冷激蛋白(Cold shock protein,Csp)作為應(yīng)激蛋白幾乎分布于所有原核生物當(dāng)中。當(dāng)細(xì)胞遭受非生物逆境脅迫時(shí),Csp作為RNA的分子伴侶,與單鏈核苷酸非特異性結(jié)合,阻止mRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)的生成,避免轉(zhuǎn)錄和翻譯終止,保證細(xì)胞的正常代謝。除此之外,Csp還作為轉(zhuǎn)錄激活因子,與啟動(dòng)子結(jié)合提高基因的轉(zhuǎn)錄水平。大腸桿菌(Escherichia coli)和枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的Csp基因已經(jīng)被克隆,并驗(yàn)證了其功能,轉(zhuǎn)化植物后能顯著改良轉(zhuǎn)基因植物對(duì)干旱等非生物逆境的抗性。在極端非生物逆境下生存的極端微生物,大多具有獨(dú)特細(xì)胞結(jié)構(gòu)和環(huán)境適應(yīng)機(jī)制。嗜鹽芽孢桿菌(Halobacillus halophiles)就是其中一種,它能夠產(chǎn)生諸如Csp等多種抗性溶質(zhì),抵御高鹽環(huán)境的脅迫危害。本研究在生物信息學(xué)分析的基礎(chǔ)上,根據(jù)玉米基因組密碼子偏愛性,對(duì)嗜鹽芽孢桿菌Csp基因(HhCsp)進(jìn)行密碼子優(yōu)化,構(gòu)建雙子葉植物表達(dá)載體,農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化擬南芥,探索其異源表達(dá)改良植物耐鹽耐旱等非生物逆境抗性的可能,為下一步轉(zhuǎn)化玉米等作物抗逆轉(zhuǎn)基因研究奠定基因基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下:(1)...

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1CspA3D結(jié)構(gòu)

含7個(gè)芳香族殘基（W、F、F、F、F、F、Y），結(jié)合相關(guān)；另外2個(gè)帶正電荷的賴氨酸殘基（K10和K16）也還有兩個(gè)RNA結(jié)合基序：RNP1（KGFGFI）位于β2鏈上，R，RNP與單鏈DNA和RNA非特異性結(jié)合（圖2）[12-13]。V9、IIe2....

圖4CspB3D結(jié)構(gòu)圖

圖4CspB3D結(jié)構(gòu)圖Fig.4Three-dimendionalstructureofCspB廣泛的是大腸桿菌，在其9個(gè)CspA家族成員中，。CspA缺陷性菌株，在溫度驟降時(shí)，同源蛋白CCspG在冷激期間起到補(bǔ)償CspA功能的作用[17,2....

圖5技術(shù)路線Fig.5Technicalroute

子優(yōu)化后構(gòu)建雙子葉植物表達(dá)載體，農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化擬南芥，探索其異源表達(dá)改良植物耐鹽等非生物逆境抗性的可能，為后續(xù)玉米等作物培育抗逆轉(zhuǎn)基因新種質(zhì)奠定基礎(chǔ)（圖5）。圖5技術(shù)路線Fig.5Technicalroute

圖6雙子葉植物表達(dá)載體pCAMBIA2300-35S-HhCsp的構(gòu)建A：帶綠色熒光標(biāo)記基因（eGFP）的雙子葉植物組成型表達(dá)載體pCAMBIA2300-35S-eGFP；B：帶限制性酶切位點(diǎn)SmaI和PstI的HhCsp基因

12圖6雙子葉植物表達(dá)載體pCAMBIA2300-35S-HhCsp的構(gòu)建A：帶綠色熒光標(biāo)記基因（eGFP）的雙子葉植物組成型表達(dá)載體pCAMBIA2300-35S-eGFP；B：帶限制性酶切位點(diǎn)SmaI和PstI的HhCsp基因。C：雙子葉植物組成型表....

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