第一部分JAZF1在BCPAP細(xì)胞中過表達(dá)及驗(yàn)證目的:使用重組腺病毒載體（Adv-JAZF1-GFP）在BCPAP細(xì)胞中過表達(dá)JAZF1。方法:采用重組腺病毒分別感染BCPAP細(xì)胞,分為陰性對照組（NC組）、空載組（Adv-GFP組）、實(shí)驗(yàn)組（Adv-JAZF1-GFP組）,轉(zhuǎn)染48h后,分別提取各組細(xì)胞總RNA,逆轉(zhuǎn)錄合成c DNA,采用SYBR-Green I法、ABI7500、q RT-PCR二步法檢測JAZF1 m RNA的表達(dá)水平,以GAPDH作為內(nèi)參,用2-△△CT值表示基因相對表達(dá)量,采用q RT-PCR檢測各組JAZF1 m RNA表達(dá)水平;提取各組細(xì)胞總蛋白,定量各組蛋白濃度,Western blot分別檢測各組JAZF1蛋白相對表達(dá)水平。結(jié)果:重組腺病毒轉(zhuǎn)染BCPAP細(xì)胞48h后,對照組與空載組比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,實(shí)驗(yàn)組JAZF1 m RNA以及蛋白相對表達(dá)水平較對照組、空載組均明顯上調(diào)（P<0.001）。結(jié)論:成功構(gòu)建JAZF1過表達(dá)BCPAP細(xì)胞株,為進(jìn)一步研究JAZF1基因?qū)谞钕偃轭^狀癌生物學(xué)行為的影響及相關(guān)機(jī)制的研究奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。第二部分過表達(dá)J... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

顯微鏡下的BCPAP細(xì)胞（A×200倍）及Adv-JAZF1-GFP轉(zhuǎn)染48小時(shí)熒光圖（B×200倍、C×400倍）

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文熊代剛22圖1顯微鏡下的BCPAP細(xì)胞（A×200倍）及Adv-JAZF1-GFP轉(zhuǎn)染48小時(shí)熒光圖（B×200倍、C×400倍）Fig.1BCPAPcellsundermicroscope(A200x)and48hfluorescencemapofAdv-JAZF1-GFPtransfection(B200x,C400x)3.2qRT-PCR、WB檢測JAZF1mRNA的表達(dá)水平及過表達(dá)驗(yàn)證轉(zhuǎn)染48h后，提取各組細(xì)胞總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，采用SYBR-GreenI法、ABI7500、qRT-PCR二步法檢測JAZF1mRNA的表達(dá)水平，以GAPDH作為內(nèi)參，用2-△△CT值表示基因相對表達(dá)量。Adv-GFP、Adv-JAZF1-GFP轉(zhuǎn)染BPCPA細(xì)胞48h后，對照組與空載組比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，實(shí)驗(yàn)組JAZF1mRNA、蛋白相對表達(dá)水平均較對照組、空載組明顯上調(diào)（均P＜0.001），見圖1。圖2qRT-PCR、Westernblot檢測各組BCPAP細(xì)胞JAZF1相對表達(dá)水平Fig.2TherelativeexpressionofJAZF1ineachgroupBCPAPcellsbyqRT-PCRandWesternblot注：與NC組相比，***P<0.001。圖A.三組（NC組及轉(zhuǎn)染Adv-GFP或Adv-JAZF1-GFP）BCPAP細(xì)胞中JAZF1mRNA相對表達(dá)水平；圖B.三組（NC組及轉(zhuǎn)染Adv-GFP或Adv-JAZF1-GFP）BCPAP細(xì)胞中JAZF1蛋白相對表達(dá)水平。Note.Comparedwiththenegativecontrolgroup,***P<0.001.FigureA.TherelativemRNAexpressionlevelofJAZF1inNCandBCPAPcellstransfectedwithAdv-GFPorAdv-JAZF1-GFP；FigureB.RelativeproteinexpressionlevelofJAZF1inNCandBCPAPcellstransfectedwithAdv-GFPorAdv-JAZF1-GFP.

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文熊代剛283結(jié)果3.1過表達(dá)JAZF1對BCPAP細(xì)胞增殖及集落形成能力的影響MTT結(jié)果提示：與陰性對照組、空載組比較，實(shí)驗(yàn)組BCPAP細(xì)胞在24h、48h、72h時(shí)其增殖能力明顯被抑制（均P<0.01）；平板克隆形成試驗(yàn)表明實(shí)驗(yàn)組克隆形成效率較NC組、空載組明顯降低（均P<0.001），見圖2。圖3過表達(dá)JAZF1對各組BCPAP細(xì)胞增殖、克隆形成能力的影響Fig.3EffectofJAZF1overexpressiononproliferationandcloneformationofBCPAPcellsineachgroup注：與NC組相比，**P<0.01,***P<0.001。圖A.在三組BCPAP細(xì)胞中進(jìn)行的MTT實(shí)驗(yàn)及24h、48h、72h吸光度比較；圖B.在三組BCPAP細(xì)胞中進(jìn)行的克隆形成實(shí)驗(yàn)。Note.Comparedwiththenegativecontrolgroup,**P<0.01,***P<0.001.FigureA.TheMTTexperimentandthecomparisonofabsorbanceat24h,48hand72hinthreegroupsofBCPAPcells;FigureB.ColonyformationexperimentswerecarriedoutinthreegroupsofBCPAPcells.3.2過表達(dá)JAZF1對BCPAP細(xì)胞凋亡的影響AnnexinV-FITC/PI法流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率較NC組、空載組明顯增加（23.02±0.35%vs.8.63±0.40%,7.95±0.32%，均P<0.001），見圖3。圖4過表達(dá)JAZF1對各組BCPAP細(xì)胞凋亡的影響(均P<0.001)Fig.4EffectofJAZF1overexpressiononapoptosisofBCPAPcellsineachgroup(allP<0.001)A.B.

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]過表達(dá)JAZF1對甲狀腺乳頭狀癌BCPAP細(xì)胞增殖、凋亡的影響及其機(jī)制[J]. 熊代剛,侯澤宇,蔡玉懷,黃亮亮,楊艷,曾峰,程曉明.  中國比較醫(yī)學(xué)雜志. 2019(09)
[2]JAZF1對膠質(zhì)母細(xì)胞瘤侵襲和遷徙的影響及分子機(jī)制研究[J]. 歐海榮,梁仔,龍霄翱,覃木秀,楊燕飛.  中華神經(jīng)創(chuàng)傷外科電子雜志. 2019(03)
[3]The PI3K/Akt/GSK-3β/ROS/eIF2B pathway promotes breast cancer growth and metastasis via suppression of NK cell cytotoxicity and tumor cell susceptibility[J]. Fengjiao Jin,Zhaozhen Wu,Xiao Hu,Jiahui Zhang,Zihe Gao,Xiao Han,Junfang Qin,Chen Li,Yue Wang.  Cancer Biology & Medicine. 2019(01)
[4]Tip27基因在甲狀腺腫瘤組織的表達(dá)及臨床意義[J]. 馬寧,楊艷,馮輝豪,曾峰,李濤浪,方小玉,凃仕貴,程曉明.  中華實(shí)驗(yàn)外科雜志. 2017 (05)



本文編號：3123818