目的:采用肝毒性藥物四氯化碳（CCL4）構(gòu)建小鼠急性肝損傷模型,探討二甲雙胍通過抑制PI3K-AKT-m TOR信號通路對CCL4誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷的影響,為臨床上靶向治療急性肝損傷提供新思路。方法:選取18只6-8周齡健康雄性C57BL/6小鼠隨機分組:正常對照組、CCL4模型組和CCL4模型+二甲雙胍干預(yù)組（n=6）,模型組和干預(yù)組采用腹腔注射40%CCL4（5 m L/kg）構(gòu)建小鼠急性肝損傷模型,正常對照組給予等滲鹽水,造模前干預(yù)組腹腔注射二甲雙胍（溶于生理鹽水,按照小鼠體重400 mg/kg劑量給藥）預(yù)先處理6 h,其余兩組給予等滲鹽水。18 h后麻醉小鼠摘眼球采血檢測谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）;稱量小鼠的肝重和體重作肝重體重比;采用石蠟包埋肝組織制備切片,HE染色觀察小鼠肝臟的病理變化情況;通過ELISA與RT-q PCR檢測小鼠肝組織中的炎癥因子（IL-6,TNF-α,IL-10）及其基因m RNA表達水平;用Western-blot檢測小鼠肝組織中PI3K、AKT、m TOR蛋白磷酸化水平,以及Th17細胞和Treg細胞轉(zhuǎn)錄因子ROR-γt、Foxp3... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：39 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

二甲雙胍對CCL4誘導(dǎo)的急性肝損傷小鼠肝組織病理學(xué)的影響

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文10A：急性肝損傷小鼠肝臟表觀形態(tài)B：急性肝損傷小鼠肝重體重比圖2-1二甲雙胍對CCL4誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷肝臟形態(tài)及肝重比的影響2.2小鼠肝臟病理學(xué)改變各組小鼠肝臟組織采用石蠟包埋，制備成切片后HE染色，通過顯微鏡觀察并拍照記錄肝臟組織細胞結(jié)構(gòu)形態(tài)變化。結(jié)果如圖2-2所示，正常對照組小鼠肝臟細胞排列整齊,組織結(jié)構(gòu)規(guī)則，未見異常病理學(xué)變化，與正常對照組相比，模型組小鼠肝臟細胞核質(zhì)比變大，出現(xiàn)不同程度的氣球樣變及壞死灶，且肝小葉不規(guī)則。與CCL4模型組相比，二甲雙胍干預(yù)組肝細胞氣球樣變和壞死灶明顯減少，肝組織結(jié)構(gòu)較完整。見圖2-2：圖2-2二甲雙胍對CCL4誘導(dǎo)的急性肝損傷小鼠肝組織病理學(xué)的影響B(tài)

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文11運用BECKMANAU5821全自動生化分析儀測量各組小鼠血清中ALT、AST的濃度，與正常對照組對比，CCL4模型組18h后，小鼠血清中ALT、AST水平均顯著上升（P＜0.001）；而給予二甲雙胍預(yù)保護，ALT表達水平有所降低（P=0.007），同時AST表達水平也降低（P=0.006），結(jié)果均具有統(tǒng)計學(xué)差異（n=6，ALT水平統(tǒng)計中F＝16.126,AST水平統(tǒng)計中F＝25.568）。見如圖2-3：A:急性肝損傷小鼠血清轉(zhuǎn)氨酶ALT表達水平B:急性肝損傷小鼠血清轉(zhuǎn)氨酶AST表達水平圖2-3CCL4誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷血清轉(zhuǎn)氨酶表達水平2.4各組小鼠體內(nèi)炎癥因子表達水平變化本研究通過ELISA和RT-qPCR實驗測定小鼠體內(nèi)炎癥因子IL-6、IL-10和TNF-α的表達水平。2.4.1ELISA實驗結(jié)果與正常對照組比較，CCL4模型組小鼠肝臟組織勻漿中IL-6、IL-10、TNF-α的表達水平均升高（P＜0.001），差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義。給予二甲雙胍預(yù)保護，小鼠肝臟組織勻漿中炎癥因子IL-6、TNF-α的表達明顯降低（P＜0.05），小鼠肝臟組織勻漿中抗炎因子IL-10明顯升高（P=0.020），均具有統(tǒng)計學(xué)差異（n=6，其中肝臟組織勻漿表達水平統(tǒng)計中IL-6：F=92.88；TNF-α：F=115.6；IL-10：F=165.1）見圖2-4-1：AB2.3小鼠血清轉(zhuǎn)氨酶變化

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本文編號：3066756