沉默ARK5通過(guò)調(diào)節(jié)EMT途徑降低結(jié)直腸癌的轉(zhuǎn)移和侵襲性
發(fā)布時(shí)間：2021-03-27 04:27
目的:結(jié)直腸癌是一種常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤,既往有研究發(fā)現(xiàn)蛋白激酶相關(guān)激酶5（ARK5）可促進(jìn)多種癌癥的轉(zhuǎn)移,并能增強(qiáng)癌癥的侵襲性。而最近的證據(jù)支持上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）是腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的必經(jīng)之路。在此次研究中,我們將進(jìn)行探討ARK5是否通過(guò)調(diào)節(jié)EMT途徑來(lái)影響結(jié)直腸癌的轉(zhuǎn)移和侵襲。方法:1.臨床隨機(jī)選取134名只接受根治性手術(shù)治療未接受術(shù)前放化療的結(jié)直腸癌患者（2013年1月至2014年1月）,獲取134例患者的結(jié)直腸腫瘤組織和癌旁正常組織。通過(guò)免疫組織化學(xué)檢測(cè)ARK5和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）相關(guān)標(biāo)記物并評(píng)分。將評(píng)分與患者的臨床分期、OS等相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。2.設(shè)計(jì)針對(duì)ARK5基因與TWIST基因的RNA干擾（RNA interference,RNAi）序列及陰性對(duì)照（negative control,NC）序列,并完成對(duì)LV-ARK5-RNAi重組慢病毒載體、LV-TWIST-RNAi重組慢病毒載體和陰性重組慢病毒載體的構(gòu)建。3.用攜帶熒光（GFP）的陰性重組慢病毒載體分別感染SW480及HT29細(xì)胞,通過(guò)熒光倒置顯微鏡觀察并挑選最有效的感染條件。4.培養(yǎng)SW480,HT29兩...
【文章來(lái)源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校
【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
結(jié)直腸癌組織與癌旁正常組織中ARK5，E-cadherin和Vimentin的免疫組織化學(xué)染色結(jié)果
結(jié)果圖2ARK5重組慢病毒轉(zhuǎn)染SW480細(xì)胞的最佳MOI為20，感染體系為常規(guī)完全培養(yǎng)基+HiTransGA（40ul），時(shí)間為24h；轉(zhuǎn)染HT29細(xì)胞的最佳MOI為20，感染體系為常規(guī)完全培養(yǎng)基+HiTransGP（40ul），時(shí)間為24h。圖3TWIST重組慢病毒轉(zhuǎn)染SW480細(xì)胞的最佳MOI為60，感染體系為常規(guī)完全培養(yǎng)基+HiTransGP（40ul），時(shí)間為24h；轉(zhuǎn)染HT29細(xì)胞的最佳MOI為60，感染體系為常規(guī)完全培養(yǎng)基+HiTransGA（40ul），時(shí)間為24h。3.3WesternBlot實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.3.1ARK5慢病毒干擾SW480/HT29細(xì)胞后，ARK5、E-cadherin和Vimentin表達(dá)情況為了進(jìn)一步確認(rèn)ARK5是否由調(diào)控EMT途徑來(lái)改變結(jié)直腸癌細(xì)胞的侵襲及轉(zhuǎn)移能力，本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用ARK5的重組慢病毒按預(yù)實(shí)驗(yàn)所測(cè)得的最佳MOI值及轉(zhuǎn)染條件去轉(zhuǎn)染SW480/HT29兩株細(xì)胞，并提取各實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞蛋白，用凝膠電泳法測(cè)得ARK5、E-cadherin和Vimentin的表達(dá)情況。結(jié)果顯示（圖4、表5）在SW480及HT29兩株細(xì)胞中，均出現(xiàn)當(dāng)ARK5被慢病毒阻止并下調(diào)后E-cadherin上調(diào)，Vimentin下調(diào)的情況。17
結(jié)果圖2ARK5重組慢病毒轉(zhuǎn)染SW480細(xì)胞的最佳MOI為20，感染體系為常規(guī)完全培養(yǎng)基+HiTransGA（40ul），時(shí)間為24h；轉(zhuǎn)染HT29細(xì)胞的最佳MOI為20，感染體系為常規(guī)完全培養(yǎng)基+HiTransGP（40ul），時(shí)間為24h。圖3TWIST重組慢病毒轉(zhuǎn)染SW480細(xì)胞的最佳MOI為60，感染體系為常規(guī)完全培養(yǎng)基+HiTransGP（40ul），時(shí)間為24h；轉(zhuǎn)染HT29細(xì)胞的最佳MOI為60，感染體系為常規(guī)完全培養(yǎng)基+HiTransGA（40ul），時(shí)間為24h。3.3WesternBlot實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.3.1ARK5慢病毒干擾SW480/HT29細(xì)胞后，ARK5、E-cadherin和Vimentin表達(dá)情況為了進(jìn)一步確認(rèn)ARK5是否由調(diào)控EMT途徑來(lái)改變結(jié)直腸癌細(xì)胞的侵襲及轉(zhuǎn)移能力，本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用ARK5的重組慢病毒按預(yù)實(shí)驗(yàn)所測(cè)得的最佳MOI值及轉(zhuǎn)染條件去轉(zhuǎn)染SW480/HT29兩株細(xì)胞，并提取各實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞蛋白，用凝膠電泳法測(cè)得ARK5、E-cadherin和Vimentin的表達(dá)情況。結(jié)果顯示（圖4、表5）在SW480及HT29兩株細(xì)胞中，均出現(xiàn)當(dāng)ARK5被慢病毒阻止并下調(diào)后E-cadherin上調(diào)，Vimentin下調(diào)的情況。17
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Contactin 1: A potential therapeutic target and biomarker in gastric cancer[J]. De-Hu Chen,Ji-Wei Yu,Bo-Jian Jiang. World Journal of Gastroenterology. 2015(33)
[2]palliative care and end-stage colorectal cancer management:The surgeon meets the oncologist[J]. Renato Costi,Francesco Leonardi,Daniele Zanoni,Vincenzo Violi,Luigi Roncoroni. World Journal of Gastroenterology. 2014(24)
本文編號(hào)：3102884
【文章來(lái)源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校
【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
結(jié)直腸癌組織與癌旁正常組織中ARK5，E-cadherin和Vimentin的免疫組織化學(xué)染色結(jié)果
結(jié)果圖2ARK5重組慢病毒轉(zhuǎn)染SW480細(xì)胞的最佳MOI為20，感染體系為常規(guī)完全培養(yǎng)基+HiTransGA（40ul），時(shí)間為24h；轉(zhuǎn)染HT29細(xì)胞的最佳MOI為20，感染體系為常規(guī)完全培養(yǎng)基+HiTransGP（40ul），時(shí)間為24h。圖3TWIST重組慢病毒轉(zhuǎn)染SW480細(xì)胞的最佳MOI為60，感染體系為常規(guī)完全培養(yǎng)基+HiTransGP（40ul），時(shí)間為24h；轉(zhuǎn)染HT29細(xì)胞的最佳MOI為60，感染體系為常規(guī)完全培養(yǎng)基+HiTransGA（40ul），時(shí)間為24h。3.3WesternBlot實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.3.1ARK5慢病毒干擾SW480/HT29細(xì)胞后，ARK5、E-cadherin和Vimentin表達(dá)情況為了進(jìn)一步確認(rèn)ARK5是否由調(diào)控EMT途徑來(lái)改變結(jié)直腸癌細(xì)胞的侵襲及轉(zhuǎn)移能力，本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用ARK5的重組慢病毒按預(yù)實(shí)驗(yàn)所測(cè)得的最佳MOI值及轉(zhuǎn)染條件去轉(zhuǎn)染SW480/HT29兩株細(xì)胞，并提取各實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞蛋白，用凝膠電泳法測(cè)得ARK5、E-cadherin和Vimentin的表達(dá)情況。結(jié)果顯示（圖4、表5）在SW480及HT29兩株細(xì)胞中，均出現(xiàn)當(dāng)ARK5被慢病毒阻止并下調(diào)后E-cadherin上調(diào)，Vimentin下調(diào)的情況。17
結(jié)果圖2ARK5重組慢病毒轉(zhuǎn)染SW480細(xì)胞的最佳MOI為20，感染體系為常規(guī)完全培養(yǎng)基+HiTransGA（40ul），時(shí)間為24h；轉(zhuǎn)染HT29細(xì)胞的最佳MOI為20，感染體系為常規(guī)完全培養(yǎng)基+HiTransGP（40ul），時(shí)間為24h。圖3TWIST重組慢病毒轉(zhuǎn)染SW480細(xì)胞的最佳MOI為60，感染體系為常規(guī)完全培養(yǎng)基+HiTransGP（40ul），時(shí)間為24h；轉(zhuǎn)染HT29細(xì)胞的最佳MOI為60，感染體系為常規(guī)完全培養(yǎng)基+HiTransGA（40ul），時(shí)間為24h。3.3WesternBlot實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.3.1ARK5慢病毒干擾SW480/HT29細(xì)胞后，ARK5、E-cadherin和Vimentin表達(dá)情況為了進(jìn)一步確認(rèn)ARK5是否由調(diào)控EMT途徑來(lái)改變結(jié)直腸癌細(xì)胞的侵襲及轉(zhuǎn)移能力，本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用ARK5的重組慢病毒按預(yù)實(shí)驗(yàn)所測(cè)得的最佳MOI值及轉(zhuǎn)染條件去轉(zhuǎn)染SW480/HT29兩株細(xì)胞，并提取各實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞蛋白，用凝膠電泳法測(cè)得ARK5、E-cadherin和Vimentin的表達(dá)情況。結(jié)果顯示（圖4、表5）在SW480及HT29兩株細(xì)胞中，均出現(xiàn)當(dāng)ARK5被慢病毒阻止并下調(diào)后E-cadherin上調(diào)，Vimentin下調(diào)的情況。17
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Contactin 1: A potential therapeutic target and biomarker in gastric cancer[J]. De-Hu Chen,Ji-Wei Yu,Bo-Jian Jiang. World Journal of Gastroenterology. 2015(33)
[2]palliative care and end-stage colorectal cancer management:The surgeon meets the oncologist[J]. Renato Costi,Francesco Leonardi,Daniele Zanoni,Vincenzo Violi,Luigi Roncoroni. World Journal of Gastroenterology. 2014(24)
本文編號(hào)：3102884
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