從咸陽市某疑似鴿皰疹病毒感染病例中分離病原,并對其UL30基因分子特征進行分析,為防控鴿皰疹病毒感染提供參考。通過SPF雞胚傳代分離病毒,克隆UL30基因并構建質(zhì)粒測序比對分析。結果顯示,病毒分離傳代3次后雞胚死亡呈現(xiàn)一定的規(guī)律性,并出現(xiàn)典型病變。UL30基因克隆測序提示病毒分離成功,命名為XY2019株。XY2019株UL30基因與4株參考序列同源性在99.9%～100%之間,基因進化樹上形成2個大分支,XY2019、HLJ、S-18、BJ株處在一個分支上,而AF141890單獨在一個分支上。研究提示,不同動物種類、不同國家或地區(qū)的PiHV UL30基因均高度保守,遺傳性高度穩(wěn)定。

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圖1傳代后病毒PCR擴增

對收獲的尿囊液、絨毛尿囊膜進行病毒PCR擴增,電泳結果表明從樣本中成功擴增出了1326bp的目的條帶(圖1),證實病毒分離成功,命名為XY2019株。2.4UL30基因測序與分析結果

圖2UL30基因陽性質(zhì)粒酶切結果

回收UL30基因片段,連接pGEM-Teasy載體,構建質(zhì)粒并酶切鑒定,結果顯示酶切片段大小符合預期結果(圖2)。鑒定正確的陽性質(zhì)粒測序后成功獲得了XY2019株1326bp長度的UL30基因片段,利用DNAStar軟件,將獲得序列與GenBank中已知參考序列比對,同源性....

圖3XY2019株UL30基因與參考序列同源性比較結果

鑒定正確的陽性質(zhì)粒測序后成功獲得了XY2019株1326bp長度的UL30基因片段,利用DNAStar軟件,將獲得序列與GenBank中已知參考序列比對,同源性結果見圖3,系統(tǒng)發(fā)生樹見圖4。圖4基于UL30基因構建的基因進化樹

圖4基于UL30基因構建的基因進化樹

圖3XY2019株UL30基因與參考序列同源性比較結果GenBank中PiHVUL30基因參考序列僅有4株,參考序列BJ株分離于中國北京市,登錄號KC544263,來源于鴿;HLJ株分離于中國黑龍江省,登錄號KX589235,來源于野鴿;S-18株分離于墨西哥,登錄號NC02....

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