目的建立漢遜酵母表達的重組諾如病毒基因工程疫苗中殘余宿主DNA實時熒光定量PCR（real-time quantitative PCR,qPCR）檢測方法,并進行驗證。方法采用磁珠法提取漢遜酵母基因組DNA,獲得標準品,建立q PCR標準曲線,并進行專屬性、線性、準確度、精密度和耐用性驗證。結果專屬性驗證結果顯示,與對照制劑（注射用水、緩沖液、Vero細胞和CHO細胞培養(yǎng)上清DNA）相比,建立的方法對漢遜酵母DNA具有特異性擴增曲線;線性驗證中5次試驗標準曲線相關系數(shù)（R2）均> 0.98;準確度驗證試驗不同濃度樣品的加標回收率在95.12%～105.72%之間,均在70%～130%范圍內(nèi);重復性和中間精密度驗證試驗相對標準偏差（RSD）均小于30%;耐用性驗證中,Proteinase K不同消化溫度下檢測結果的RSD為20.75%,不同蛋白濃度供試品檢測結果的RSD為27.11%,均符合《中國藥典》三部（2015版）要求。結論建立的方法專屬性、線性、準確度、精密度和耐用性均符合要求,可用于檢測重組諾如病毒類病毒顆粒（virus-like particle,VLP）疫苗中殘余宿主... 

【文章來源】：中國生物制品學雜志. 2020,33(12)CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

q PCR的擴增曲線（A）和標準曲線的擬合曲線（B)

重組諾如病毒VLP提取后，經(jīng)q PCR檢測其殘余DNA含量，獲得了經(jīng)典的q PCR擴增曲線，DNA含量為14 pg/μL；而CHO細胞培養(yǎng)上清、Vero細胞培養(yǎng)上清、緩沖液和水采用同樣步驟提取DNA后經(jīng)q PCR擴增，均未出現(xiàn)經(jīng)典的擴增曲線，結果均為陰性。見圖2。表明該方法檢測漢遜酵母殘余DNA專屬性良好。2.2.2 線性

檢測方法的線性驗證擬合曲線圖


本文編號：3496344