發(fā)布時間：2021-03-06 07:10

　　目的比較四種不同血清型腺相關(guān)病毒（adeno-associatedvirus,AAV）介導(dǎo)增強型綠色熒光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）基因轉(zhuǎn)染豚鼠鞏膜成纖維細(xì)胞（guinea pig scleral fibroblast,GSF）的轉(zhuǎn)染效率及安全性,篩選合適的基因轉(zhuǎn)染載體。方法原代分離培養(yǎng)GSF并鑒定,利用AAV2、AAV5、AAV8、AAV9介導(dǎo)EGFP基因并按不同感染復(fù)數(shù)（multiplicity of infection,MOI）10、100、1000、10 000轉(zhuǎn)染GSF,空白對照組加入空白培養(yǎng)基,轉(zhuǎn)染后2 d、3 d、4 d、5 d熒光顯微鏡下觀察GFP表達(dá)強度及細(xì)胞生長狀態(tài),流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞轉(zhuǎn)染率及凋亡率,CCK-8法檢測細(xì)胞活力。結(jié)果 AAV感染GSF后2 d各組均可見弱熒光,熒光強度隨時間延長及MOI值增大而增強,而AAV9-EGFP組全程弱熒光,空白對照組全程無熒光。轉(zhuǎn)染后5 d,MOI=10 000時各組熒光最強,基因轉(zhuǎn)染率組間整體比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;組間兩兩比較,AAV8-EG... 

【文章來源】：眼科新進(jìn)展. 2020,40(11)北大核心

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

原代培養(yǎng)的GSF及免疫熒光染色結(jié)果(標(biāo)尺=50 μm)

EGFP基因轉(zhuǎn)染GSF后2 d各轉(zhuǎn)染組均可見弱熒光,在AAV2-EGFP組、AAV5-EGFP組和AAV8-EGFP組中,熒光強度隨感染時間延長及MOI值變大而增強;轉(zhuǎn)染后5 d、MOI=10 000時熒光強度最強。EGFP在細(xì)胞中表達(dá)呈綠色,彌漫整個細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì),AAV8-EGFP組熒光強度明顯強于AAV2-EGFP組與AAV5-EGFP組(見圖2-圖4)。AAV9-EGFP組在各時間點及各MOI值時均為微弱熒光�？瞻讓φ战M全程未見熒光�；蜣D(zhuǎn)染后每天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)良好,未見細(xì)胞脫壁及腫脹變形。圖3 AAV5-EGFP組轉(zhuǎn)染后不同時間熒光表達(dá)情況(×100)

AAV5-EGFP組轉(zhuǎn)染后不同時間熒光表達(dá)情況(×100)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]慢病毒介導(dǎo)綠色熒光蛋白基因轉(zhuǎn)染豚鼠鞏膜成纖維細(xì)胞的實驗研究[J]. 張?zhí)m蘭,于健,吳炳義,劉瓊,湯明芳,譚青,胡小娜.  眼科新進(jìn)展. 2011(12)
[2]8型重組腺相關(guān)病毒介導(dǎo)綠色熒光蛋白基因在角膜基質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)及影響[J]. 湯明芳,于健,白浪,劉瓊.  國際眼科雜志. 2011(05)
[3]2型重組腺相關(guān)病毒轉(zhuǎn)染新西蘭兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的體外研究[J]. 李連華,翁習(xí)生,邱貴興,吳志宏,林進(jìn),金今,王煒,楊新宇.  中華醫(yī)學(xué)雜志. 2006(21)



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