本文關(guān)鍵詞：大鼠髁突軟骨細胞的培養(yǎng)鑒定及靜水壓力下凋亡蛋白的變化　出處：《新疆醫(yī)科大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：目的:探索大鼠顳下頜關(guān)節(jié)髁突軟骨細胞的培養(yǎng)方法;研究細胞在不同靜水壓力作用下TRPM7和Fas蛋白的表達變化規(guī)律,探討Fas通道和TRPM7途徑是否在MCCs凋亡中發(fā)揮作用。方法:分離Wistar大鼠髁突軟骨,用II型膠原酶消化法結(jié)合組織塊法獲取干細胞,MTT檢測其生長曲線,甲苯胺藍染色、II型膠原免疫組化法和II型膠原免疫熒光法鑒定軟骨細胞來源。取生物學性能最佳的一代細胞,隨機分為2組。實驗組給予細胞不同大小和時長的靜水壓力;對照組除不加壓外其余培養(yǎng)條件相同。加壓結(jié)束后,立即通過Western Blot檢測每組TRPM7和Fas的蛋白量。結(jié)果:II型膠原酶消化法結(jié)合組織塊法消化髁突軟骨組織18~20小時可獲得最大量細胞;形態(tài)學觀察軟骨細胞主要呈多角形,第1~4代細胞具有穩(wěn)定的生物學特性,5代及以后逐漸出現(xiàn)衰老細胞;MTT測第3代細胞最快達對數(shù)生長期;甲苯胺藍染色、II型膠原免疫組化染色及II型膠原免疫熒光染色均表達陽性,提示MCCs來源于軟骨的可靠性。加壓時間為1h/2h時,6Kpa、8Kpa、10Kpa實驗組的Fas蛋白量均低于對照組,P0.05;當壓力值為20Kpa/2h、30Kpa/1h、30Kpa/2h時,實驗組蛋白高于對照組,P0.05。當壓力為20KPa/1h時,對照組蛋白與實驗組無差異,P0.05。加壓時間分別為1h/2h時,6Kpa、8Kpa、10Kpa、20Kpa實驗組的TRPM7蛋白量均低于對照組,P0.05。當壓力值為30Kpa/2h時,實驗組蛋白高于對照組,P0.05。當壓力值為30Kpa/1h時,兩組蛋白無差異,P0.05。結(jié)論:II型膠原酶聯(lián)合組織塊消化法獲取的干細胞來源可靠。較小壓力值和時間作用下凋亡蛋白表達下降,提示可能對軟骨細胞的凋亡有抑制作用。壓力值超過一定界值或延長加壓時間后,細胞凋亡蛋白增加,提示此條件可能對軟骨細胞的凋亡有促進作用。兩通道均有可能參與異常壓力下MCCs的凋亡,為進一步研究TMD病因機制提供思路。
【學位授予單位】：新疆醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R782.6

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本文編號：1328569