DEAD-box解旋酶21(DEx D-box helicase 21,DDX21)是含DEAD-box的RNA解旋酶家族成員之一,不僅參與RNA的合成和加工過程,同時還參與機(jī)體的天然免疫應(yīng)答,調(diào)控病毒的復(fù)制。為了研究豬DDX21基因的結(jié)構(gòu)和功能,以豬腎傳代細(xì)胞(PK-15)總cDNA為模板,根據(jù)GenBank公布的預(yù)測序列(XM₀05657387.2)設(shè)計引物擴(kuò)增豬源DDX21基因,并采用分子生物學(xué)軟件將其編碼的氨基酸序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析。結(jié)果顯示,首次成功克隆了豬DDX21基因的cDNA序列(GenBank登錄號為KX396051),其開放讀碼框全長為2 355 bp,編碼784個氨基酸;與牛、斑馬魚、人、小鼠、大鼠和非洲爪蟾的氨基酸序列同源性分別為91.7%,57.5%,88.0%,82.3%,83.8%和48.9%;該基因編碼的蛋白結(jié)構(gòu)域和人、牛、小鼠、大鼠一樣,其C端都具有保守的GUCT結(jié)構(gòu)域;系統(tǒng)進(jìn)化樹分析表明豬DDX21與牛DDX21的親緣關(guān)系最近。進(jìn)一步構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒p ET28a-DDX21,經(jīng)測序鑒定正確后,將其轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞BL21(DE...

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 菌株、載體和細(xì)胞系
    1.2 主要試劑
    1.3 引物設(shè)計及合成
    1.4 豬DDX21基因的克隆
    1.5 豬DDX21基因序列分析、同源性比對及構(gòu)建進(jìn)化樹
    1.6 原核表達(dá)載體p ET28a-DDX21的構(gòu)建
    1.7 p ET28a-DDX21的誘導(dǎo)表達(dá)
2 結(jié)果與分析
    2.1 豬DDX21基因的克隆
    2.2 豬DDX21基因的氨基酸序列分析及同源進(jìn)化樹構(gòu)建
    2.3 豬DDX21基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定
    2.4 DDX21基因重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
3 討論和結(jié)論



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