沙柳是我國(guó)西北地區(qū)防風(fēng)治沙的主要樹(shù)種之一,對(duì)維持沙地生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定起重要作用,是城市建設(shè)和環(huán)境綠化工程中的重要元素。促進(jìn)沙柳的分子定向育種,研究基因調(diào)控機(jī)制對(duì)于開(kāi)發(fā)沙柳潛在價(jià)值有重要意義。本研究利用同源克隆技術(shù)從沙柳中克隆獲得SpsNAC005、SpsNAC034、SpsNAC041、SpsNAC042基因,對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析,組織特異性表達(dá)及構(gòu)建目標(biāo)基因的超量表達(dá)載體。研究結(jié)果如下:①SpsNAC005基因的CDS序列長(zhǎng)度為927bp,編碼309個(gè)氨基酸,SpsNAC034基因的CDS序列長(zhǎng)度為1797bp,編碼599個(gè)氨基酸,SpsNAC041基因的CDS序列長(zhǎng)度為885bp,編碼295個(gè)氨基酸,SpsNAC042基因的CDS序列長(zhǎng)度為900bp,編碼300個(gè)氨基酸。四個(gè)基因均有NAC基因家族的典型結(jié)構(gòu)域NAM,屬NAC基因家族。②RT-qPCR結(jié)果表明,SpsNAC042在成熟的葉中表達(dá)量最高,在花中幾乎不表達(dá)。③本研究獲得SpsNAC005超表達(dá)轉(zhuǎn)基因84K楊株系7個(gè),SpsNAC005超表達(dá)轉(zhuǎn)基因河北楊株系5個(gè),SpsNAC034超表達(dá)轉(zhuǎn)基因河北楊株系5個(gè),SpsNAC04...

【文章頁(yè)數(shù)】：58 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 沙柳的生物學(xué)特性及相關(guān)研究
        1.1.1 沙柳的生物學(xué)特性
        1.1.2 沙柳的應(yīng)用
        1.1.3 沙柳的基因組學(xué)的相關(guān)報(bào)道
    1.2 NAC基因家族及其相關(guān)研究
        1.2.1 NAC基因家族的結(jié)構(gòu)
        1.2.2 NAC基因的功能
            1.2.2.1 干旱、鹽脅迫及滲透脅迫
            1.2.2.2 溫度(高溫、低溫)脅迫
            1.2.2.3 正負(fù)反饋
            1.2.2.4 植物激素信號(hào)途徑
            1.2.2.5 植物生長(zhǎng)發(fā)育
        1.2.3 NAC基因在楊樹(shù)中相關(guān)研究
        1.2.4 NAC基因家族總結(jié)
    1.3 其它轉(zhuǎn)錄因子的相關(guān)研究
    1.4 研究目的與意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器
            2.1.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
            2.1.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 載體及菌株
        2.1.4 培養(yǎng)基及實(shí)驗(yàn)試劑的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 基因克隆
            2.2.1.1 RNA的提取及檢測(cè)
            2.2.1.2 UTR區(qū)特異性引物設(shè)計(jì)
            2.2.1.3 cDNA的合成反應(yīng)
            2.2.1.4 PCR擴(kuò)增
            2.2.1.5 目標(biāo)條帶切膠回收
            2.2.1.6 平末端載體的連接
            2.2.1.7 菌落PCR
            2.2.1.8 質(zhì)粒提取
        2.2.2 表達(dá)載體構(gòu)建
            2.2.2.1 入門(mén)載體構(gòu)建
            2.2.2.2 酶切反應(yīng)
            2.2.2.3 超表達(dá)載體構(gòu)建
        2.2.3 基因的生物信息學(xué)分析
        2.2.4 目標(biāo)基因組織特異性的定量PCR分析
        2.2.5 超表達(dá)載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
        2.2.6 葉盤(pán)法轉(zhuǎn)化84K楊
            2.2.6.1 菌液活化
            2.2.6.2 劃傷法
            2.2.6.3 打孔法
        2.2.7 葉盤(pán)法轉(zhuǎn)化河北楊
3 結(jié)果與分析
    3.1 NAC基因的CDS序列克隆
        3.1.1 沙柳RNA的提取及檢測(cè)
        3.1.2 目標(biāo)基因的PCR擴(kuò)增
        3.1.3 切膠回收產(chǎn)物電泳及濃度檢測(cè)
        3.1.4 平末端載體連接及測(cè)序
    3.2 SpsNACs的CDS序列的生物信息學(xué)分析
        3.2.1 蛋白的理化特性分析
        3.2.2 二級(jí)蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
        3.2.3 三級(jí)蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
        3.2.4 跨膜結(jié)構(gòu)分析
        3.2.5 信號(hào)肽分析
        3.2.6 系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)構(gòu)建
        3.2.7 同源結(jié)構(gòu)域分析
        3.2.8 亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)
        3.2.9 SpsNACs的組織特異性預(yù)測(cè)
        3.2.10 SpsNACs的miRNA預(yù)測(cè)
    3.3 SpsNAC042基因組織特異性實(shí)時(shí)定量表達(dá)分析
    3.4 SpsNACs的超表達(dá)載體構(gòu)建
        3.4.1 構(gòu)建入門(mén)載體
        3.4.2 酶切反應(yīng)
        3.4.3 SpsNACs超表達(dá)載體構(gòu)建
    3.5 SpsNACs基因的轉(zhuǎn)基因
        3.5.1 SpsNACs基因超表達(dá)載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
        3.5.2 農(nóng)桿菌的活化培養(yǎng)與浸染
        3.5.3 SpsNACs基因的84K轉(zhuǎn)化
        3.5.4 SpsNACs基因的河北楊轉(zhuǎn)化
4 討論
    4.1 SpsNACs命名及功能分析
    4.2 SpsNACs基因結(jié)構(gòu)域及系統(tǒng)進(jìn)化分析
5 結(jié)論、創(chuàng)新點(diǎn)、展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 創(chuàng)新點(diǎn)
    5.3 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：4031777