甘油三磷酸酰基轉(zhuǎn)移酶（GPAT）基因編碼參與植物油脂生物合成的酶。為了提高油菜籽含油量,促進油菜增產(chǎn)增油,改善菜籽油脂肪酸組分,克隆甘藍型油菜Napin啟動子與三酰甘油合成相關(guān)基因BnGPAT9,構(gòu)建pBI121-Napin-BnGPAT9植物過表達載體,利用農(nóng)桿菌介導法轉(zhuǎn)化擬南芥,采用氣相色譜法分析種子中脂肪酸組分,通過索式抽提法測定種子中油脂含量,研究在種子中過表達BnGPAT9基因?qū)ΨN子油脂合成的影響。Napin啟動子在線分析表明,克隆到的啟動子具有大量TATA-box、CAAT-box以及ABRE、GCN4等特征元件,完全具備種子特異性表達功能;種子中脂肪酸組分分析顯示,擬南芥種子中油酸（C18∶1）含量提高0.70～1.01百分點,亞油酸（C18∶2）和芥酸（C22∶1）含量降低;擬南芥種子含油量測定結(jié)果顯示,種子中含油量顯著增加1.91～2.56百分點。綜上,甘藍型油菜BnGPAT9基因?qū)χ参镉椭铣删哂兄匾饔?利用Napin啟動子在擬南芥種子中過表達BnGPAT9基因可提高種子含油量并改善脂肪酸組成成分,為BnGPAT9基因應用于油菜油脂改良方面打下一定基礎(chǔ)。 

【文章來源】：華北農(nóng)學報. 2020,35(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

PCR產(chǎn)物電泳圖

表1 啟動子調(diào)控區(qū)元件分析Tab.1 Cis-acting regulatory element analysis of promoter sequence 位點名稱Site name 數(shù)量Amount 序列Sequence 位點功能Function of site ABRE 3 CACGTG/ACGTG/GACACGTGGC 參與脫落酸誘導的順式作用元件 ARE 3 AAACCA 厭氧誘導的必須順式調(diào)控元件 CAAT-box 17 CCAAT/CAAAT/CAATT/CAAT/CAAAT/ 啟動子、增強子區(qū)域常見順式作用元件 TGCAAATCT/CCCAATTT CAT-box 1 GCCACT 與分生組織表達有關(guān)的順式作用元件 CCAAT-box 1 CAACGG MYBHv1結(jié)合位點 G-Box 1 CACGTT 參與光應答的順式作用元件 G-box 2 CACGAC/TAACACGTAG 參與光應答的順式作用元件 GATA-motif 1 GATAGGA 部分光應答元件 GCN4_motif 1 TGAGTCA 參與胚乳表達所需的順式作用元件 MBSI 1 aaaAaaC(G/C)GTTA 參與黃酮類生物合成基因調(diào)控的MYB結(jié)合位點 TATA-box 18 TATA(核心序列Core sequence) 啟動子核心元件2.3 pBI121-Napin-BnGPAT9表達載體構(gòu)建

根據(jù)1.2.3試驗方法構(gòu)建pBI121-Napin-BnGPAT9植物表達載體(圖3)。首先,Sac Ⅰ和BamH Ⅰ雙酶切pUCm-T-BnGPAT9和pBI121載體質(zhì)粒,用BnGPAT9基因替換GUS基因,構(gòu)建pBI121-BnGPAT9重組質(zhì)粒(圖3-A)。隨后,改用Hind Ⅲ和BamH Ⅰ快速內(nèi)切酶,采用同樣的方法酶切pUCm-T-Napin和pBI121-BnGPAT9載體質(zhì)粒,用Napin基因替換CaMV35S啟動子基因,構(gòu)建pBI121-Napin-BnGPAT9植物表達載體(圖3-B)。采用熱激法將pBI121-Napin-BnGPAT9植物表達載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,經(jīng)PCR檢測后保存陽性菌落,檢測結(jié)果見圖4。圖4 重組質(zhì)粒的菌落 PCR 鑒定電泳圖

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3503372