沉默ARK5通過調(diào)節(jié)EMT途徑降低結(jié)直腸癌的轉(zhuǎn)移和侵襲性
發(fā)布時間：2021-03-27 04:27
目的:結(jié)直腸癌是一種常見的消化道惡性腫瘤,既往有研究發(fā)現(xiàn)蛋白激酶相關(guān)激酶5（ARK5）可促進多種癌癥的轉(zhuǎn)移,并能增強癌癥的侵襲性。而最近的證據(jù)支持上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）是腫瘤細胞轉(zhuǎn)移的必經(jīng)之路。在此次研究中,我們將進行探討ARK5是否通過調(diào)節(jié)EMT途徑來影響結(jié)直腸癌的轉(zhuǎn)移和侵襲。方法:1.臨床隨機選取134名只接受根治性手術(shù)治療未接受術(shù)前放化療的結(jié)直腸癌患者（2013年1月至2014年1月）,獲取134例患者的結(jié)直腸腫瘤組織和癌旁正常組織。通過免疫組織化學(xué)檢測ARK5和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）相關(guān)標(biāo)記物并評分。將評分與患者的臨床分期、OS等相關(guān)數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析。2.設(shè)計針對ARK5基因與TWIST基因的RNA干擾（RNA interference,RNAi）序列及陰性對照（negative control,NC）序列,并完成對LV-ARK5-RNAi重組慢病毒載體、LV-TWIST-RNAi重組慢病毒載體和陰性重組慢病毒載體的構(gòu)建。3.用攜帶熒光（GFP）的陰性重組慢病毒載體分別感染SW480及HT29細胞,通過熒光倒置顯微鏡觀察并挑選最有效的感染條件。4.培養(yǎng)SW480,HT29兩...
【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校
【文章頁數(shù)】：60 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
結(jié)直腸癌組織與癌旁正常組織中ARK5，E-cadherin和Vimentin的免疫組織化學(xué)染色結(jié)果
結(jié)果圖2ARK5重組慢病毒轉(zhuǎn)染SW480細胞的最佳MOI為20，感染體系為常規(guī)完全培養(yǎng)基+HiTransGA（40ul），時間為24h；轉(zhuǎn)染HT29細胞的最佳MOI為20，感染體系為常規(guī)完全培養(yǎng)基+HiTransGP（40ul），時間為24h。圖3TWIST重組慢病毒轉(zhuǎn)染SW480細胞的最佳MOI為60，感染體系為常規(guī)完全培養(yǎng)基+HiTransGP（40ul），時間為24h；轉(zhuǎn)染HT29細胞的最佳MOI為60，感染體系為常規(guī)完全培養(yǎng)基+HiTransGA（40ul），時間為24h。3.3WesternBlot實驗結(jié)果3.3.1ARK5慢病毒干擾SW480/HT29細胞后，ARK5、E-cadherin和Vimentin表達情況為了進一步確認ARK5是否由調(diào)控EMT途徑來改變結(jié)直腸癌細胞的侵襲及轉(zhuǎn)移能力，本實驗運用ARK5的重組慢病毒按預(yù)實驗所測得的最佳MOI值及轉(zhuǎn)染條件去轉(zhuǎn)染SW480/HT29兩株細胞，并提取各實驗組的細胞蛋白，用凝膠電泳法測得ARK5、E-cadherin和Vimentin的表達情況。結(jié)果顯示（圖4、表5）在SW480及HT29兩株細胞中，均出現(xiàn)當(dāng)ARK5被慢病毒阻止并下調(diào)后E-cadherin上調(diào)，Vimentin下調(diào)的情況。17
結(jié)果圖2ARK5重組慢病毒轉(zhuǎn)染SW480細胞的最佳MOI為20，感染體系為常規(guī)完全培養(yǎng)基+HiTransGA（40ul），時間為24h；轉(zhuǎn)染HT29細胞的最佳MOI為20，感染體系為常規(guī)完全培養(yǎng)基+HiTransGP（40ul），時間為24h。圖3TWIST重組慢病毒轉(zhuǎn)染SW480細胞的最佳MOI為60，感染體系為常規(guī)完全培養(yǎng)基+HiTransGP（40ul），時間為24h；轉(zhuǎn)染HT29細胞的最佳MOI為60，感染體系為常規(guī)完全培養(yǎng)基+HiTransGA（40ul），時間為24h。3.3WesternBlot實驗結(jié)果3.3.1ARK5慢病毒干擾SW480/HT29細胞后，ARK5、E-cadherin和Vimentin表達情況為了進一步確認ARK5是否由調(diào)控EMT途徑來改變結(jié)直腸癌細胞的侵襲及轉(zhuǎn)移能力，本實驗運用ARK5的重組慢病毒按預(yù)實驗所測得的最佳MOI值及轉(zhuǎn)染條件去轉(zhuǎn)染SW480/HT29兩株細胞，并提取各實驗組的細胞蛋白，用凝膠電泳法測得ARK5、E-cadherin和Vimentin的表達情況。結(jié)果顯示（圖4、表5）在SW480及HT29兩株細胞中，均出現(xiàn)當(dāng)ARK5被慢病毒阻止并下調(diào)后E-cadherin上調(diào)，Vimentin下調(diào)的情況。17
【參考文獻】：
期刊論文
[1]Contactin 1: A potential therapeutic target and biomarker in gastric cancer[J]. De-Hu Chen,Ji-Wei Yu,Bo-Jian Jiang. World Journal of Gastroenterology. 2015(33)
[2]palliative care and end-stage colorectal cancer management:The surgeon meets the oncologist[J]. Renato Costi,Francesco Leonardi,Daniele Zanoni,Vincenzo Violi,Luigi Roncoroni. World Journal of Gastroenterology. 2014(24)
本文編號：3102884
【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校
【文章頁數(shù)】：60 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
結(jié)直腸癌組織與癌旁正常組織中ARK5，E-cadherin和Vimentin的免疫組織化學(xué)染色結(jié)果
結(jié)果圖2ARK5重組慢病毒轉(zhuǎn)染SW480細胞的最佳MOI為20，感染體系為常規(guī)完全培養(yǎng)基+HiTransGA（40ul），時間為24h；轉(zhuǎn)染HT29細胞的最佳MOI為20，感染體系為常規(guī)完全培養(yǎng)基+HiTransGP（40ul），時間為24h。圖3TWIST重組慢病毒轉(zhuǎn)染SW480細胞的最佳MOI為60，感染體系為常規(guī)完全培養(yǎng)基+HiTransGP（40ul），時間為24h；轉(zhuǎn)染HT29細胞的最佳MOI為60，感染體系為常規(guī)完全培養(yǎng)基+HiTransGA（40ul），時間為24h。3.3WesternBlot實驗結(jié)果3.3.1ARK5慢病毒干擾SW480/HT29細胞后，ARK5、E-cadherin和Vimentin表達情況為了進一步確認ARK5是否由調(diào)控EMT途徑來改變結(jié)直腸癌細胞的侵襲及轉(zhuǎn)移能力，本實驗運用ARK5的重組慢病毒按預(yù)實驗所測得的最佳MOI值及轉(zhuǎn)染條件去轉(zhuǎn)染SW480/HT29兩株細胞，并提取各實驗組的細胞蛋白，用凝膠電泳法測得ARK5、E-cadherin和Vimentin的表達情況。結(jié)果顯示（圖4、表5）在SW480及HT29兩株細胞中，均出現(xiàn)當(dāng)ARK5被慢病毒阻止并下調(diào)后E-cadherin上調(diào)，Vimentin下調(diào)的情況。17
結(jié)果圖2ARK5重組慢病毒轉(zhuǎn)染SW480細胞的最佳MOI為20，感染體系為常規(guī)完全培養(yǎng)基+HiTransGA（40ul），時間為24h；轉(zhuǎn)染HT29細胞的最佳MOI為20，感染體系為常規(guī)完全培養(yǎng)基+HiTransGP（40ul），時間為24h。圖3TWIST重組慢病毒轉(zhuǎn)染SW480細胞的最佳MOI為60，感染體系為常規(guī)完全培養(yǎng)基+HiTransGP（40ul），時間為24h；轉(zhuǎn)染HT29細胞的最佳MOI為60，感染體系為常規(guī)完全培養(yǎng)基+HiTransGA（40ul），時間為24h。3.3WesternBlot實驗結(jié)果3.3.1ARK5慢病毒干擾SW480/HT29細胞后，ARK5、E-cadherin和Vimentin表達情況為了進一步確認ARK5是否由調(diào)控EMT途徑來改變結(jié)直腸癌細胞的侵襲及轉(zhuǎn)移能力，本實驗運用ARK5的重組慢病毒按預(yù)實驗所測得的最佳MOI值及轉(zhuǎn)染條件去轉(zhuǎn)染SW480/HT29兩株細胞，并提取各實驗組的細胞蛋白，用凝膠電泳法測得ARK5、E-cadherin和Vimentin的表達情況。結(jié)果顯示（圖4、表5）在SW480及HT29兩株細胞中，均出現(xiàn)當(dāng)ARK5被慢病毒阻止并下調(diào)后E-cadherin上調(diào)，Vimentin下調(diào)的情況。17
【參考文獻】：
期刊論文
[1]Contactin 1: A potential therapeutic target and biomarker in gastric cancer[J]. De-Hu Chen,Ji-Wei Yu,Bo-Jian Jiang. World Journal of Gastroenterology. 2015(33)
[2]palliative care and end-stage colorectal cancer management:The surgeon meets the oncologist[J]. Renato Costi,Francesco Leonardi,Daniele Zanoni,Vincenzo Violi,Luigi Roncoroni. World Journal of Gastroenterology. 2014(24)
本文編號：3102884
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