基因轉(zhuǎn)錄水平上的調(diào)控對基因的表達至關(guān)重要，甚至對機體的發(fā)育也起到極大的作用。基因表達的調(diào)控過程主要發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平上，轉(zhuǎn)錄因子通過其特定的結(jié)構(gòu)域與染色體或其他蛋白質(zhì)相結(jié)合，起到對基因轉(zhuǎn)錄的促進或阻礙作用。鋅指蛋白是一類具有手指狀結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)錄因子，在基因表達調(diào)控、細胞分化、胚胎發(fā)育、增強植物抗逆性等方面具有重要的作用[1]。鋅指蛋白ZBTB20由741個編碼氨基酸組成，N端含有POZ結(jié)構(gòu)域（通常介導(dǎo)蛋白間的相互作用），C端含有5個C2H2鋅指結(jié)構(gòu)域（通常介導(dǎo)DNA的結(jié)合），與已知的POZ鋅指蛋白BCL6和PLZF有30-40％的同源性[1]。利用ZBTB20基因特異性敲除小鼠模型，本實驗室揭示了ZBTB20基因在個體發(fā)育、物質(zhì)代謝和神經(jīng)調(diào)控等方面有重要的生理功能[2-6]。盡管如此，關(guān)于ZBTB20的生物學功能、其調(diào)控的下游靶基因以及介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路仍有許多未明之處。 重組腺病毒是非整合型雙鏈DNA病毒，因而無插入突變，無致癌性，它具有感染分裂期和非分裂期細胞的能力，且易于構(gòu)建、濃縮和純化，出毒率較高[7]。我們前期的研究提示ZBTB20在肝臟物質(zhì)代謝、肝癌的發(fā)展中具有重要作用，因此具...

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圖12pSilencer-ZB20i9質(zhì)粒圖譜

34圖12pSilencer-ZB20i9質(zhì)粒圖譜驗動物究選用基因型為F/F的小鼠，即ZBTB20正常表達的小鼠，系景。小鼠在本實驗室的SPF級動物房中飼養(yǎng)，室內(nèi)溫度控制在25%-60%。小鼠飼料、墊料均經(jīng)高溫消毒處理，飲水經(jīng)高溫高壓滅

圖13重組腺病毒的構(gòu)建、濃縮、純化和鑒定流程圖

圖13重組腺病毒的構(gòu)建、濃縮、純化和鑒定流程圖一）重組腺病毒AdZBTB20shRNA表達載體的構(gòu)建和、包裝、擴增、濃縮純化及滴度測定pSilencer-ZB20i9質(zhì)粒和載體pAdTrack-CMV的酶切pSilencer-ZB20i9質(zhì)粒經(jīng)KpnI/N....

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