本文關(guān)鍵詞：CaXMT和TCS1突變體基因串聯(lián)共表達(dá)及體外酶活檢測分析

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【摘要】：咖啡堿和可可堿是茶葉生物堿的主要組分,且咖啡堿是茶葉重要的滋味物質(zhì),隨著咖啡堿在食品和藥物領(lǐng)域的應(yīng)用愈發(fā)廣泛,咖啡堿的生物合成成為新的研究熱點(diǎn)。目前市場上的咖啡堿主要靠化學(xué)合成,為了探索其生物合成途徑,該研究將咖啡黃嘌呤核苷甲基轉(zhuǎn)移酶(coffee xanthosine methyltransferase,Ca XMT)基因和茶樹咖啡堿合成酶(tea caffeine synthase,TCS1)基因的4個(gè)突變體分別串聯(lián)至同一大腸桿菌表達(dá)載體p MAL-c5X,誘導(dǎo)融合蛋白共表達(dá),并進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳分析。結(jié)果表明:目的蛋白成功表達(dá)后,應(yīng)用超聲破碎法制備含有目的蛋白的粗酶液,添加底物黃嘌呤核苷(xanthosine,XR)和甲基供體S-腺苷甲硫氨酸(Sadenosyl-L-methionine,SAM)進(jìn)行體外酶促反應(yīng),將反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行高效液相色譜檢測。檢測結(jié)果顯示,p MALCa XMT-TM2/3/4的體外酶促反應(yīng)產(chǎn)物僅有可可堿生成,均未見咖啡堿生成。該研究結(jié)果為構(gòu)建生物合成咖啡堿和可可堿的串聯(lián)共表達(dá)載體奠定了基礎(chǔ),也為進(jìn)一步研究生物合成咖啡堿和可可堿提供了新思路。
【作者單位】： 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)茶樹生物學(xué)與資源利用國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 咖啡堿 串聯(lián)共表達(dá) 體外活性
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31170649,31570692)~~
【分類號(hào)】：Q946.88
【正文快照】： 咖啡堿(1,3,7-三甲基黃嘌呤)和可可堿(3,7-二甲基黃嘌呤)一同被歸類為嘌呤生物堿,存在于茶、咖啡以及大部分軟飲料中(Ashihara et al,2008)�？Х葔A不但能刺激神經(jīng)系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng),增強(qiáng)無氧運(yùn)動(dòng)時(shí)的耐力,而且具有利尿、抗癌的作用(吳命燕等,2010;Panayiotis et al,2013)�？Х�

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2 何彰華;王洋;趙s，

本文編號(hào)：663047