維氏氣單胞菌（Aeromonas veroni,A.veronii）是一種重要的人—獸—水生動物共患致病菌,研究顯示近來毒力呈逐年上升趨勢,已被越來越多的學(xué)者重視,但對于A.veronii毒力方面研究較少,對于毒力基因的研究有助于對A.veronii的致病機(jī)制的研究提供理論依據(jù)。對于rpoN基因的研究最早見于1985年,近年來有關(guān)rpoN的研究報道逐年增多,它能夠控制多個功能基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá),包括氮代謝、逆迫應(yīng)答、碳源利用、運動及毒力等基因的表達(dá),在很多細(xì)菌中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。因此試驗選取rpoN基因作為敲除對象,應(yīng)用基于自殺性質(zhì)粒的同源重組技術(shù)分別構(gòu)建A.veronii TH0426株rpoN的缺失株△rpoN,以及其互補(bǔ)株C-rpoN,并對上述菌進(jìn)行部分生物學(xué)特性分析。結(jié)果顯示,在生長曲線、溶血活性方面,三者未見明顯區(qū)別;菌落形態(tài)上,缺失株△rpoN呈明顯波浪狀邊緣,互補(bǔ)株C-rpoN恢復(fù)至野生株表面光滑,邊緣整齊的狀態(tài);斑馬魚半數(shù)致死量測定結(jié)果顯示缺失株△rpoN的LD₅₀比野生株升高了22.9倍,小鼠的LD₅₀升高3.06倍,毒力顯著... 

【文章來源】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)吉林省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

A.veroniiTH0426株rpoN基因敲除流程圖

圖 1.2 rpoN 基因上下游基因的擴(kuò)增及連接A:rpoN 上游基因；B:rpoN 下游基因；C:rpoN 上下游基因連接（UD rpoN）Fig. 1.2 Amplification and connection of rpoN upstream and downstream upstram gene:B: rpoN downstream gene:C: rpoN upstream and downstream gerpoN）用限制性內(nèi)切酶 XbaI 和 SacI 酶切重組質(zhì)粒 pEASY-UD rpoN 和自E112（圖 1.3AB）后連接，構(gòu)建重組自殺性質(zhì)粒 pRE112-UD rpo物 pRE112-F/pRE112-R 和 rpoN-for/rpoN-rev 引物進(jìn)行檢測并測序正確（圖 1.3 C）。

圖 1.2 rpoN 基因上下游基因的擴(kuò)增及連接A:rpoN 上游基因；B:rpoN 下游基因；C:rpoN 上下游基因連接（UD rpoN）；Fig. 1.2 Amplification and connection of rpoN upstream and downstreampoN upstram gene:B: rpoN downstream gene:C: rpoN upstream and downstream generpoN）利用限制性內(nèi)切酶 XbaI 和 SacI 酶切重組質(zhì)粒 pEASY-UD rpoN 和自殺RE112（圖 1.3AB）后連接，構(gòu)建重組自殺性質(zhì)粒 pRE112-UD rpoN，引物 pRE112-F/pRE112-R 和 rpoN-for/rpoN-rev 引物進(jìn)行檢測并測序,結(jié)正確（圖 1.3 C）。

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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碩士論文
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[2]固氮施氏假單胞菌RpoN蛋白調(diào)控硝酸鹽同化的作用機(jī)制[D]. 李耘.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2016
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