ODN組相比,SLN-STAT3 decoy ODN組和：naked STAT3 decoy ODN組細(xì)胞的LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ轉(zhuǎn)化增多,Beclin-1表達上調(diào),SLN-STAT3 decoy ODN組的上調(diào)更顯著。四組腫瘤組織中Akt總蛋白的表達無明顯變化,mTOR總蛋白表達輕微下調(diào),但差異不顯著(P0.05)。SLN-STAT3 decoy ODN和naked STAT3 decoy ODN組中p-Akt和p-mTOR的表達明顯減少,SLN-STAT3 decoy ODN組下降水平更明顯。5. SLN-STAT3 decoy ODN在裸鼠體內(nèi)對腫瘤侵襲的影響治療結(jié)束后,剝離腫瘤組織的過程中,PBS組和SLN-STAT3 scrambled ODN組的腫瘤與周圍組織粘連更密切,分界不清,表現(xiàn)出更強的侵襲性。SLN-STAT3 decoy ODN和naked STAT3 decoy ODN組腫瘤容易剝離。HE染色后,PBS組和SLN-STAT3 scrambled ODN組可見腫瘤明顯侵及周圍的結(jié)締組織和肌肉組織。Western blot結(jié)果顯示,與PBS組和SLN-STAT3 scrambled ODN組相比,SLN-STAT3 decoy ODN和naked STAT3 decoy ODN組中MMP-9和VEGF的表達顯著下調(diào)。同時抑制了EMT的間質(zhì)標(biāo)志物N-cadherin和Vimentin及EMT調(diào)節(jié)因子Snail的表達,并伴有上皮性標(biāo)志物E-cadherin表達的上調(diào)。SLN-STAT3 decoy ODN組比裸STAT3 decoy ODN注射組對蛋白表達的影響更顯著。6. SLN-STAT3 decoy ODN對荷瘤裸鼠腫瘤組織以及心、肝、腎的影響SLN-STAT3 decoy ODN組裸鼠腫瘤組織的HE染色顯示,腫瘤細(xì)胞核大、深染,排列無序雜亂；腫瘤組織內(nèi)部見有壞死灶。HE染色顯示各組裸鼠的心臟、肝臟和腎臟均未見明顯的組織學(xué)異常改變。血常規(guī)檢測結(jié)果顯示：SLN-STAT3 decoy ODN組的紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血紅蛋白和血小板的水平與PBS組相比無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。SLN-STAT3 decoy ODN組的ALT, AST及SCr水平較PBS組有所升高,但差異無明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05). SLN-STAT3 decoy ODN組的BUN水平與PBS組相比無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。研究結(jié)論：1. SLN-STAT3 decoy ODN對人卵巢癌裸鼠移植瘤的生長有抑制作用。2. SLN-STAT3 decoy ODN可以在裸鼠體內(nèi)誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞的凋亡和自噬性細(xì)胞死亡,抑制腫瘤組織的侵襲轉(zhuǎn)移。3. SLN-STAT3 decoy ODN在裸鼠體內(nèi)無明顯的骨髓抑制作用和心、肝、腎毒性。
【關(guān)鍵詞】：STAT3 陽離子固體脂質(zhì)納米粒 SLN 卵巢癌 基因治療
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要8-18
• 英文摘要18-28
• 符號說明28-32
• 研究背景32-39
• 第一部分 載STAT3誘騙寡核苷酸陽離子固體脂質(zhì)納米粒的制備及表征39-61
• 前言39-40
• 材料與方法40-46
• 結(jié)果46-48
• 討論48-51
• 結(jié)論51-52
• 附圖表52-55
• 參考文獻55-61
• 第二部分 SLN-STAT3 decoy ODN復(fù)合物靶向阻斷STAT3對人卵巢癌細(xì)胞體外抑制作用及機制研究61-109
• 前言61-67
• 材料與方法67-76
• 結(jié)果76-82
• 討論82-89
• 結(jié)論89-90
• 附圖表90-99
• 參考文獻99-109
• 第三部分 SLN-STAT3 decoy ODN復(fù)合物靶向阻斷STAT3對人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的治療作用及機制研究109-137
• 前言109-111
• 材料與方法111-117
• 結(jié)果117-121
• 討論121-125
• 結(jié)論125-126
• 附圖表126-134
• 參考文獻134-137
• 全文總結(jié)137-138
• 致謝138-139
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文139-140
• 英文文章一140-165
• 英文文章二165-181
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表181

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 國華,梁華平,呂鳳林,徐祥,安兵,郝天智,王付龍,楊文軍;Effect of decoy-oligodeoxynucleotides on expression of inflammation mediators in pMΦ cells from rats[J];Chinese Journal of Traumatology;2003年06期

2 宋淑亞;;核轉(zhuǎn)錄因子decoy及其抗腫瘤的研究進展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2006年23期

3 郭風(fēng)勁;張衣北;陳安民;;Effect of Stathmin Decoy-oligodeoxynucleotides on the Proliferation and Differentiation of Precartilainous Stem Cells[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2007年05期

4 胡豫,王華芳,孫望強,謝長生,魏文寧,鄭金娥,姚軍霞;聚乳酸納米粒介導(dǎo)decoy片段調(diào)控大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞組織因子表達的體外研究[J];中華血液學(xué)雜志;2005年09期

5 王雪根,葉青,陳武領(lǐng),馮瑩,韋策,劉暉,歐陽平凱;以轉(zhuǎn)錄因子AP1為靶的decoy核酸體內(nèi)外抗腫瘤研究[J];生物化學(xué)與生物物理進展;2004年01期

6 王林林,魏文寧,胡豫,宋善俊;NF-κB decoy對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞組織因子表達及凝血因子Ⅶ激活抑制作用研究[J];中華血液學(xué)雜志;2003年03期

7 ;Prolongation of liver allograft survival by dendritic cells modified with NF_(-k)B decoy oligodeoxynucleotides[J];World Journal of Gastroenterology;2004年16期

8 ;Overexpression of decoy receptor 3 in hepatocellular carcinoma and its association with resistance to Fas ligand-mediated apoptosis[J];World Journal of Gastroenterology;2005年38期

9 ;Expression of tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand receptor in glioblastoma[J];Neural Regeneration Research;2008年05期

10 謝雙倫;王景峰;聶如瓊;袁沃亮;李飛;林茂歡;;以轉(zhuǎn)錄因子AP-1為靶點的decoy ODNs對大鼠心肌成纖維細(xì)胞增殖及膠原合成的抑制作用[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2008年05期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 王華芳;胡豫;周薇;魏文寧;;NF-κB decoy納米粒調(diào)控鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞組織因子表達的體外研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國血液學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

2 SONG Zhi-yong;XIAO Huai-tie;ZHU Yi-long;LU Zai-qi;;Discriminate the Decoy and Target Using Frequency Profile Modeling in the Radar Terminal Guidance[A];Proceedings of 2011 3rd International Conference on Signal Processing Systems(ICSPS 2011)[C];2011年

3 甘衛(wèi)華;陳榮華;丁桂霞;潘曉勤;費莉;;AP-1decoy寡核苷酸對腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化生長因子β_1和白細(xì)胞介素-1β基因及蛋白表達的影響[A];“中華醫(yī)學(xué)會腎臟病學(xué)分會2004年年會”暨“第二屆全國中青年腎臟病學(xué)術(shù)會議”論文匯編[C];2004年

4 孫曉霞;張建;張彩;田志剛;;應(yīng)用decoy寡聚核苷酸阻斷STAT3對人類肝癌細(xì)胞增殖抑制的研究[A];第六屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會論文集[C];2008年

5 史梅;史偉峰;;Decoy靶向抑制STAT3對肝癌細(xì)胞HepG2的作用研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國中青年檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2012年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 馬延慧;載STAT3 decoy ODN固體脂質(zhì)納米粒對人卵巢癌靶向治療的實驗研究[D];山東大學(xué);2015年

2 黃亞冰;運用反義核酸及TF decoy技術(shù)針對豬內(nèi)皮細(xì)胞α1，3GT基因啟動子B的研究[D];華中科技大學(xué);2007年

3 鐘榮德;脂質(zhì)體介導(dǎo)NF-κB decoy ODN對大鼠重癥急性胰腺炎的影響[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2007年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張世新;Sp1圈套寡核苷酸抑制NIH3T3細(xì)胞增殖和Ⅰ型膠原基因表達[D];上海交通大學(xué);2008年

  本文關(guān)鍵詞：載STAT3 decoy ODN固體脂質(zhì)納米粒對人卵巢癌靶向治療的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：319973