目的:敲減vps13d基因,觀察匹羅卡品急性癲癇大鼠模型的行為學(xué)改變,檢測(cè)敲減vps13d基因干預(yù)后對(duì)DRP1、LC3II及P62蛋白的表達(dá)影響,探索VPS13D是否通過(guò)調(diào)控線(xiàn)粒體分裂及自噬功能參與大鼠癲癇發(fā)作及其相關(guān)機(jī)制。方法:選取健康成年雄性SD大鼠,構(gòu)建vps13d基因敲減慢病毒質(zhì)粒、應(yīng)用腦立體定位儀將慢病毒質(zhì)粒定位注射到大鼠海馬組織,建立vps13d基因敲減病毒大鼠模型,腹腔注射DRP1抑制劑Mdivi-1、構(gòu)建DRP1抑制劑大鼠模型,干預(yù)處理后將所有大鼠全部誘發(fā)為匹羅卡品急性癲癇模型。隨機(jī)分為6個(gè)組:正常對(duì)照組（n=8）、癲癇模型組（n=8）、vps13d基因敲減組（n=8）、空病毒組（n=8）、Mdivi-1組（n=8）、DMSO對(duì)照組（n=8）。急性癲癇模型建立成功后,觀察大鼠首次癲癇發(fā)作的潛伏期時(shí)間,單位時(shí)間內(nèi)大鼠癲癇發(fā)作（Racine評(píng)分4級(jí)及以上）的次數(shù),統(tǒng)計(jì)分析并比較各組大鼠癲癇發(fā)作程度。通過(guò)HE染色法觀察大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化,透射電鏡觀察大鼠海馬線(xiàn)粒體超微結(jié)構(gòu)的改變,免疫組化、免疫熒光檢測(cè)VPS13D在正常對(duì)照及癲癇模型組大鼠海馬組織的亞細(xì)胞定位及表達(dá)情... 

【文章來(lái)源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁(yè)數(shù)】：58 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞HE染色Fig1HEstaininginhippocampusnervecellofrats

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文王建25圖2大鼠海馬組織VPS13D免疫組化定位及半定量分析Fig2Immunohistochemicallocalizationandsemi-quantitativeanalysisofVPS13DinhippocampusofratsNote:*ComparedwiththecongroupP＜0.05.2.3免疫熒光檢測(cè)大鼠腦組織VPS13D定位及半定量表達(dá)我們利用免疫熒光技術(shù)對(duì)大鼠海馬和皮層的VPS13D進(jìn)行定位，結(jié)果顯示（如圖3A所示）：VPS13D（綠色熒光）主要表達(dá)于大鼠海馬和皮層神經(jīng)細(xì)胞，與神經(jīng)元標(biāo)記物MAP2（紫色熒光）共表達(dá)（白色箭頭所示），不與星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物GFAP（紅色熒光）共表達(dá)。正常對(duì)照組與癲癇模型組大鼠海馬組織CA1區(qū)、CA3區(qū)及大鼠cortex區(qū)神經(jīng)元均有表達(dá)（如圖3B所示，標(biāo)尺：50μm），我們對(duì)兩組大鼠海馬CA1區(qū)、CA3區(qū)及皮質(zhì)區(qū)VPS13D熒光信號(hào)強(qiáng)度絕對(duì)值進(jìn)行半定量統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果顯示（如圖3C所示）：癲癇模型組大鼠海馬組織VPS13D熒光信號(hào)強(qiáng)度絕對(duì)值降低，與正常對(duì)照組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.05）。AB

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文王建26圖3大鼠海馬及皮層VPS13D免疫熒光定位及半定量分析Fig3Immunofluorescencelocalizationandsemi-quantitativeanalysisofVPS13DinhippocampusandcortexofratsNote:*ComparedwiththecongroupP＜0.05.2.4透射電鏡觀察線(xiàn)粒體的超微結(jié)構(gòu)我們利用透射電鏡對(duì)正常對(duì)照組與癲癇模型組大鼠海馬組織CA1區(qū)線(xiàn)粒體的超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察，結(jié)果顯示（如圖4所示，標(biāo)尺：2μm，放大倍數(shù)：20000倍）：正常對(duì)照組大鼠海馬CA1區(qū)線(xiàn)粒體形態(tài)正常，呈橢圓形，邊界清楚，無(wú)線(xiàn)粒體嵴及膜損傷；癲癇模型組大鼠海馬組織CA1區(qū)線(xiàn)粒體形態(tài)不規(guī)則，線(xiàn)粒體膜邊緣模糊，有線(xiàn)粒體嵴損傷，線(xiàn)粒體周邊水腫明顯（黃色箭頭所示），出現(xiàn)線(xiàn)粒體分裂（紅色箭頭ABCVPS13DMAP2GFAPMerge

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Mitophagy links oxidative stress conditions and neurodegenerative diseases[J]. Ulfuara Shefa,Na Young Jeong,In Ok Song,Hyung-Joo Chung,Dokyoung Kim,Junyang Jung,Youngbuhm Huh.  Neural Regeneration Research. 2019(05)

碩士論文
[1]DRP1調(diào)控ENT1參與大鼠癲癇發(fā)作的作用及機(jī)制研究[D]. 羅忠.遵義醫(yī)學(xué)院 2018



本文編號(hào)：3126803