苦瓜醇提物抗肝癌活性成分及作用機(jī)制研究
發(fā)布時(shí)間：2021-03-26 23:57
苦瓜為葫蘆科苦瓜屬植物苦瓜Momordica charantia Linnaeus的干燥近成熟果實(shí),在我國又常被叫作錦荔枝、癲葡萄、涼瓜等,是傳統(tǒng)的藥食同源中藥�！吨腥A大辭典》記載苦瓜的根、莖、葉、花、果實(shí)、種子均可入藥,《本草綱目》記載其可以解勞乏,除邪熱,清心明目。味苦、寒,歸心、脾、肝經(jīng),能夠清暑滌熱,明目,解毒。常被用于醫(yī)治暑熱煩渴,消渴,赤眼疼痛,痢疾,腸癰腫毒等。大量文獻(xiàn)研究表明,苦瓜提取物能有效抑制肝癌細(xì)胞的生長,但其抗肝癌的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)目前還沒有系統(tǒng)的研究報(bào)道。本論文在前期文獻(xiàn)研究的基礎(chǔ)上,通過多學(xué)科交叉的研究方法,對苦瓜醇提物進(jìn)行分離純化研究和有效成分分析,并對活性較好的組分進(jìn)行了抗肝癌的作用機(jī)制研究。目的:詮釋苦瓜醇提物抗肝癌作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制,以期為其抗肝癌的臨床療效提供現(xiàn)代科學(xué)依據(jù),為開發(fā)研制創(chuàng)新中藥或抗肝癌保健食品奠定基礎(chǔ)。方法:將新鮮苦瓜用乙醇提取,丙酮沉淀,得到苦瓜醇提物。以苦瓜中各活性成分的含量為指標(biāo),篩選出最佳的大孔吸附樹脂對苦瓜醇提物進(jìn)行初步純化,利用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)（High performance liquid chromatograph-...
【文章來源】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)湖北省
【文章頁數(shù)】：107 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
大孔吸附樹脂純化部位的HPLC圖譜
苦瓜醇提物抗肝癌活性成分及其作用機(jī)制研究37游標(biāo)卡尺吳江市億豐電子儀器有限公司剪刀、鑷子、注射器、細(xì)胞計(jì)數(shù)板、灌胃針等，其他儀器同第三章。2實(shí)驗(yàn)方法2.1H22荷瘤小鼠模型的建立[55-57]建模及給藥過程如圖1所示。H22肝癌細(xì)胞經(jīng)復(fù)蘇后注射到小鼠腹腔內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，待7到10天左右小鼠腹水長成后，選取腹部飽滿的小鼠，于無菌環(huán)境中從腹腔中抽取腹水，離心，除去血細(xì)胞，用生理鹽水將H22細(xì)胞稀釋至細(xì)胞濃度為2×107/ml，于每只小鼠左大腿根部皮下接種50μl，共接種32只，同時(shí)另取8只小鼠每只小鼠左大腿根部皮下接種50μl生理鹽水。接種后5~7天，接種H22腫瘤細(xì)胞的左大腿根部腫瘤長至綠豆大小，而生理鹽水組無明顯變化，說明32只小鼠造模成功。圖1H22荷瘤小鼠造模及給藥過程Fig.1TheprocessionofH22-bearingmicemoldmakingandadministration2.2分組與給藥將小鼠稱重并隨機(jī)分為模型組、環(huán)磷酰胺組、苦瓜醇提物組（MCE）及大孔樹脂純化組（MCM），每組8只。模型組：0.1ml/10g雙蒸水，環(huán)磷酰胺組：20mg/kg環(huán)磷酰胺水溶液；MCE：300mg/kg苦瓜醇提物；MCM：300mg/kg大孔樹脂純化后產(chǎn)物。每天按0.1ml/10g劑量定時(shí)灌胃給藥一次，連續(xù)給藥14天。每天觀察小鼠行為狀態(tài)，每隔三天記錄一次小鼠
湖北中醫(yī)藥大學(xué)2020屆碩士學(xué)位論文56(a)(b)模型組環(huán)磷酰胺組MC-2組01234****細(xì)胞凋亡率（%）(c)(d)圖2（a）TUNEL染色模型組；（b）TUNEL染色MCM組；（c）TUNEL染色環(huán)磷酰胺組；（d）各組小鼠腫瘤組織中的細(xì)胞凋亡率，與模型組相比，**P<0.01Fig.2(a)TUNELstainingmodelgroup;(b)TUNELstainingMCMgroup;(c)TUNELstainingcyclophosphamidegroup;(d)Cellapoptosisrateintumortissueofmiceineachgroup，comparedwiththemodelgroup,**P<0.013.4MCM對H22細(xì)胞增殖的影響MCM與環(huán)磷酰胺均能抑制H22細(xì)胞增殖，并有明顯的濃度依賴性。由圖4可知，當(dāng)給藥濃度從30μg/ml增大到90μg/ml時(shí)，兩組藥物對H22細(xì)胞增殖的抑制作用也隨之增加，而給藥濃度增大到120μg/ml時(shí)，MCM給藥組對H22細(xì)胞增殖的抑制增長速度減緩，而環(huán)磷酰胺給藥組對H22細(xì)胞增殖的抑制率仍在高速增加，濃度增大到150μg/ml時(shí)，環(huán)磷酰胺給藥組對H22細(xì)胞增殖的抑制速度也開始減緩。如表3所示，MCM和環(huán)磷酰胺抑制H22細(xì)胞增殖的IC50值分別為60.48μg/ml和89.96μg/ml。
本文編號：3102476
【文章來源】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)湖北省
【文章頁數(shù)】：107 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
大孔吸附樹脂純化部位的HPLC圖譜
苦瓜醇提物抗肝癌活性成分及其作用機(jī)制研究37游標(biāo)卡尺吳江市億豐電子儀器有限公司剪刀、鑷子、注射器、細(xì)胞計(jì)數(shù)板、灌胃針等，其他儀器同第三章。2實(shí)驗(yàn)方法2.1H22荷瘤小鼠模型的建立[55-57]建模及給藥過程如圖1所示。H22肝癌細(xì)胞經(jīng)復(fù)蘇后注射到小鼠腹腔內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，待7到10天左右小鼠腹水長成后，選取腹部飽滿的小鼠，于無菌環(huán)境中從腹腔中抽取腹水，離心，除去血細(xì)胞，用生理鹽水將H22細(xì)胞稀釋至細(xì)胞濃度為2×107/ml，于每只小鼠左大腿根部皮下接種50μl，共接種32只，同時(shí)另取8只小鼠每只小鼠左大腿根部皮下接種50μl生理鹽水。接種后5~7天，接種H22腫瘤細(xì)胞的左大腿根部腫瘤長至綠豆大小，而生理鹽水組無明顯變化，說明32只小鼠造模成功。圖1H22荷瘤小鼠造模及給藥過程Fig.1TheprocessionofH22-bearingmicemoldmakingandadministration2.2分組與給藥將小鼠稱重并隨機(jī)分為模型組、環(huán)磷酰胺組、苦瓜醇提物組（MCE）及大孔樹脂純化組（MCM），每組8只。模型組：0.1ml/10g雙蒸水，環(huán)磷酰胺組：20mg/kg環(huán)磷酰胺水溶液；MCE：300mg/kg苦瓜醇提物；MCM：300mg/kg大孔樹脂純化后產(chǎn)物。每天按0.1ml/10g劑量定時(shí)灌胃給藥一次，連續(xù)給藥14天。每天觀察小鼠行為狀態(tài)，每隔三天記錄一次小鼠
湖北中醫(yī)藥大學(xué)2020屆碩士學(xué)位論文56(a)(b)模型組環(huán)磷酰胺組MC-2組01234****細(xì)胞凋亡率（%）(c)(d)圖2（a）TUNEL染色模型組；（b）TUNEL染色MCM組；（c）TUNEL染色環(huán)磷酰胺組；（d）各組小鼠腫瘤組織中的細(xì)胞凋亡率，與模型組相比，**P<0.01Fig.2(a)TUNELstainingmodelgroup;(b)TUNELstainingMCMgroup;(c)TUNELstainingcyclophosphamidegroup;(d)Cellapoptosisrateintumortissueofmiceineachgroup，comparedwiththemodelgroup,**P<0.013.4MCM對H22細(xì)胞增殖的影響MCM與環(huán)磷酰胺均能抑制H22細(xì)胞增殖，并有明顯的濃度依賴性。由圖4可知，當(dāng)給藥濃度從30μg/ml增大到90μg/ml時(shí)，兩組藥物對H22細(xì)胞增殖的抑制作用也隨之增加，而給藥濃度增大到120μg/ml時(shí)，MCM給藥組對H22細(xì)胞增殖的抑制增長速度減緩，而環(huán)磷酰胺給藥組對H22細(xì)胞增殖的抑制率仍在高速增加，濃度增大到150μg/ml時(shí)，環(huán)磷酰胺給藥組對H22細(xì)胞增殖的抑制速度也開始減緩。如表3所示，MCM和環(huán)磷酰胺抑制H22細(xì)胞增殖的IC50值分別為60.48μg/ml和89.96μg/ml。
本文編號：3102476
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