高杰氏鏈霉菌中含有新型羊毛硫抗生素雷可肽(lexapeptide)的同源基因簇lxm2,為探索該基因簇相應(yīng)的產(chǎn)物,將包含lxm2的細菌人工染色體轉(zhuǎn)到變鉛青鏈霉菌中進行異源表達,證實其可以產(chǎn)生雷可肽;同時還獲得另一個新次級代謝產(chǎn)物,基因敲除實驗表明此化合物的合成也與lxm2相關(guān)。通過色譜技術(shù)對新化合物進行分離純化,結(jié)合核磁共振譜、高分辨質(zhì)譜和二級質(zhì)譜確定其結(jié)構(gòu)為具有多重修飾的線性六肽,與雷可肽的N-端六氨基酸序列相同,命名為Lxm-N-六肽,該化合物沒有檢測到抗菌活性。

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【部分圖文】：

圖1 雷可肽的結(jié)構(gòu)[13]

筆者所在課題組通過異源表達篩選婁徹氏鏈霉菌Sal35的基因組細菌人工染色體(BAC)文庫,發(fā)現(xiàn)一個新型羊毛硫抗生素雷可肽(lexapeptide)。雷可肽的化學(xué)結(jié)構(gòu)(圖1)[13]中含有2個Dha、3個Dhb、1個Lan和1個C-端氨乙烯基甲基Cys(AviMeCys),然而測序....

圖2 雷可肽同源基因簇lxm2的敲除和異源表達

分析HPLC圖譜,與空載體菌株GX28/pHL931以及原始菌株高杰氏鏈霉菌Sgt26的發(fā)酵產(chǎn)物比較,在菌株GX28/4D8的HPLC圖譜中還出現(xiàn)1個新的差異色譜峰(圖2C菱形標(biāo)記,保留時間為18.4min)。通過HPLC半制備分離該色譜峰對應(yīng)的化合物,得到少量樣品,利用液質(zhì)聯(lián)....

圖3 Lexapeptide和Lxm-N-六肽的相對分子質(zhì)量檢測

圖2雷可肽同源基因簇lxm2的敲除和異源表達2.3Lxm-N-六肽的分離純化和結(jié)構(gòu)鑒定

圖4 Lxm-N-六肽的結(jié)構(gòu)鑒定

跟蹤差異峰分離純化相應(yīng)化合物,從20L發(fā)酵培養(yǎng)物得到白色粉末狀純品1.5mg。將純化的樣品溶于氘代試劑DMSO-d6中進行1D-和2D-NMR譜分析,NMR數(shù)據(jù)總結(jié)如表2,推測其結(jié)構(gòu)為含有多重修飾的Me2-Phe-Dha-Pro-Dhb-Ile-Pro六肽(圖4A),其序列與....

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