目的:建立特異性hTERT基因沉默模型并探討靶向調(diào)控hTERT基因?qū)θ藧盒院谒亓鯝375細(xì)胞增殖能力的影響。方法:培養(yǎng)人惡性黑素瘤A375細(xì)胞且通過(guò)細(xì)胞STR分型鑒定確認(rèn)細(xì)胞及交叉污染情況,將不同濃度（0、5.0、15.0、35.0nmol/L）的攜帶綠色熒光標(biāo)記的特異性siRNA與不同體積（1.5、3.0、4.5μl）的轉(zhuǎn)染試劑Hiperfect轉(zhuǎn)染人惡性黑素瘤A375細(xì)胞,細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率采用熒光顯微鏡判定,選出最佳的siRNA濃度和轉(zhuǎn)染試劑體積;合成4條hTERT-siRNA（hTERT-siRNA-203、hTERTsiRNA-210、hTERT-siRNA-217、hTERT-siRNA-224）在最佳轉(zhuǎn)染條件下分別轉(zhuǎn)染人惡性黑素瘤A375細(xì)胞,24h后提取總mRNA,通過(guò)qPCR篩選干擾效率最佳的hTERT-siRNA,利用MTT法觀察靶向沉默hTERT基因?qū)谒亓黾?xì)胞增殖能力的影響。結(jié)果:0、5.0、15.0、35.0nmol/L攜帶綠色熒光標(biāo)記的特異性siRNA分別與1.5μlHiperfect轉(zhuǎn)染人惡性黑素瘤A375細(xì)胞后,各組內(nèi)轉(zhuǎn)染效率分別為1.44%?0.49%、3... 

【文章來(lái)源】：新疆醫(yī)科大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：51 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

人惡性黑素瘤A375細(xì)胞STR基因分型圖譜

3分別為1.5、3.0、4.5μl轉(zhuǎn)染試劑組.圖2a 5.0nmol/L siRNA與3ulHiperfect轉(zhuǎn)染細(xì)胞后的熒光顯微鏡下圖Fig.2a Fluorescence microscopes of 5.0nmol/L siRNA and 3ulHiperfect transfected cells圖 2b 5.0nmol/L siRNA 與 3ulHiperfect 轉(zhuǎn)染細(xì)胞后的明視野圖Fig.2b The visual field of 5.0nmol/L siRNA and 3ulHiperfect transfected cells圖 2c 不同濃度 siRNA 組和不同體積 Hiperfect 的轉(zhuǎn)染效率圖(%)Fig.2c The tr

（F=57.21，P＜0.05），5.0nmol/L siRNA與3ulHiperfect的轉(zhuǎn)染效率明顯高于其他各組（均P＜0.05），轉(zhuǎn)染效率最佳（如圖2a，圖2b，圖2c,表2）。

【參考文獻(xiàn)】：
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