研究目的明確TGF-β1能否誘導胃癌細胞株EMT的發(fā)生;在EMT過程中,研究TGF-β1與miR-200c之間存在何種聯(lián)系;最后觀察miR-200c的表達與TGF-β1誘導的EMT的相關性。研究方法1.相同濃度TGF-β1誘導胃癌細胞株SGC-7901不同時間,Western-blot法檢測EMT相關標志蛋白表達情況,CCK-8法檢測細胞增殖能力;2.建立SGC-7901細胞EMT模型后,定量PCR技術檢測TGF-β1對miR-200c表達量的影響;3.通過脂質體瞬時轉染方式人為過表達miR-200c,并用TGF-β1進行誘導,顯微鏡觀察胃癌細胞形態(tài),Western-blot法檢測EMT相關標志蛋白表達情況變化研究結果1.相同濃度TGF-β1（10ng/ml）誘導胃癌細胞0 h、12 h、24 h、36 h,Western-blot法結果顯示:上皮標志蛋白E-cadherin表達隨時間增加下降,間充質標志蛋白Vimentin表達隨時間增加而增加,CCK-8法結果顯示:TGF-β1處理組在0 h、12 h、24 h、36 h細胞增殖能力相比對照組也升高;胃癌EMT體外細胞模型建立成功。2... 

【文章來源】： 韓博強 甘肅中醫(yī)藥大學

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

顯微鏡下觀察TGF-β1刺激后上皮細胞形態(tài)變化（100×）

miR-200c對TGF-β1誘導胃癌細胞株上皮間質轉化的抑制作用195.2TGF-β1誘導SGC-7901細胞株后，CCK-8實驗檢測細胞增殖能力變化利用CCK-8實驗對細胞增殖能力進行檢測，以CK為對照，發(fā)現(xiàn)TGF-β1處理SGC-7901細胞株12h、24h、36h時增殖細胞數(shù)明顯多于CK組，其增殖能力顯著上升，且36h時與CK組的差異最為明顯（圖2）。圖2CCK-8實驗檢測細胞增殖能力（與0h對比，**P＜0.01）5.3TGF-β1誘導SGC-7901細胞株后，WB實驗檢測細胞中EMT相關分子的表達TGF-β1誘導刺激不同時間后行凝膠電泳，測定E-cadherin和Vimentin蛋白表達情況，結果顯示：以GAPDH蛋白為標準，隨著誘導時間的增加E-cadherin蛋白的表達逐漸降低，而Vimentin蛋白的表達則逐漸升高，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。這表明在分子蛋白水平TGF-β1促進了SGC-7901細胞的EMT，使細胞由上皮細胞表型向間質細胞表型發(fā)生改變（圖3）。

miR-200c對TGF-β1誘導胃癌細胞株上皮間質轉化的抑制作用20圖3WB檢測E-cadherin和Vimentin蛋白表達（與CK組對比，＊＊示P<0.01）6.討論腫瘤轉移是惡性腫瘤相關死亡的主要原因，EMT被認為是腫瘤發(fā)生和轉移的關鍵細胞過程，也是研究腫瘤轉移的理想模型[19]。研究證實，在一些因素的作用下，上皮細胞極性喪失，細胞間黏附連接和緊密連接丟失，細胞因此獲得了遷移性和浸潤性，細胞表型也隨之向間質細胞變化，這種改變被稱之為EMT[20,21]。在EMT過程中，間充質樣表型出現(xiàn)的可能原因為：細胞接觸通過調控和表觀遺傳機制的共同作用而被破壞、細胞的極性取向受損以及肌動蛋白細胞骨架重新排列[22]。這提高了細胞遷移和入侵的能力，其不僅在發(fā)育過程中起著關鍵的作用，而且還參與組織愈合、器官纖維化和癌癥發(fā)生等過程[23]。EMT在胃癌的發(fā)生、發(fā)展和轉移過程中發(fā)揮重要作用。He等人[24]的研究表明EMT

【參考文獻】：
期刊論文
[1]PI3K/AKT通路及miR-200c在胃癌上皮間質轉化中的作用[J]. 李蓋天,李洪濤,曹廷寶,魏登文,孔延龍,劉宏斌.  世界最新醫(yī)學信息文摘. 2019(32)



本文編號：2999082