目的建立漢遜酵母表達(dá)的重組諾如病毒基因工程疫苗中殘余宿主DNA實(shí)時熒光定量PCR（real-time quantitative PCR,qPCR）檢測方法,并進(jìn)行驗(yàn)證。方法采用磁珠法提取漢遜酵母基因組DNA,獲得標(biāo)準(zhǔn)品,建立q PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線,并進(jìn)行專屬性、線性、準(zhǔn)確度、精密度和耐用性驗(yàn)證。結(jié)果專屬性驗(yàn)證結(jié)果顯示,與對照制劑（注射用水、緩沖液、Vero細(xì)胞和CHO細(xì)胞培養(yǎng)上清DNA）相比,建立的方法對漢遜酵母DNA具有特異性擴(kuò)增曲線;線性驗(yàn)證中5次試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)（R2）均> 0.98;準(zhǔn)確度驗(yàn)證試驗(yàn)不同濃度樣品的加標(biāo)回收率在95.12%～105.72%之間,均在70%～130%范圍內(nèi);重復(fù)性和中間精密度驗(yàn)證試驗(yàn)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）均小于30%;耐用性驗(yàn)證中,Proteinase K不同消化溫度下檢測結(jié)果的RSD為20.75%,不同蛋白濃度供試品檢測結(jié)果的RSD為27.11%,均符合《中國藥典》三部（2015版）要求。結(jié)論建立的方法專屬性、線性、準(zhǔn)確度、精密度和耐用性均符合要求,可用于檢測重組諾如病毒類病毒顆粒（virus-like particle,VLP）疫苗中殘余宿主... 

【文章來源】：中國生物制品學(xué)雜志. 2020,33(12)CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

q PCR的擴(kuò)增曲線（A）和標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合曲線（B)

重組諾如病毒VLP提取后，經(jīng)q PCR檢測其殘余DNA含量，獲得了經(jīng)典的q PCR擴(kuò)增曲線，DNA含量為14 pg/μL；而CHO細(xì)胞培養(yǎng)上清、Vero細(xì)胞培養(yǎng)上清、緩沖液和水采用同樣步驟提取DNA后經(jīng)q PCR擴(kuò)增，均未出現(xiàn)經(jīng)典的擴(kuò)增曲線，結(jié)果均為陰性。見圖2。表明該方法檢測漢遜酵母殘余DNA專屬性良好。2.2.2 線性

檢測方法的線性驗(yàn)證擬合曲線圖


本文編號：3496344