本文關(guān)鍵詞：Rac1載體的構(gòu)建及其對RAW264.7細胞生物學(xué)作用的影響　出處：《江蘇大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： RAW264.7 Rac1 細胞增殖 細胞遷移 IL-1β IL-6

【摘要】：目的:以小鼠巨噬細胞RAW264.7為研究對象,分析RAW264.7細胞的Rac1表達水平,通過構(gòu)建Rac1載體和特異性si RNA探討其對RAW264.7細胞生物學(xué)活性的影響,為進一步探討Rac1的免疫調(diào)節(jié)作用奠定良好的基礎(chǔ)。方法:(1)經(jīng)反轉(zhuǎn)錄法克隆Rac1的c DNA并構(gòu)建Rac1基因表達載體p CDNA3.1-Rac1,酶切鑒定并進行序列測定驗證。(2)用脂質(zhì)體將重組質(zhì)粒p CDNA3.1-Rac1和si RNA轉(zhuǎn)入RAW264.7,Western blot技術(shù)檢測Rac1的蛋白表達水平,實時熒光定量PCR(q RT-PCR)測定Rac1 m RNA以及IL-1β、IL-6、IL-33和TNF-α的m RNA表達水平。(3)CCK-8法檢測細胞的OD值來觀察細胞的增殖情況。(4)Transwell法觀察細胞的遷移能力。(5)流式細胞儀分析細胞表面膜分子CD80、CD86、MHCⅡ表達的改變。(6)酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測細胞培養(yǎng)上清中IL-1β、IL-6、IL-33和TNF-α的蛋白表達水平。結(jié)果:(1)經(jīng)測序等手段鑒定表明,Rac1載體構(gòu)建成功,且將Rac1載體轉(zhuǎn)入RAW264.7細胞可見其m RNA和蛋白表達均明顯上調(diào)。(2)CCK-8法分析顯示,隨著Rac1的表達水平升高,細胞增殖能力增強。(3)Transwell結(jié)果表明,Rac1的表達水平與細胞遷移能力呈現(xiàn)正相關(guān)。(4)Rac1對RAW264.7細胞膜表面CD80、CD86和MHC-Ⅱ類分子的表達沒有明顯影響。然而,Rac1抑制劑及其特異性si RNA卻可上調(diào)上述三種膜分子的表達。(5)Rac1轉(zhuǎn)染的RAW264.7細胞,IL-1β、IL-6的m RNA和蛋白水平均顯著低于si RNA處理組及Rac1抑制劑組,而IL-33、TNF-α的表達各組之間沒有顯著差異。結(jié)論:Rac1的表達有助于RAW264.7細胞的增殖和遷移,并能顯著抑制IL-1β和IL-6的表達,而對細胞的抗原提呈作用無顯著影響。
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R392

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本文編號：1329937