造血包括原始造血和定向造血,是在有序且復(fù)雜的情況下發(fā)生的,該過程異�？赡軙�(huì)導(dǎo)致各種類型的血液疾病。斑馬魚體型小,繁衍后代的能力強(qiáng),胚胎在形態(tài)發(fā)生方面與人類極為相像,一些重要的調(diào)控因子和信號(hào)通路也非常保守,非常適合用于造血發(fā)育的研究。phf6基因的突變與多種血液疾病的發(fā)生有關(guān)。該基因所編碼的蛋白在結(jié)構(gòu)上擁有兩個(gè)PHD結(jié)構(gòu)域,突變多發(fā)生在這兩個(gè)結(jié)構(gòu)域內(nèi)。雖然已有的研究表明phf6基因的突變與血液疾病的發(fā)生有一定的聯(lián)系,但其具體的功能以及該基因是如何影響血液疾病發(fā)生的分子機(jī)制尚不明確。為了研究phf6基因在造血方面的作用,最初我們利用原位雜交檢測(cè)了phf6基因的時(shí)空表達(dá),然后進(jìn)一步通過phf6的敲低與敲除實(shí)驗(yàn)來研究其在早期造血發(fā)生過程中的功能。首先將phf6 splicing morpholino與phf6 atg morpholino分別注射到斑馬魚單胞期胚胎中以降低phf6的表達(dá),利用原位雜交、O-Dianisidine染色、中性紅染色、qPCR等對(duì)不同造血時(shí)期特異性標(biāo)記分子的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè),來探究phf6敲低后對(duì)早期造血發(fā)生的影響。結(jié)果表明,注射這兩種morpholino后所檢測(cè)的表型結(jié)... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

phf6ePHD2結(jié)構(gòu)域（圖文引自文獻(xiàn)[1]

華 中 科 技 大 學(xué) 碩 士 學(xué) 位 論 文phf6 突變與多種類型疾病的發(fā)生有關(guān)，起初是在 BFLS（B rjeson-ForssmLehman syndrome）中發(fā)現(xiàn)該基因存在突變，在諸如急性 T 淋巴細(xì)胞白血病 T-A等中也有發(fā)現(xiàn)其具有不同的突變情況，具體情況如圖 1.2 所示 。該基因突變后會(huì)得其表達(dá)的蛋白無法發(fā)揮作用，進(jìn)而引發(fā)各種血液性疾病。由于這個(gè)基因是在 X色體上，所以由該基因?qū)е碌募膊』颊邚男詣e上來看主要發(fā)生于男性，女性中也發(fā)生，但較之男性患者相對(duì)少些。

圖 1.3 斑馬魚造血發(fā)育的具體時(shí)空表達(dá)情況（圖片引自文獻(xiàn)[46]）Figure 1.3 Spatial and temporal representation ofhematopoiesis in the zebrafish（cited from[46]）基于血液特異性標(biāo)記分子的表達(dá)模式，紅系細(xì)胞（E），髓系細(xì)胞（M）和血栓（T）譜系在 CHT 區(qū)發(fā)現(xiàn)。腎髓含有所有不同的血系，包括淋巴 B 細(xì)胞（L（B））譜系。淋巴樣祖細(xì)胞（CLPs）在胸腺中成熟為淋巴 T 細(xì)胞（L（T））。24hpf 胚胎（左）和 72hpf 幼魚（右）描繪了造血的不同部位。底部橫軸顯示了不同部位血液特異性標(biāo)記分子表達(dá)的時(shí)間軸。重要的特異性標(biāo)志分子顯示在上圖的四方框中。中胚層細(xì)胞（白色框和灰色箭頭）在 ALM、PLM / ICM、PBI 和 AGM 區(qū)分化形成四種不同的血液祖細(xì)胞。血液循環(huán)開始于大約 24hpf（紅線及箭頭所示）。大約 33hpf， AGM 區(qū)祖細(xì)胞開始進(jìn)入循環(huán)，48hpf 時(shí)，這些祖細(xì)胞開始遷移至 CHT 區(qū)和腎臟（黑色箭頭）。54hpf 時(shí)，來自 AGM 區(qū)的 CLPs 開始遷移至胸腺。 CHT 區(qū)是定向造血的中間位點(diǎn)，接著造血從幼體階段進(jìn)入到成熟腎臟，腎臟是造血的主要部位。胸腺是淋巴 T 細(xì)胞成熟的部位，而 CLPs 與成人中的其他血液祖細(xì)胞一樣，起源于腎臟。


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