目的:探討miR-223抑制抑癌基因Fbxw7對結(jié)腸癌生物學(xué)特征的影響及其調(diào)控機(jī)理。方法:檢測結(jié)腸癌組織中miR-223及FBXW7的表達(dá)含量,在人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116中轉(zhuǎn)染特異性miR-223 Mimics及inhibitor,采用熒光定量PCR檢測細(xì)胞中miR-223、Fbxw7的mRNA水平,鑒定細(xì)胞活性及凋亡情況。通過siRNA沉默HCT116中的FBXW7和Notch1分子,用Western blot鑒定沉默效率以及Notch信號通路下游的RBPjk蛋白水平,通過流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果:結(jié)腸癌組織中miR-223含量升高,FBXW7水平降低;HCT116細(xì)胞中miR-223抑制Fbxw7的表達(dá),影響結(jié)腸癌細(xì)胞的活性和凋亡;而抑制Notch通路后細(xì)胞凋亡率下降。結(jié)論:miR-223抑制Fbxw7的表達(dá),并通過Notch通路抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的凋亡,初步驗證了miR-223-FBXW7-Notch信號軸在結(jié)直腸癌中的作用。 

【文章來源】：湖北醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報. 2020,39(05)

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

qPCR檢測結(jié)腸癌及癌旁組織中FBXW7 mRNA及miRNA-223含量

HCT116轉(zhuǎn)染miR-223后的細(xì)胞活性和凋亡率

通過siRNA干擾FBXW7和Notch信號通路中Notch1分子的表達(dá),q-PCR法檢測細(xì)胞中Fbxw7、Notch1的mRNA 水平,同時通過WB檢測Notch通路下游RBPjk的蛋白水平。結(jié)果如圖3所示,干擾Notch1分子后,影響了Notch通路下游RBPjk的表達(dá),進(jìn)而降低了HCT116細(xì)胞凋亡率(P<0.01)。同時干擾FBXW7表達(dá)也抑制Notch通路下游RBPjk的表達(dá)從而減少細(xì)胞凋亡(P<0.05)。3 討論


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