中藥是中華民族數(shù)千年來(lái)無(wú)數(shù)代中醫(yī)學(xué)者智慧和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)的結(jié)晶,為人類的健康做出了卓越的貢獻(xiàn),已然成為了中華文化的一部分。然而,由于中藥的超復(fù)雜組成,其作用機(jī)理暫無(wú)全面系統(tǒng)的闡釋,質(zhì)量控制難度大,阻礙中藥走向世界。因此,對(duì)中藥復(fù)雜組分進(jìn)行深入系統(tǒng)的研究成為中藥繼續(xù)發(fā)展的基礎(chǔ)。在已有的分析工具中,二維色譜由于其具有遠(yuǎn)高于一維色譜的峰容量,成為系統(tǒng)分離分析中藥化學(xué)成分的首選。此外,液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)（LC-MS）的成熟應(yīng)用為在線快速、有效、準(zhǔn)確鑒定已分離化合物提供了強(qiáng)有力支撐。反相/反相（RPLC/RPLC）組合的二維系統(tǒng)具有流動(dòng)相兼容性好、理論峰容量大、分離度高等特點(diǎn),在中藥復(fù)雜體系的分離上有很大的發(fā)展空間。但是由于不同反相柱組合二維系統(tǒng)兩維分離機(jī)理相似性,正交性差,極大地限制了RPLC/RPLC組合的二維色譜的發(fā)展。所以本文擬從分離條件的優(yōu)化與組合出發(fā),重點(diǎn)解決正交性不足的問(wèn)題,以充分利用反相色譜高效分離上的優(yōu)勢(shì)。選用三種具有代表性的中藥活性組分:生物堿類（博落回）、蒽醌類（大黃）、黃酮類（黃芩）,針對(duì)其不同的性質(zhì)構(gòu)建不同的RPLC×RPLC系統(tǒng)并優(yōu)化分離條件,以實(shí)現(xiàn)這些化合物類型的高效分離:1.... 

【文章來(lái)源】：湖南師范大學(xué)湖南省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：90 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

二維色相色譜系統(tǒng)模型（A）樣品環(huán)/捕集柱調(diào)制器，（B）平行柱調(diào)制器

反相/反相組合全二維液相色譜的構(gòu)建及其在中藥分析中的應(yīng)用17圖2-1在線全二維色相色譜系統(tǒng)模型Figure2-1Schemeoftheon-linecomprehensive2D-LCsystem.2.2.72DLC-MS/MS分析將優(yōu)化后的二維液相色譜系統(tǒng)與質(zhì)譜儀聯(lián)機(jī)，從二極管陣列檢測(cè)器流出液被T型分流器分流，然后以0.4ml/min的流速進(jìn)入質(zhì)譜。參照已發(fā)表文獻(xiàn)中的MS數(shù)據(jù)，來(lái)鑒定博落回根部提取物中的生物堿成分。電噴霧離子源在正離子模式下工作。工作參數(shù)如下：干燥氣體：10.0L/min；霧化氣體：3.0L/min；加熱氣體：10.0L/min；加熱塊溫度：400°C；脫溶劑管溫度：250°C；離子源接口溫度：300°C；毛細(xì)管電壓：4000V；生物堿母離子m/z掃描范圍：200-650Da，碰撞電壓范圍在20-40V之間。2.2.8數(shù)據(jù)處理使用ShimadzuLCLabsolution軟件獲取液相數(shù)據(jù)。MS和MS/MS的數(shù)據(jù)是在ShimadzuLC-MSLabsolution軟件中獲得的。經(jīng)Origin9.0軟件處理，作圖。正交性（O）根據(jù)等式（2-1）計(jì)算，其中∑bins是包含數(shù)據(jù)點(diǎn)的二維等高線圖中的點(diǎn)個(gè)數(shù)。P代表矩形箱的數(shù)量[91]。O=PP63.0P-bins2-12.3結(jié)果與討論2.3.1在不同的條件下分離博落回中的生物堿博落回中的異喹啉類生物堿，都是由一個(gè)很大的疏水部分和一個(gè)氨基官能團(tuán)

碩士學(xué)位論文18組成。所以其多數(shù)，即使是季銨生物堿，pKb大多在6到9之間[13]。因此，當(dāng)流動(dòng)相中pH改變時(shí)，生物堿的存在形態(tài)也會(huì)改變，其極性大小也會(huì)隨之改變。如果流動(dòng)相的pH值分別小于6.0和大于9.0，則在RPLC上分離的生物堿的保留值在理論上會(huì)有很大差異。為了證明這一點(diǎn)，選取博落回的根部提取物為測(cè)試樣品，然后挑選出在pH范圍2.0至10.0的內(nèi)均具有良好的耐受性的多根色譜柱，用作第一、二維使用的色譜柱。圖2-2A和2-2B分別顯示了堿性流動(dòng)相（pH=9.0）和酸性流動(dòng)相（pH=2.6）下博落回中生物堿的分離結(jié)果。結(jié)果表明，四種主要生物堿的保留時(shí)間分別為：別隱品堿（堿性條件/酸性條件，22.50min/12.05min），原阿片堿（24.71min/11.76min），血根堿（25.67min/13.21min）和白屈菜紅堿（26.82min/14.38min）。博落回中的生物堿類化合物在酸性條件下的保留時(shí)間比在堿性條件下短，并且洗脫順序也有所不同。因?yàn)樯飰A在酸性條件下呈離子狀態(tài)存在，極性較大，堿性條件下呈分子狀態(tài)存在，極性較校綜上所述，博落回生物堿在兩個(gè)不同的pH條件下（2.6和9.0）可以為構(gòu)建正交性良好的RPLC×RPLC系統(tǒng)。圖2-2堿性條件（A）和酸性條件（B）下分析博落回生物堿Figure2-2AnalysisofalkaloidofM.cordata(willd.)R.Br.withbasicconditions(A)andacidicconditions(B)通常，兩種分離模式的組合順序在二維液相色譜分離系統(tǒng)中至關(guān)重要。在這項(xiàng)工作中，考慮到二維系統(tǒng)需要與質(zhì)譜檢測(cè)器結(jié)合來(lái)鑒別生物堿，酸性流動(dòng)相有助于離子源中生物堿的電離，堿性流動(dòng)相會(huì)抑制生物堿的離子化，導(dǎo)致檢測(cè)響應(yīng)

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