發(fā)布時(shí)間：2022-12-07 23:00

　　目的:胃癌是消化系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一。根據(jù)GLOBOCAN2018報(bào)道,在全世界范圍內(nèi),其發(fā)病率和死亡率分別居于惡性腫瘤發(fā)病率及死亡率的第五位及第三位。到2014年,我國每年新增胃癌發(fā)病人數(shù)至41萬,死亡人數(shù)至29.4萬。目前,手術(shù)、放化療及免疫治療是胃癌的主要治療手段,但由于胃癌的確切發(fā)病機(jī)制及侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制目前仍尚不十分清楚,導(dǎo)致對胃癌無法進(jìn)行理想的早期診斷及治療。因此,當(dāng)前亟需尋找與胃癌發(fā)生和預(yù)后相關(guān)的生物標(biāo)志和胃癌精準(zhǔn)治療的新靶點(diǎn)。環(huán)狀RNA（circμlar RNAs,circRNAs）是一類經(jīng)特殊剪切形成的共價(jià)閉環(huán)RNA,它缺乏傳統(tǒng)線性RNA的3’及5’末端,因其環(huán)狀結(jié)構(gòu)得名。目前發(fā)現(xiàn)circRNAs具有多種生物學(xué)功能,如作為分子“海綿”吸附微小核糖核酸（microRNA,miRNA）,參與轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后調(diào)控,作為模板指導(dǎo)翻譯等。研究表明,大量環(huán)狀RNA參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程的調(diào)控,有望成為新的腫瘤標(biāo)記物及治療靶點(diǎn)。此外,由于circRNA具有miRNA分子“海綿”特性,可作為外源性miRNA的載體,因此也具有良好的臨床應(yīng)用前景。在胃癌中,CircRNA發(fā)揮的作用也受到越... 

【文章頁數(shù)】：101 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 :Circ RNA_100290 在胃癌組織中的表達(dá)及臨床病理意義
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 試劑
            2.1.2 儀器
        2.2 研究對象
        2.3 研究方法
            2.3.1 新鮮胃癌組織RNA提取
            2.3.2 RNA反轉(zhuǎn)錄
            2.3.3 qRT-PCR檢測
    3 結(jié)果
        3.1 胃癌組織中circ RNA_100290 表達(dá)顯著上調(diào)
        3.2 circ RNA_100290 表達(dá)與胃癌Borrmann分型,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期相關(guān)
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 :Circ RNA_100290與mi R-29b-3p/ITGA11 軸在胃癌中的相關(guān)性研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 試劑
            2.1.2 儀器
        2.2 研究對象
        2.3 研究方法
            2.3.1 新鮮胃癌組織RNA提取及反轉(zhuǎn)錄
            2.3.2 qRT-PCR檢測miRNA及 mRNA表達(dá)
            2.3.3 雙熒光素酶基因報(bào)告系統(tǒng)檢測驗(yàn)證結(jié)合位點(diǎn)
            2.3.4 生物信息學(xué)預(yù)測及公共數(shù)據(jù)庫分析
    3 結(jié)果
        3.1 胃癌組織中miR-29b-3p的表達(dá)顯著降低
        3.2 胃癌組織中circ RNA_100290與mi R-29b-3p表達(dá)成負(fù)相關(guān)
        3.3 Circ RNA_100290 可直接結(jié)合mi R-29b-3p
        3.4 胃癌組織中ITGA11的表達(dá)顯著升高
        3.5 胃癌組織中mi R-29b-3p與 ITGA11 表達(dá)呈負(fù)相關(guān)
        3.6 ITGA11在胃癌中高表達(dá)與預(yù)后呈負(fù)相關(guān)
        3.7 胃癌中ITGA11高表達(dá)與胃癌分化程度及侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)
        3.8 ITGA11的蛋白交互作用網(wǎng)絡(luò)及功能富集分析
    4 討論
    5 結(jié)論
第三部分 :沉默circ RNA_100290 對胃癌細(xì)胞系A(chǔ)GS和 HGC-27 生物學(xué)行為的影響
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 材料
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器設(shè)備
            2.1.3 研究對象
        2.2 方法
            2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            2.2.3 細(xì)胞Total RNA提取及反轉(zhuǎn)錄
            2.2.4 qRT-PCR檢測
            2.2.5 細(xì)胞劃痕愈合實(shí)驗(yàn)
            2.2.6 Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
            2.2.7 Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)
            2.2.8 CCK-8實(shí)驗(yàn)
            2.2.9 平板克隆形成實(shí)驗(yàn)
            2.2.10 細(xì)胞周期檢測(FCM)
            2.2.11 蛋白提取
            2.2.12 Western Blot
            2.2.13 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法
    3 結(jié)果
        3.1 人正常胃上皮細(xì)胞及4 種胃癌細(xì)胞系中circ RNA_100290和mi R-29b-3p的表達(dá)
        3.2 Circ RNA_100290 沉默胃癌細(xì)胞株的構(gòu)建
        3.3 沉默circ RNA_100290 可下調(diào)AGS和 HGC-27 細(xì)胞mi R-29b-3p表達(dá),上調(diào)ITGA11 mRNA表達(dá)
        3.4 沉默circ RNA_100290 可抑制AGS和 HGC-27 細(xì)胞的遷移能力
        3.5 沉默circ RNA_100290 可抑制AGS和 HGC-27 細(xì)胞的遷移能力
        3.6 沉默circ RNA_100290 可抑制AGS和 HGC-27 細(xì)胞的侵襲能力
        3.7 沉默circ RNA_100290 可抑制AGS及 HGC-27 細(xì)胞的增殖活性
        3.8 沉默circ RNA_100290 可抑制AGS及 HGC-27 細(xì)胞集落形成能力
        3.9 沉默circ RNA_100290 可誘導(dǎo)AGS及 HGC-27 細(xì)胞G0/G1 期阻滯
        3.10 沉默circ RNA_100290 可抑制AGS及 HGC-27 細(xì)胞系EMT過程
    4 討論
    5 結(jié)論
第四部分 :eIF4A3與circ RNA_100290 的轉(zhuǎn)錄調(diào)控
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 材料
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器設(shè)備
            2.1.3 研究對象
        2.2 方法
            2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染、RNA提取及q RT-PCR檢測
            2.2.2 RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀
            2.2.3 蛋白提取
            2.2.4 Western Blot
            2.2.5 生物信息學(xué)預(yù)測及公共數(shù)據(jù)庫數(shù)據(jù)分析
            2.2.6 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 Circinteractome預(yù)測circ RNA_100290 結(jié)合蛋白
        3.2 沉默eIF4A3 可上調(diào)AGS和 HGC-27 細(xì)胞系circ RNA_100290 表達(dá)
        3.3 eIF4A3 可通過與circ RNA_100290 側(cè)翼結(jié)合參與其轉(zhuǎn)錄調(diào)控
        3.4 eIF4A3 m RNA在胃癌組織中表達(dá)下調(diào)
        3.5 eIF4A3蛋白在胃癌組織中表達(dá)下調(diào)
        3.6 eIF4A3 m RNA表達(dá)與胃癌患者臨床病理因素的關(guān)系
        3.7 eIF4A3表達(dá)與胃癌患者的預(yù)后相關(guān)
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
個人簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Cancer incidence and mortality in China, 2014[J]. Wanqing Chen,Kexin Sun,Rongshou Zheng,Hongmei Zeng,Siwei Zhang,Changfa Xia,Zhixun Yang,He Li,Xiaonong Zou,Jie He.  Chinese Journal of Cancer Research. 2018(01)
[2]Genomic alterations and molecular subtypes of gastric cancers in Asians[J]. Xiang S.Ye,Chunping Yu,Amit Aggarwal,Christoph Reinhard.  Chinese Journal of Cancer. 2016(08)
[3]Lauren分型在胃癌預(yù)后評估中的臨床意義[J]. 崔景利,梁寒,鄧靖宇,丁學(xué)偉,潘源,張李,蔡明志,梁月祥,蔣楠.  中華消化雜志. 2014 (07)



本文編號：3713028