本文關(guān)鍵詞：利用CR-RT-PCR技術(shù)克隆大蔥線粒體cob基因

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【摘要】：本研究以大蔥花蕾為材料,對(duì)環(huán)化RNA反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(CR-RT-PCR)技術(shù)在RNA反應(yīng)時(shí)間和試劑添加上進(jìn)行了優(yōu)化,并用優(yōu)化后的技術(shù)對(duì)大蔥線粒體cob基因的全長(zhǎng)進(jìn)行了擴(kuò)增。在本實(shí)驗(yàn)條件下,最優(yōu)環(huán)化反應(yīng)條件為:RNA首先65℃反應(yīng)5 min,加入反應(yīng)試劑后15℃反應(yīng)2 h,最后70℃反應(yīng)10 min使酶失活,反應(yīng)體系中不必添加催化劑PEG6000。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,cob基因全長(zhǎng)為1 522 bp,無(wú)poly(A)尾,包含完整的N端和C端,共編碼397個(gè)氨基酸。系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析顯示大蔥cob基因與同屬的洋蔥同源性最高,且與其他單子葉植物聚為一類(lèi)。研究表明此技術(shù)獲得的線粒體cob基因信息完整,可進(jìn)行后續(xù)功能研究。
【作者單位】： 沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院;北京市農(nóng)林科學(xué)院蔬菜研究中心;農(nóng)業(yè)部華北地區(qū)園藝作物生物學(xué)與種質(zhì)創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;蔬菜種質(zhì)改良北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 蔥 線粒體 CR-RT-PCR
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31372066) 北京市農(nóng)林科學(xué)院科技創(chuàng)新能力建設(shè)專(zhuān)項(xiàng)(KJCX20140111)共同資助
【分類(lèi)號(hào)】：S633.1;Q943.2
【正文快照】： *通訊作者,wangyongqin@nercv.org;z.r.zh@163.netCloning Allium fistulisum Mitochondria cob Gene by CR-RT-PCRTechnologyZhang Dandan1,2,3,4Liu Qianchun2,3,4Zhao Hong2,3,4Wen Changlong2,3,4Wang Yongqin2,3,4*Zhao Rui1*1 College of Horticulture,Shenyang Agricul，

本文編號(hào)：732707