超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)是一類生物體內(nèi)廣泛存在的抗氧化酶,其生物學(xué)功能是清除生物體內(nèi)因自身有氧代謝所產(chǎn)生的超氧自由基,從而保護(hù)細(xì)胞免受自由基的破壞。SOD可以特異性催化超氧陰離子產(chǎn)生歧化反應(yīng),將O₂^-催化歧化為H₂O₂和O₂。熒光假單胞菌GcM5-1A是松材線蟲攜帶的一種伴生細(xì)菌,已有研究表明該細(xì)菌在松萎蔫病的病理進(jìn)程中與松材線蟲發(fā)揮著協(xié)同作用。本研究利用PCR技術(shù),從熒光假單胞菌GcM5-1A的基因組中克隆了編碼SOD的完整開放閱讀框(ORF),序列分析結(jié)果表明,該ORF全長(zhǎng)654 bp,編碼217個(gè)氨基酸。將SOD基因與表達(dá)載體pET-15b連接,構(gòu)建pET-15b-SOD重組表達(dá)載體。將重組表達(dá)載體pE-15b-SOD轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),構(gòu)建了工程菌株。擴(kuò)大培養(yǎng)后的工程菌通過(guò)IPTG誘導(dǎo)表達(dá),經(jīng)SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分析可知,重組SOD在大腸桿菌BL21中表現(xiàn)出了較高的表達(dá)效率,相對(duì)分子量約為28 kDa,主要以包涵...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.1熒光假單胞菌SOD基因的PCR擴(kuò)增M：DNAMarker15001：PCR擴(kuò)增的目的片段

由瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果可知，該基因全長(zhǎng)約660bp左右（如圖1.1所示）。將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行膠回收，再經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)回收片段大小及質(zhì)量后，構(gòu)建T-SOD載體。圖1.1熒光假單胞菌SOD基因的PCR擴(kuò)增M：DNAMarker15001：PCR擴(kuò)....

圖1.3測(cè)序結(jié)果及編碼氨基酸序列12

圖1.2T-SOD雙酶切驗(yàn)證M：Marker5000；1：T-SOD/NdeI，XhoI體送北京睿博興科科技有限公司進(jìn)行測(cè)序，BL示，獲得編碼SOD的目的基因片段，長(zhǎng)度為651.3）。

圖1.4SOD序列blastx分析結(jié)果

blastx分析結(jié)果表明，該片段屬于熒光假單胞菌含鐵超氧化物歧化酶（Fe-SOD）家族有較高的氨基酸序列同圖1.4SOD序列blastx分析結(jié)果圖1.5SOD序列blastx分析結(jié)果分子量大小為Mw:該片段屬于熒光假單胞菌有較高的氨基酸序列同

圖1.5SOD序列blastx分析結(jié)果13

blastx分析結(jié)果圖1.5SOD序列blastx分析結(jié)果分子量大小為Mw:該片段屬于熒光假單胞菌有較高的氨基酸序列同

本文編號(hào)：3899008