橘小實(shí)蠅是一種危害嚴(yán)重的實(shí)蠅類害蟲(chóng),CRISPR/Cas9技術(shù)作為近年來(lái)發(fā)展迅速的遺傳改造新技術(shù),在實(shí)蠅類害蟲(chóng)的防治中具有很大的應(yīng)用前景。CRISPR/Cas9技術(shù)在果蠅、家蠶以及蚊類等昆蟲(chóng)中研究應(yīng)用比較廣泛,包括該技術(shù)的建立與優(yōu)化、功能基因的探索、轉(zhuǎn)基因品系的研究等;而在實(shí)蠅類昆蟲(chóng)中的研究則僅限于技術(shù)體系的建立,其相關(guān)應(yīng)用鮮有報(bào)道。Doublesex(dsx)基因作為昆蟲(chóng)性別決定關(guān)鍵基因,在昆蟲(chóng)性別分化以及生殖中具有重要作用。本研究通過(guò)對(duì)CRISPR/Cas9系統(tǒng)靶標(biāo)位點(diǎn)的篩選、比較分析Cas9 mRNA/sgRNA和Cas9蛋白/sgRNA RNP復(fù)合體兩種方法的敲除效率,我們建立了橘小實(shí)蠅CRISPR/Cas9技術(shù)體系,并以此為基礎(chǔ)敲除橘小實(shí)蠅dsx基因,明確了dsx基因在橘小實(shí)蠅生殖發(fā)育中的作用。本研究有利于建立橘小實(shí)蠅在內(nèi)的實(shí)蠅類害蟲(chóng)的CRISPR/Cas9技術(shù)與平臺(tái),并證明了dsx基因作為遺傳改造的靶標(biāo)基因在生物防治應(yīng)用中的潛力,為橘小實(shí)蠅的遺傳改造及綠色防控提供了理論和技術(shù)基礎(chǔ)。1.Bddsx基因克隆與分析我們通過(guò)對(duì)Bddsx基因的克隆,補(bǔ)充了Bddsx基因組序列,增補(bǔ)的...

【文章頁(yè)數(shù)】：78 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1Doublesex基因在性別決定中的地位Fig.1-1Theroleofthedoublesexgeneinsexdetermination(Verhulstetal2010).

圖1-1Doublesex基因在性別決定中的地位Fig.1-1Theroleofthedoublesexgeneinsexdetermination(Verhulstetal2010).1.1.3Doublesex基因功能及其研究現(xiàn)狀已有的報(bào)....

圖1-2CRISPR/Cas9技術(shù)基因編輯原理

CRISPR基因座中(Westraetal2012)。當(dāng)噬菌體再次侵入時(shí)，tracrRNA、crRNA和Cas9形成的核糖核蛋白復(fù)合物(Ribonucleoproteincomplex,RNP)介導(dǎo)降解外源侵入DNA，從而抵御外源入侵。基于CRISPR/Cas9....

圖2-1橘小實(shí)蠅交配示意圖

（4）隨后覆蓋上鹵烴油（Halocarbonoil）保濕；（5）利用Trans2K顯微注射系統(tǒng)顯微注射系統(tǒng)（Eppendorf）將提前配制好的Cas9mRNA/sgRNA和Cas9蛋白/sgRNARNP復(fù)合體分別注射入橘小實(shí)蠅胚胎中；（6）注射完成后，將胚胎置入....

圖3-3Bddsx基因克隆Fig.3-3ThecloningofB.dorsalisdoublesexgene.A，PCR引物在Bddsx基因中的位置

30圖3-3Bddsx基因克隆Fig.3-3ThecloningofB.dorsalisdoublesexgene.，PCR引物在Bddsx基因中的位置。矩形框?yàn)榛蛲怙@子，直線為內(nèi)含子部分，灰色矩形框?yàn)榛蛐蛄杏颍缓谏^為所用引物，F(xiàn)和R前相....

本文編號(hào)：3985795