發(fā)布時(shí)間：2017-12-24 18:34

  本文關(guān)鍵詞：脊髓內(nèi)NF-kappa B p65信號(hào)通路在膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎所致痛覺敏感中的作用　出處：《山東大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：研究背景膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎(Knee Osteoarthritis,KOA)是老年人中的常見病和多發(fā)病,嚴(yán)重?fù)p害患者身心傷害,同時(shí)給社會(huì)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。KOA主要表現(xiàn)為膝關(guān)節(jié)慢性疼痛、活動(dòng)障礙甚至殘疾,而難以忍受的慢性疼痛往往是患者就醫(yī)的主要原因。目前,KOA慢性疼痛的藥物治療效果不佳,且患者長(zhǎng)期用藥易產(chǎn)生耐藥及嚴(yán)重的副作用。KOA后期,患者不得不選擇進(jìn)行膝關(guān)節(jié)置換術(shù)來(lái)改善關(guān)節(jié)的功能、緩解疼痛。然而,全膝關(guān)節(jié)置換術(shù)(total knee replacement,TKR)后6個(gè)月內(nèi),仍有16%-39%的患者存在膝關(guān)節(jié)疼痛。因此,目前針對(duì)KOA后期慢性、難治性疼痛缺乏行之有效的治療方法,患者只能長(zhǎng)期忍受慢性疼痛帶來(lái)的身體上和精神上的折磨。除此之外,相關(guān)的研究還表明膝關(guān)節(jié)痛還會(huì)使得患者的死亡率增高�；诨颊邔�(duì)KOA慢性疼痛有效治療方案的迫切需求,臨床研究人員也漸漸開始關(guān)注KOA慢性疼痛,KOA慢性疼痛的發(fā)病機(jī)制及治療方案的研究也漸漸成為研究的熱點(diǎn)。臨床研究發(fā)現(xiàn),患者疼痛的嚴(yán)重程度及持續(xù)時(shí)間與關(guān)節(jié)內(nèi)部的病理改變不成正比。進(jìn)一步的研究證實(shí),疼痛相關(guān)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的改變相比于外周因素在KOA慢性疼痛發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著更為重要的作用。目前,臨床上已經(jīng)嘗試通過(guò)對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的干預(yù)來(lái)治療KOA患者后期產(chǎn)生的慢性難治性疼痛。因此,探索KOA導(dǎo)致的慢性疼痛的中樞發(fā)病機(jī)制也許能夠?yàn)槲覀冋业終OA慢性疼痛治療的理想靶點(diǎn)。核因子-κB(Nuclear factor-kappa B,NF-κB)是一種重要的核轉(zhuǎn)錄因子,在免疫和炎癥反應(yīng)、細(xì)胞的分裂和凋亡過(guò)程中發(fā)揮著必不可少的作用。除了發(fā)揮上述重要作用外,在神經(jīng)系統(tǒng)中NF-κB還能夠參與到學(xué)習(xí)、記憶和疼痛的形成過(guò)程中。多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn),在脊髓甚至是更高級(jí)別的中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)炎癥、創(chuàng)傷等刺激因素本身及隨之產(chǎn)生炎癥因子、神經(jīng)遞質(zhì)和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子均可導(dǎo)致NF-κB信號(hào)通路的激活。NF-κB信號(hào)通路的激活又可以使進(jìn)一步的導(dǎo)致脊髓內(nèi)炎癥反應(yīng)加重、神經(jīng)遞質(zhì)釋放量增加以及離子通道功能改變,進(jìn)而導(dǎo)致疼痛程度加劇。當(dāng)刺激因素持續(xù)存在,NF-κB信號(hào)通路處于長(zhǎng)期激活狀態(tài),脊髓背角內(nèi)炎癥慢性化、神經(jīng)遞質(zhì)受體大幅度增加,甚至導(dǎo)致神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)結(jié)構(gòu)性的改變,產(chǎn)生慢性、難治性及神經(jīng)病理性疼痛。NF-κB二聚體是其最常見的活性狀態(tài),p50/p65是最常見的二聚體形式,其中主要由p65與目的基因結(jié)合因此我們選擇NF-κB/p65作為我們的研究對(duì)象。前期研究已證實(shí),干擾脊髓內(nèi)NF-κB/p65的表達(dá)能夠減輕風(fēng)濕性膝關(guān)節(jié)炎的疼痛程度,同時(shí)還能夠改善外周炎癥反應(yīng)。然而,在主要表現(xiàn)為慢性退行性病變而非炎癥反應(yīng)的骨性關(guān)節(jié)炎中NF-κB/p65是否能夠發(fā)揮同樣的作用卻未見報(bào)道。本研究將在以碘乙酸鈉(monosodium iodoacetate,MIA)建立的KOA大鼠模型上,對(duì)NF-κB/p65在KOA導(dǎo)致的慢性疼痛及關(guān)節(jié)破壞的進(jìn)展速度上所發(fā)揮的作用進(jìn)行研究。研究目的本研究目的是通過(guò)關(guān)節(jié)內(nèi)注射MIA建立的KOA大鼠模型,探索脊髓內(nèi)NF-κB/p65信號(hào)通路在KOA導(dǎo)致的疼痛敏感的形成過(guò)程中的作用及其機(jī)制。研究方法1、采用隨機(jī)數(shù)字法將健康的雌性SD大鼠為三組:對(duì)照組、KOA模型組和NF-κ B抑制劑二硫代氨基甲酸吡咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)鞘內(nèi)給藥的KOA模型組,每組50只。自大鼠關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射MIA完成當(dāng)天起,每天鞘內(nèi)給予大鼠PDTC 12μl(0.2mg/ml)直至相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)。2、MIA注射前1d和注射后7d、14d、21d和28d通過(guò)檢測(cè)50%縮足閾值(paw withdrawal threshold,PWT)對(duì)大鼠的機(jī)械痛域進(jìn)行檢測(cè)。于相同時(shí)間點(diǎn),通過(guò)直接拍照和制作病理切片的方法對(duì)大鼠關(guān)節(jié)面肉眼及顯微鏡下的病理學(xué)改變進(jìn)行觀察和評(píng)估;采用Western blot技術(shù)、免疫熒光技術(shù)和RT-PCR(real-time polymerase chain reaction)技術(shù)檢測(cè)大鼠脊髓內(nèi)NF-κ B/p65的蛋白量和轉(zhuǎn)錄水平的變化;采用 RT-PCR檢測(cè) IL-1β(interleukin-1β)、IL-33 和 TNF-α(tumor necrosis factor-α)的轉(zhuǎn)錄水平的變化趨勢(shì)。結(jié)果MIA注射后,KOA模型組大鼠膝關(guān)節(jié)的痛覺敏感程度逐漸增加,并于14d到達(dá)高峰后維持在較高水平;關(guān)節(jié)面破壞程度不斷加重、關(guān)節(jié)間隙逐漸變窄,符合臨床上KOA的變化特點(diǎn)。脊髓內(nèi)NF-κB/β65的蛋白水平和mRNA水平與大鼠痛覺敏感程度的變化趨勢(shì)一致,脊髓內(nèi)IL-1β、IL-33和TNF-α的轉(zhuǎn)錄水平逐漸增加,峰值與NF-κB/p65一致。鞘內(nèi)注射PDTC模型組MIA注射后21d起痛覺敏感程度較模型組明顯降低,向KOA模型大鼠鞘內(nèi)注射PDTC后大鼠脊髓內(nèi)NF-κB/p65的蛋白水平和mRNA水平較模型組明顯降低。鞘內(nèi)注射PDTC模型組大鼠MIA注射后28d時(shí)脊髓內(nèi)的IL-1 β、IL-33和TNF-α轉(zhuǎn)錄水平較模型組也明顯降低。結(jié)論骨性關(guān)節(jié)炎導(dǎo)致脊髓背角內(nèi)NF-κB/p65蛋白和mRNA的表達(dá)量的上調(diào);鞘內(nèi)注射阻滯劑PDTC能夠下調(diào)脊髓內(nèi)NF-κB/p65蛋白和mRNA的表達(dá)量,并且在KOA中后期能夠降低大鼠的痛覺敏感程度。結(jié)果表明,脊髓內(nèi)NF-κB/p65在KOA中后期產(chǎn)生的痛覺過(guò)敏中發(fā)揮著重要的作用。此外,下調(diào)脊髓內(nèi)NF-κB/p65還能抑制IL-1β、IL-33和TNF-α在KOA中后期的過(guò)表達(dá)。在骨性關(guān)節(jié)炎的進(jìn)展的后期,脊髓內(nèi)NF-κB/p65增加了大鼠的痛覺敏感程度有可能是通過(guò)上調(diào)IL-1β、IL-33和TNF-α的表達(dá)量而導(dǎo)致的。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R684.3

【參考文獻(xiàn)】

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1 Georgios I Drosos;Triantafilia Triantafilidou;Athanasios Ververidis;Cristina Agelopoulou;Theodosia Vogiatzaki;Konstantinos Kazakos;;Persistent post-surgical pain and neuropathic pain after total knee replacement[J];World Journal of Orthopedics;2015年07期

2 張乃崢，施全勝，張雪哲，沙力進(jìn)，王永和，趙淑霞，蘆世華，于桂蘭，，屈輝;膝骨關(guān)節(jié)炎的流行病學(xué)調(diào)查[J];中華內(nèi)科雜志;1995年02期

本文編號(hào)：1329515