目的:利用課題組前期構(gòu)建成功并長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)HBx的小鼠模型,探討HBx導(dǎo)致免疫功能正常小鼠肝癌發(fā)生中的作用機(jī)制。方法:將轉(zhuǎn)染了HBx的肝前體細(xì)胞(Hepatic progenitor cells,HPCs)通過(guò)肝門(mén)靜脈注射入小鼠體內(nèi),構(gòu)建能長(zhǎng)期在肝臟穩(wěn)定表達(dá)HBx的小鼠模型,分別于術(shù)后30d、90d、180d、360d收取小鼠肝臟組織,RT-PCR、Western blot和免疫組化法驗(yàn)證HBx是否成功轉(zhuǎn)入肝臟并能穩(wěn)定表達(dá);RT-PCR和Western blot檢測(cè)JAK2/STAT3信號(hào)通路和HIPPO信號(hào)通路在HBx的影響下相關(guān)因子的表達(dá)。結(jié)果:成功構(gòu)建能長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)HBx的小鼠模型并在常規(guī)飼養(yǎng)360d后發(fā)展成為肝癌,HBx在小鼠肝臟組織內(nèi)處于穩(wěn)定高表達(dá)狀態(tài),不隨時(shí)間變化;在實(shí)驗(yàn)組小鼠轉(zhuǎn)入HBx后,JAK2和STAT3直到肝癌發(fā)生仍未出現(xiàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的改變;而HIPPO信號(hào)通路相關(guān)因子在30d時(shí)即出現(xiàn)MST1和p-YAP1表達(dá)上調(diào),YAP1和p-MST1表達(dá)下調(diào)的改變并維持這種表達(dá)狀態(tài)直至肝癌的發(fā)生。結(jié)論:HBx是導(dǎo)致小鼠肝癌的發(fā)生的原因之一,導(dǎo)致肝癌發(fā)生的機(jī)制可能與其長(zhǎng)期持續(xù)影響...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1HBx在肝前體細(xì)胞中的表達(dá)情況

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文21片切片滴加100μl蘇木素染色液，染核5-8min，染色完成后自來(lái)水洗掉多余染液，最后1%鹽酸乙醇分化數(shù)秒，0.6%氨水反藍(lán)，并用自來(lái)水反復(fù)清洗；（5）伊紅染細(xì)胞質(zhì)：切片浸入伊紅染液中染色1-3min，染色完畢后自來(lái)水洗掉多余染液；（6）脫水封片....

圖2小鼠肝癌鑒定

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文22A、B：Westernblot檢測(cè)三種肝前體細(xì)胞中HBx蛋白的表達(dá)情況與相對(duì)表達(dá)量；C：RT-PCR檢測(cè)三種肝前體細(xì)胞HBxmRNA相對(duì)表達(dá)量。**表示P＜0.01，與14-19細(xì)胞、EGFP-14-19細(xì)胞組相比較。3.2小鼠肝癌組織鑒定在飼養(yǎng)....

圖3HBx在小鼠肝臟中的表達(dá)情況

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文23圖3HBx在小鼠肝臟中的表達(dá)情況Fig3ExpressionofHBxinmouselivertissueA、B：Westernblot檢測(cè)小鼠肝臟組織中HBx蛋白的表達(dá)情況與相對(duì)表達(dá)量；C：RT-PCR檢測(cè)小鼠肝臟組織中HBxmRNA相對(duì)表達(dá)量....

圖4HBx對(duì)JAK2/STAT3信號(hào)通路相關(guān)因子的表達(dá)影響

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文29圖4HBx對(duì)JAK2/STAT3信號(hào)通路相關(guān)因子的表達(dá)影響Fig4EffectofHBxontheexpressionofrelatedfactorsinJAK2/STAT3signalingpathway1：NS組；2:EGFP-14-19組；....

本文編號(hào)：3996202