本文關鍵詞：TNF-α促進B7-H1介導的肝癌細胞的適應性免疫抵抗　出處：《山東大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：目的肝癌(Hepatocellular carcinoma)是僅次于肺癌的世界第二大致死性癌癥,成為危害人類健康的主要疾病之一。肝細胞肝癌是一種典型的炎癥相關性腫瘤,通常由慢性的肝炎患者發(fā)展而來,慢性炎癥的炎癥微環(huán)境與肝癌發(fā)生發(fā)展密切相關。陳列平教授提出腫瘤免疫逃逸的"適應性抵抗假說",假說指出,腫瘤細胞針對免疫反應,產(chǎn)生了一個適應自身生存的微環(huán)境。腫瘤的產(chǎn)生是幾年甚至數(shù)十年的漫長過程,或許腫瘤組織已經(jīng)將微環(huán)境對腫瘤細胞的免疫反應改造為適應于腫瘤細胞生長的機制。腫瘤組織浸潤的T淋巴細胞分泌細胞因子例如,IFN-γ,IFN-γ作用于免疫細胞可以增強免疫細胞的活性,從而殺傷腫瘤細胞,但同時IFN-γ也可以使腫瘤細胞B7-H1分子表達增加,表達于腫瘤細胞表面的B7-H1分子與T細胞表面的受體PD-1結(jié)合,PD-1是表達在T細胞表面的一種重要的免疫抑制性蛋白,B7-H1與PD-1結(jié)合可以抑制T細胞的活化和細胞因子的產(chǎn)生,導致T細胞功能的耗竭,促進腫瘤細胞的免疫逃逸。隨著免疫療法的不斷發(fā)展進步,特別是近幾年免疫檢查點療法的迅速發(fā)展,人類對于腫瘤的治療取得了很大進步。最新一代的免疫檢查點抑制劑通過阻斷淋巴細胞上PD1與抗原呈遞細胞或者腫瘤細胞上的B7-H1分子的相互作用而發(fā)揮治療效果。FDA已經(jīng)批準B7-H1藥物應用于臨床治療非小細胞肺癌和膀胱癌,其余適應癥正在臨床實驗階段。腫瘤微環(huán)境(Tumor Microenviroment,TME)是腫瘤細胞賴以生存的復雜環(huán)境,主要由多種細胞和蛋白質(zhì)組成,不僅起支架作用還含有大量的細胞因子。B7-H1的表達受多種細胞因子的影響,例如IFN-γ、TNF-α、IL-4和VEGF等,在肝癌的腫瘤微環(huán)境中含有大量的細胞因子,IFN-γ和TNF-α是其中兩種最主要的細胞因子。那么,我們推測在腫瘤微環(huán)境中IFN-γ是否能引起肝癌細胞B7-H1分子的表達?TNF-α是否能引起肝癌細胞B7-H1分子的升高?二者在促進B7-H1升高中有怎樣的聯(lián)系?以及表達增加的B7-H1分子是否具有免疫抵抗功能?針對上述問題我們進行了如下研究,本課題首先研究了 IFN-γ可以誘導肝癌細胞表達B7-H1分子,以及主要通過的信號通路是JAK/STAT1信號通路。并且發(fā)現(xiàn)TNF-α與IFN-γ可以協(xié)同促進B7-H1分子的表達。進一步研究協(xié)同促進作用的機制,研究發(fā)現(xiàn)TNF-α通過NF-κB信號通路促進IFNGR1、IFNGR2的表達,進而增強IFN-γ信號通路的活化,導致肝癌細胞B7-H1分子的表達增加。為了進一步研究TNF-α和IFN-γ誘導表達的B7-H1分子是否具有免疫抵抗功能,我們進行了 T細胞與腫瘤細胞的共培養(yǎng)實驗和動物實驗,實驗結(jié)果表明協(xié)同誘導的B7-H1分子能抑制T細胞的增殖,促進腫瘤細胞的免疫逃逸。所以TNF-α和IFN-γ誘導表達的B7-H1分子具有免疫抵抗作用。方法一、IFN-γ誘導肝癌細胞表達B7-H1分子(一)B7-H1分子的表達對于IFN-γ有濃度和時間的依賴性肝癌細胞SMMC-7721種板貼壁后,采用不同濃度的IFN-γ誘導B7-H1的表達,將儲存液濃度為100ng/μl的IFN-γ進行稀釋,使其作用濃度分別為100ng/ml、50 ng/ml、20 ng/ml、10 ng/ml,誘導細胞 24h 后收 RNA,RT-PCR 檢測 B7-H1 RNA水平的表達情況。進一步檢測在相同濃度的IFN-γ(50 ng/ml)誘導下,B7-H1表達隨時間的變化,分別誘導0、1、2、3、6、12、24h采用RT-PCR以及qPCR的方法檢測B7-H1分子的表達情況。(二)IFN-γ誘導肝癌細胞B7-H1分子在RNA以及蛋白水平的表達本實驗所用的肝癌細胞系SMMC-7721、HLE-7402、HuH-7和Hep3B均購于中國科學院上海細胞庫,這四種肝癌細胞均在50 ng/ml IFN-γ誘導6h的條件下采用RT-PCR方法檢測B7-H1 RNA水平的表達。我們選擇其中兩種細胞系SMMC-7721和HuH-7進行后續(xù)實驗,在50 ng/ml IFN-γ誘導6h的條件下用qPCR方法進一步檢測B7-H1 RNA水平的表達。采用50ng/ml IFN-γ誘導24h后,用PBS清洗一次去除死亡細胞,再用胰酶將細胞消化成單個細胞,清洗去除胰酶,再標記人B7-H1的流式抗體,同時采用同型抗體去除非特異性著色,運用流式細胞術方法檢測B7-H1蛋白水平的表達。二、IFN-γ誘導肝癌細胞B7-H1分子表達主要通過的信號通路首先檢測IFN-γ誘導肝癌細胞表達B7-H1分子涉及的信號通路。將SMMC-7721細胞種板貼壁后再加入IFN-γ(50ng/ml),分別誘導0、5、15、30、60min,Western-blot 方法檢測 p-STAT1、p-AKT、p-P65、p-P38、p-MEK 和 p-JNK的活化情況。根據(jù)檢測到的IFN-γ誘導肝癌細胞表達B7-H1分子涉及的信號通路購買信號通路的抑制劑。Western-blot方法顯示涉及的信號通路有NF-κB、PI3K、MEK、JNK、P38、JAK/STAT1。首先采用Western-blot方法檢測各種抑制劑(BAY11-7082(NF-κB)、LY294002(PI3Kα/δ/β)、U0126(MEK1/2),、SP600125(JNK1/2/3)、SB202190(p38α/β)、Ruxolitinib(JAK1/2))對于對應信號通路的抑制效果以及最適抑制濃度。將SMMC-7721細胞種板貼壁后,提前采用最適濃度抑制劑處理1h,再加入IFN-γ(50ng/ml)同時含有新抑制劑,37℃,培養(yǎng)15min,加入蛋白裂解液收細胞蛋白,采用Western-blot的方法檢測最適抑制劑濃度。檢測IFN-γ誘導肝癌細胞B7-H1分子主要通過的信號通路。將SMMC-7721細胞種板貼壁后,提前運用最適濃度的抑制劑處理1h,再加入IFN-γ(50ng/ml)同時含有新抑制劑,37℃,誘導細胞6h用qPCR方法檢測B7-H1的表達情況。進一步采用小干擾確證IFN-γ誘導肝癌細胞B7-H1分子表達主要通過JAK/STAT1信號通路。所以合成JAK/STAT1信號通路中兩個重要的轉(zhuǎn)錄因子STAT1和IRF1的小干擾。首先驗證小干擾的干擾效果,SMMC-7721細胞種板貼壁,第二天大約生長至70%進行轉(zhuǎn)染,轉(zhuǎn)染24h后收RNA,RT-PCR的方法檢測STAT1和IRF1的表達水平,選擇干擾效果好的進行后續(xù)實驗。SMMC-7721細胞種板轉(zhuǎn)染STAT1和IRF1小干擾,24h后加IFN-γ(50 ng/ml)誘導細胞6h,qPCR檢測B7-H1 RNA水平的變化。三、TNF-α與IFN-γ協(xié)同誘導肝癌細胞表達B7-H1分子SMMC-7721 或 HuH-7 細胞種板貼壁后,分別用 TNF-α(50ng/ml)、IFN-γ(5ng/ml)或者二者同時誘導細胞,6h后收RNA,采用qPCR方法檢測在RNA水平B7-H1分子的表達變化情況。誘導24h后采用流式細胞術的方法檢測蛋白水平的變化。四、TNF-α與IFN-γ協(xié)同誘導肝癌細胞表達B7-H1分子的機制(一)分析TNF-α對于IFN-γ信號通路的作用運用各種信號通路的抑制劑檢測TNF-α與IFN-γ協(xié)同誘導B7-H1表達過程中信號通路的變化。先將SMMC-7721細胞或HuH-7細胞種板貼壁后用抑制劑處理,37℃,1h,抑制信號通路的活性,再用TNF-α(50ng/ml)和IFN-γ(5ng/ml)同時含有抑制劑的培養(yǎng)基誘導細胞,6h后收細胞的RNA,運用qPCR方法檢測B7-H1分子的表達變化情況。為了進一步驗證信號通路的變化,我們運用信號通路的小干擾RNA,siSTAT1、siIRF1、siP65、sic-JUN、sic-FOS 和 siATF2,12 孔板,轉(zhuǎn)染小干擾RNA24h 后加 TNF-α(50ng/ml)和IFN-γ(5ng/ml)誘導細胞,6h 后收 RNA,運用qPCR方法檢測B7-H1分子的變化情況。將種板貼壁后的細胞用TNF-α(50ng/ml)和IFN-γ(5ng/ml)培養(yǎng)基誘導細胞表達B7-H1分子,24h后收細胞蛋白,用Western-blot方法檢測蛋白水平JAK/STAT1信號通路中JAK2以及p-JAK2、STAT1以及p-STAT1的變化情況。(二)TNF-α對于IFNGR1、IFNGR2表達的影響檢測JAK/STAT1信號通路上游分子IFNGR1、IFNGR2的變化情況。將種板貼壁后的細胞分別用TNF-α(50ng/ml)、IFN-γ(5ng/ml)或者二者同時誘導細胞表達B7-H1分子,6h后收細胞的RNA,qPCR的方法檢測IFNGR1、IFNGR2表達的變化。為了進一步研究TNF-α增強IFNGR1、IFNGR2表達的機制。首先查閱文獻TNF-α主要的信號通路有NF-κB、MEK、P38、JNK等,運用這些信號通路的抑制劑抑制細胞,將SMMC-7721細胞或HuH-7細胞種板貼壁后提前1h加抑制劑處理(5μM BAY11-7082(NF-κB)、5μM U0126(MEK1/2)、5μM SB202190(p38α/β)、5μM SP600125(JNK1/2/3)),再運用 TNF-α(50ng/ml)誘導 6h,qPCR 的方法檢測IFNGR1、IFNGR2表達的變化。為了進一步確證TNF-α是通過NF-κB信號通路增強IFNGR1、IFNGR2的表達,運用小干擾試驗進行驗證。將SMMC-7721細胞或HuH-7細胞種板貼壁后轉(zhuǎn)染 siP65,24h 后再用 TNF-α(50ng/ml)誘導 6h,qPCR 的方法檢測 IFNGR1、IFNGR2表達的變化。五、TNF-α與IFN-γ協(xié)同誘導肝癌細胞表達的B7-H1分子具有免疫抵抗功能為了驗證TNF-α與IFN-γ協(xié)同誘導肝癌細胞表達的B7-H1分子是否具有免疫抵抗功能,我們進行了腫瘤細胞與T細胞的共培養(yǎng)實驗以及動物實驗。(一)小鼠腫瘤細胞與T細胞共培養(yǎng)實驗1.TNF-α與IFN-γ協(xié)同誘導小鼠肝癌細胞表達B7-H1分子小鼠肝癌細胞Hepa1-6貼壁后,采用IFN-γ、TNF-α或者IFN-γ和TNF-α同時誘導細胞表達B7-H1分子,誘導6h后,收細胞RNA,qPCR方法檢測Hepa1-6細胞表面B7-H1分子RNA水平表達的變化情況。細胞因子誘導Hepa1-6細胞24h,用PBS清洗一次去除死亡細胞,再用胰酶將細胞消化成單個細胞,清洗去除胰酶,標記小鼠B7-H1流式抗體,檢測B7-H1蛋白水平的變化。2.腫瘤細胞種板和轉(zhuǎn)染合成小鼠B7-H1的小干擾,首先檢測小干擾的效果。Hepa1-6細胞種板,12孔板,每孔1.8×105個細胞,第二天細胞生長至70%進行轉(zhuǎn)染小鼠B7-H1小干擾。轉(zhuǎn)染24h,qPCR檢測RNA水平的變化。轉(zhuǎn)染48h,Western-blot檢測蛋白水平的變化。第一天下午小鼠Hepa1-6種板,12孔板每孔1.8×105個。第二天上午生長至70%左右進行轉(zhuǎn)染小鼠B7-H1。3.腫瘤細胞用IFN-γ和TNF-α處理IFN-γ儲存濃度為50ng/μl,作用濃度為5ng/ml,取2μl儲存液溶于18μl的T細胞培養(yǎng)基中,稀釋后濃度為5ng/μl,則每1ml培養(yǎng)基中加1μl IFN-γ稀釋液。TNF-α儲存濃度為100ng/μl,作用濃度為50ng/ml,取8μl儲存液溶于72μl的T細胞培養(yǎng)基中,稀釋后濃度為10ng/μl,則每1ml培養(yǎng)基中加5μl TNF-α稀釋液。上述Hepa1-6細胞種板轉(zhuǎn),6h換液同時加IFN-γ和TNF-α處理。4.將腫瘤細胞用mitomycinC處理第三天上午,將腫瘤細胞用mitomycinC處理,mitomycinC粉末5mg,加747.65μl DMSO稀釋后濃度為20mM,即6.687μg/μl。設置濃度梯度確定最適宜mitomycinC處理的作用濃度,將最適濃度的mitomycinC加入上述轉(zhuǎn)染且已用IFN-γ和TNF-α處理的腫瘤細胞培養(yǎng)板中,靜置37℃,30min,清洗三次去除殘留的 mitomycinC。5.取小鼠單個核細胞第三天上午取SPF級的6-8W周C57BL/6J小鼠,脫頸處死置于75%酒精中浸泡5min,超凈工作臺中取小鼠脾臟組織,取出后在PBS中清洗2遍。置于70μM的過濾器上先用剪刀剪碎再用5ml針栓研磨,細胞懸液轉(zhuǎn)移到10ml離心管中,離心1000rpm,5min,用3ml Tris-NH4Cl重懸沉淀裂解紅細胞,靜置3min。加5ml培養(yǎng)基阻止裂紅,1000rpm,5min。用2mlT細胞培養(yǎng)基重懸,取1ml溶于9ml中進行10倍稀釋,計數(shù)。6.CFSE染色CFSE每管粉末50μg,分子量為557.47,每管加18ulDMSO,則懸液的濃度為5mM。設置濃度梯度選擇較好的CFSE作用濃度。12孔板每孔需單個核細胞1.6×106個,按所需的細胞數(shù)計算所需T細胞懸液的量,離心,1000r/min,5min。用最適濃度的CFSE溶液重懸細胞,室溫靜置7min,加5倍體積含有血清的培養(yǎng)基冰上靜置5min。用大量含血清培養(yǎng)基清洗三次,最后用T細胞培養(yǎng)基重懸細胞沉淀。設置濃度梯度選擇適宜的ConA作用濃度,根據(jù)每孔需要T細胞、IFN-γ、TNF-α以及ConA配成細胞懸液,加入到用mitomycinC處理的腫瘤細胞孔中進行共培養(yǎng)。共培養(yǎng)第二天,每孔各加1ml T細胞培養(yǎng)基,培養(yǎng)基中是否需要IFN-γ、TNF-α以及ConA都與前述孔中液體相同。7.流式細胞術檢測共培養(yǎng)72h,采用流式細胞術方法檢測T細胞的增殖情況。將12孔板中的細胞懸液加入到對應流式管中,用PBS清洗一次將清洗的PBS也加入到對應管中。用胰酶消化殘留細胞,將細胞全部轉(zhuǎn)移到對應的流式管中,1000r/min,5min。用50μl含0.5%血清的PBS重懸。標記CD3抗體4℃,45min。每管加3ml含0.5%血清的PBS清洗一次,1000r/min,5min。用300μl含0.5%血清的PBS重懸,用400目銅網(wǎng)進行過濾,流式細胞術檢測B7-H1分子在蛋白水平表達的情況。(二)動物實驗1.小鼠肝癌細胞系的準備選擇狀態(tài)較好的小鼠肝癌細胞hepa1-6,將hepa1-6細胞大量擴增。2.皮下成瘤將瓶中的細胞用胰酶消化成單個細胞,調(diào)整濃度大約4×106個/ml,選擇SPF級的6-8W周C57BL/6J小鼠,每只小鼠腹部皮下注射100μl細胞懸液,觀察腫瘤的生長情況。根據(jù)腫瘤大小將小鼠平均分為3組,A組注射siNC,B組注射siNC、IFN-γ和 TNF-α,C 組注射 siB7-H1、IFN-γ 和 TNF-α。3.注射小干擾RNA和細胞因子第一天將粉末小干擾RNA用DEPC水溶解,每只小鼠大約10μg siRNA。運用專用體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑polyplus in vivo-jetPEI進行瘤內(nèi)注射。第二天瘤內(nèi)注射細胞因子TNF-α0.5μg/只,IFN-γ0.05μg/只,小干擾和細胞因子每三天注射一次,小干擾和細胞因子共注射四次。4.腫瘤體積的測量第三天測量腫瘤體積,整個過程腫瘤體積測量六次。結(jié)果一、IFN-γ誘導肝癌細胞表達B7-H1分子為了檢測IFN-γ是否能誘導肝癌細胞系B7-H1分子的表達,運用肝癌細胞系SMMC-7721在不同濃度IFN-γ誘導條件下檢測B7-H1的表達情況。結(jié)果顯示在采用不同濃度IFN-γ誘導條件下所表達的B7-H1分子的強度不同,隨著IFN-γ濃度增加B7-H1分子的表達量增加,但是IFN-γ到達一定濃度時B7-H1分子的表達強度不再增加,同時結(jié)果顯示50ng/ml的IFN-γ是引起B(yǎng)7-H1表達的最適濃度。相同濃度的IFN-γ(50ng/ml)誘導不同時間所表達的B7-H1分子的強度也不同,在0-6h隨著時間延長B7-H1分子的表達量增強,6h之后隨著時間延長B7-H1分子的表達降低。為了進一步確認上述現(xiàn)象,我們又在另外幾種肝癌細胞SMMC-7721、HLE-7402、HuH-7、Hep3B中進行了上述實驗。結(jié)果顯示IFN-γ均可以誘導上述幾種肝癌細胞B7-H1分子在RNA水平的表達。又進一步運用流式細胞術的方法檢測IFN-γ是否可以誘導肝癌細胞B7-H1分子在蛋白水平的表達,結(jié)果顯示在SMMC-7721和HuH-7細胞中,IFN-γ均可以誘導B7-H1分子在蛋白水平的表達二、IFN-γ誘導肝癌細胞B7-H1的表達主要通過JAK/STAT1信號通路。用Western-blot方法檢測到IFN-γ誘導肝癌細胞表達B7-H1分子涉及多種信號通路。進一步用Western-blot方法檢測各種抑制劑的最適抑制濃度,在IFN-γ誘導的基礎上運用最適濃度的抑制劑,結(jié)果顯示多條信號通路對于IFN-γ誘導的B7-H1的表達都有影響,但起主要作用的是JAK/STAT1信號通路。轉(zhuǎn)染JAK/STAT1信號通路中主要的轉(zhuǎn)錄因子STAT1和IRF1的小干擾后,再用IFN-γ誘導,結(jié)果顯示B7-H1的表達明顯降低,驗證了上述結(jié)論JAK/STAT1信號通路在這個過程中起主要作用。三、TNF-α與IFN-γ協(xié)同誘導肝癌細胞B7-H1分子的表達在SMMC-7721細胞和HuH-7細胞中采用TNF-α、IFN-γ或者二者同時誘導細胞表達B7-H1分子,研究發(fā)現(xiàn),二者同時誘導比單用TNF-α或者IFN-γ時B7-H1分子在RNA水平以及蛋白水平的表達都有明顯升高。所以,TNF-α和IFN-γ在誘導肝癌細胞B7-H1表達過程中二者具有明顯的協(xié)同促進作用。四、TNF-α與IFN-γ協(xié)同誘導肝癌細胞表達B7-H1分子的機制為了研究二者協(xié)同誘導肝癌細胞表達B7-H1分子過程中主要的信號通路,運用抑制劑抑制信號通路的活化,同時運用TNF-α、IFN-γ誘導細胞表達B7-H1分子。結(jié)果顯示,在二者協(xié)調(diào)誘導B7-H1分子表達過程中起主要作用的信號通路還是JAK/STAT1信號通路。為了進一步驗證JAK/STAT1信號通路的作用,運用信號通路的小干擾RNA,發(fā)現(xiàn)運用siSTAT1、siIRF1的小干擾后B7-H1下降較明顯與抑制劑的效果一致。進一步檢測JAK/STAT1信號通路蛋白水平的變化,發(fā)現(xiàn)在蛋白水平JAK2、STAT1磷酸化水平增加,即這條信號通路的活化增強。又檢測這條信號通路的上游分子IFNGR1、IFNGR2的表達情況,qPCR檢測發(fā)現(xiàn)TNF-α均能使IFNGR1、IFNGR2的表達增加。為了進一步探討TNF-α怎樣增強IFNGR1、IFNGR2的表達。與前述相同運用信號通路的抑制劑以及小干擾RNA,檢測在只用TNF-α刺激時IFNGR1、IFNGR2的變化,結(jié)果顯示運用NF-κB的抑制劑以及小干擾RNA之后,IFNGR1、IFNGR2的表達明顯降低。即TNF-α通過NF-κB信號通路增強IFNGR1、IFNGR2的表達。五、TNF-α與IFN-γ協(xié)同誘導肝癌細胞表達的B7-H1分子具有免疫抵抗作用實驗結(jié)果顯示小鼠肝癌細胞Hepa1-6可以被TNF-α、IFN-γ誘導表達B7-H1分子,而且TNF-α和IFN-γ對于B7-H1的表達具有協(xié)同促進作用。將小鼠的腫瘤細胞用TNF-α和IFN-γ處理使B7-H1分子表達增加,再將腫瘤細胞與T細胞共培養(yǎng),與未用TNF-α和IFN-γ處理的對照組相比,流式細胞術結(jié)果顯示CD3+的細胞中CFSE的平均熒光強度增強,即T細胞的增殖減弱,所以T細胞的增殖受到抑制。將小鼠的腫瘤細胞運用B7-H1的小干擾處理,再用TNF-α、IFN-γ誘導,流式細胞術結(jié)果顯示CD3+的細胞中CFSE的平均熒光強度降低,T細胞增殖基本與對照組一致。實驗結(jié)果顯示TNF-α與IFN-γ協(xié)同誘導肝癌細胞表達的B7-H1分子能抑制T細胞的增殖。動物實驗結(jié)果顯示,A組注射NC小干擾,B組注射NC小干擾并且注射TNF-α和IFN-γ,C組注射B7-H1小干擾并且注射TNF-α和IFN-γ,所以B組B7-H1的表達最強,六次腫瘤體積測量的統(tǒng)計圖顯示,B組腫瘤體積比A、C組大,并且有統(tǒng)計學差異。動物實驗結(jié)果顯示,TNF-α與IFN-γ協(xié)同誘導表達的B7-H1分子具有功能,能促進腫瘤細胞的免疫逃逸。結(jié)論一、IFN-γ主要通過JAK/STAT1信號通路誘導肝癌細胞B7-H1分子的表達二、TNF-α與IFN--γ協(xié)同誘導肝癌細胞B7-H1分子的表達三、TNF-α通過NF-κB信號通路增強IFNGR1、IFNGR2的表達,促進IFN-γ信號通路的活化四、TNF-α與IFN-γ協(xié)同誘導肝癌細胞表達的B7-H1分子具有免疫抵抗作用
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R735.7

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10 李曉軍;朱傳東;汪萍;賈麗;陳芳芳;夏欣一;陳龍邦;;人Id3基因在A549細胞中的表達及對細胞生長功能的研究[A];第六屆全國免疫學學術大會論文集[C];2008年

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1 記者 吳春燕 通訊員 寧習源 吳劍鵬;人類情緒可影響干細胞生長[N];光明日報;2014年

2 馮衛(wèi)東;老化干細胞可轉(zhuǎn)變成年輕干細胞[N];科技日報;2012年

3 常麗君;科學家闡明核內(nèi)周期運作機制[N];科技日報;2011年

4 本版編輯邋杜華斌 邰舉 毛文波 顧鋼 陳超 何屹 毛黎;2007年世界科技發(fā)展回顧(六)[N];科技日報;2008年

5 通訊員 李靜;廈大教授發(fā)現(xiàn)細胞防癌“玄機”[N];廈門日報;2009年

6 永誠;美發(fā)現(xiàn)控制細胞生長的蛋白質(zhì)[N];中國醫(yī)藥報;2000年

7 記者 張孟軍;加找到刺激干細胞生長分子[N];科技日報;2001年

8 張?zhí)锟?干細胞研究精彩紛呈[N];中國醫(yī)藥報;2011年

9 邵薇/編譯;T細胞的非凡能力[N];北京科技報;2003年

10 經(jīng)天;控制細胞生長的蛋白質(zhì)[N];中藥事業(yè)報;2000年

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1 蔣淵;缺氧肝癌細胞中HIF-1和NF-κB的相互作用及其分子機制的研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

2 張廣;肝星狀細胞在肝癌細胞惡性行為中的作用及機制研究[D];南京醫(yī)科大學;2015年

3 付托;活性氧族在CHO細胞補料批次培養(yǎng)中的作用、機制及調(diào)控研究[D];第二軍醫(yī)大學;2016年

4 彭林;重組凝血因子VII在CHO細胞中的高效表達[D];江南大學;2017年

5 楊小超;陽離子配體修飾的納米金用于細胞轉(zhuǎn)運和微囊自組裝研究[D];重慶大學;2010年

6 葉玲玲;基于生物素誘導表達系統(tǒng)的HEK293細胞多基因代謝工程改造[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2011年

7 梁國斌;產(chǎn)朊假絲酵母生產(chǎn)谷胱甘肽過程控制與優(yōu)化[D];江南大學;2008年

8 楊海虹;鈣池操縱性鈣內(nèi)流在人肺腺癌A549細胞中的研究[D];南方醫(yī)科大學;2012年

9 常玉娟;基于Nrf2/ARE通路辛開苦降方胃康寧對人胃粘膜上皮細胞SOD2、GSTP1相關調(diào)控機制的研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2015年

10 楊麗君;人Fcα/μR的表達與功能的初步研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2008年

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1 柯自立;硫酸鎂對6-羥基多巴胺損傷的SH-SY5Y細胞的保護作用[D];福建醫(yī)科大學;2015年

2 李婷婷;細胞穿透肽VP22對抑癌蛋白PTEN體外抗腫瘤作用影響的研究[D];川北醫(yī)學院;2015年

3 王靜;環(huán)氧化物酶抑制劑NS-398聯(lián)合奧沙利鉑對宮頸癌Hela細胞增殖和凋亡的影響[D];河北醫(yī)科大學;2015年

4 鄭祿祿;番茄紅素對轉(zhuǎn)染SOD1-G93A的PC12細胞線粒體的保護作用[D];河北醫(yī)科大學;2015年

5 宋晨源;氯化銨對人正常肝細胞系changliver中二氫乳清酸脫氫酶表達的影響[D];鄭州大學;2015年

6 張莉;白藜蘆醇體外抑制腸道病毒71型的作用機制研究[D];蘇州大學;2015年

7 高華武;富硒芪云抗腫瘤作用及其機制的實驗研究[D];安徽中醫(yī)藥大學;2015年

8 宋加奎;丹參對人胃癌SGC-7901細胞化療敏感性的影響[D];安徽中醫(yī)藥大學;2015年

9 許雅鑫;尼古丁對NCI-H1975和NCI-H460細胞促進增殖作用及對PI3K/Akt通路的影響研究[D];山西醫(yī)科大學;2015年

10 高娜;加減駐景方含藥血清對二氯化鈷誘導后ARPE-19細胞表達VEGF及HIF-1α的影響[D];青海大學;2015年

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本文編號：1328603