目的:尋找碘難治型甲狀腺癌與高分化甲狀腺癌之間的差異蛋白,探討碘難治型甲狀腺癌可能的發(fā)生機(jī)制,尋找潛在的核素分子治療靶點(diǎn),改善碘難治型甲狀腺癌患者的預(yù)后。方法:收集重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科高分化甲狀腺癌和碘難治型甲狀腺癌患者頸部轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)各3例,利用iTRAQ技術(shù)聯(lián)合質(zhì)譜分析得到差異蛋白。通過生物信息學(xué)方法對差異蛋白進(jìn)行GO功能注釋、KEGG通路分析,并利用TCGA、TCPA數(shù)據(jù)庫對部分所得差異蛋白進(jìn)行驗(yàn)證。利用TMpred對部分差異蛋白進(jìn)行跨膜結(jié)構(gòu)區(qū)域預(yù)測,篩選出結(jié)構(gòu)合適的蛋白,并通過免疫組化對目的蛋白進(jìn)行定位驗(yàn)證。通過慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)過表達(dá)目的蛋白,利用蛋白印跡技術(shù)驗(yàn)證該蛋白對于鈉碘轉(zhuǎn)運(yùn)體表達(dá)量的影響。結(jié)果:本實(shí)驗(yàn)鑒定得到差異蛋白共665個(gè),在碘難治型甲狀腺癌中顯著上調(diào)的蛋白327個(gè),顯著下調(diào)的蛋白338個(gè)。差異蛋白的主要功能包括調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)運(yùn)體活性及酶活性等,參與細(xì)胞代謝等多個(gè)生物過程。差異蛋白主要富集于代謝通路、黏著斑等多條信號(hào)通路。TMpred跨膜結(jié)構(gòu)預(yù)測提示CHI3L1存在多個(gè)跨膜區(qū)域,免疫組化結(jié)果顯示CHI3L1定位于細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì),且在碘難治型甲狀腺癌中表達(dá)顯著高于高分... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

差異蛋白的GO功能注釋包括細(xì)胞成分，生物過程，分子功能三個(gè)本體，橫坐標(biāo)代表

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文222.2CHI3L1過表達(dá)穩(wěn)定株及空載病毒穩(wěn)定株的構(gòu)建細(xì)胞株經(jīng)慢病毒侵染，puro篩選2周后，在熒光顯微鏡下觀察可見細(xì)胞狀態(tài)良好，CHI3L1過表達(dá)穩(wěn)定株和其空載病毒對照穩(wěn)定株puro抗性明顯（圖3）。故判斷PTC-K1細(xì)胞CHI3L1過表達(dá)穩(wěn)定株及其空載病毒對照穩(wěn)定株篩選成功。圖3慢病毒轉(zhuǎn)染結(jié)果在顯微鏡下分別用白光和熒光觀察細(xì)胞，可見CHI3L1過表達(dá)穩(wěn)定株（a、b）和空載病毒對照穩(wěn)定株（c、d）細(xì)胞狀態(tài)良好，puro抗性明顯。Figure3Resultoflentivirustransfection.Cellswereobservedunderthemicroscopewithwhitelightandfluorescence,respectively.CellswereingoodconditionandwithstableresistancetopuroinbothCHI3L1over-expressionstabletransfectant(aandb)andno-loadviruscontroltransfectant(candd).2.3CHI3L1可激活MEK/ERK1/2信號(hào)通路并抑制NIS蛋白在甲狀腺癌中的表達(dá)WesternBlotting結(jié)果表明，在CHI3L1過表達(dá)穩(wěn)定株，空載病毒對照穩(wěn)定株及PTC-K1三組細(xì)胞中，NIS的表達(dá)在CHI3L1過表達(dá)組中顯著低于空載病毒空白對

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文23照組及PTC-K1細(xì)胞組，而空載病毒空白對照組與PTC-K1細(xì)胞組之間無顯著性差異。此外，在CHI3L1過表達(dá)組中，MEK/ERK1/2信號(hào)通路被激活，MEK及ERK1/2的表達(dá)顯著上調(diào)。載病毒空白對照組與PTC-K1細(xì)胞組之間無顯著性差異（圖4）。圖4WesternBlotting驗(yàn)證CHI3L1對NIS及MEK/ERK1/2信號(hào)通路的影響。Figure4.WesternblottingwasusedtoconfirmtheinfluenceofCHI3L1onNISandMEK/ERK1/2signalpathway.a.CHI3L1過表達(dá)穩(wěn)定株中,MEK,ERK1/2表達(dá)明顯高于空載病毒對照組及PTC-K1組。b.CHI3L1過表達(dá)穩(wěn)定株中NIS的表達(dá)量顯著低于空載病毒對照組及PTC-K1組。c.CHI3L1過表達(dá)穩(wěn)定株，空載病毒對照組及PTC-K1組中，ERK1/2，MEK及NIS蛋白表達(dá)量的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。***：P<0.001。a.ExpressionofMEKandERK1/2inCHI3L1overexpressionstabletransfectantissignificantlyup-regulatedthanthatinPTC-K1andno-loadviruscontrolstabletransfectant.b.ExpressionofNISissignificantlylowerinCHI3L1overexpressionstabletransfectantthaninPTC-K1andno-loadviruscontrolstabletransfectant.c.Statisticanalysisofthreegroups.TheexpressionofERK1/2,MEK,andNISinCHI3L1overexpressionstabletransfectantwassignificantlydifferentcomparingtoPTC-K1andno-loadviruscontrolstabletransfectant.***P<0.001.

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3123490