本文關(guān)鍵詞：紅梨果皮著色相關(guān)R2R3型MYB轉(zhuǎn)錄因子基因功能分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本研究以‘早酥’梨與其紅皮芽變‘紅早酥’作為試驗材料,根據(jù)實驗室前期采用系統(tǒng)進(jìn)化分析法篩選獲得的、可能參與花青苷代謝的三個MYB轉(zhuǎn)錄因子,在‘早酥’及‘紅早酥’中開展了與花青苷有關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子的分離及其功能分析,并在‘早酥’幼果中進(jìn)行了候選基因的功能驗證,為了揭示梨果皮中花青苷生物合成的機理,為后續(xù)深入探究調(diào)節(jié)梨果實中花青苷代謝調(diào)控網(wǎng)絡(luò)奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:1.利用同源克隆手段,使用白梨(Pyrus bretschneideri Rehd.)品種‘早酥’梨及其紅色芽變‘紅早酥’作為試驗材料,分離獲得了三個可能與花青苷生物合成相關(guān)的候選MYB轉(zhuǎn)錄因子的啟動子序列和gDNA基因全長序列并且進(jìn)行測序分析。其中,在基因組中PbMYB10b啟動子的相似序列為2個,PbMYB9啟動子的相似序列為3個,PbMYB3啟動子的相似序列為3個。PbMYB10b基因全長為2379 bp,序列中含有兩個內(nèi)含子,長度分別為104 bp和1588 bp;PbMYB9基因的全長為1191 bp,序列中含有兩個內(nèi)含子,長度分別為119 bp和190 bp;PbMYB3基因全長為978 bp,序列中包含一個內(nèi)含子,長度為207 bp。2.以白梨品種‘碭山酥’成熟果為試驗材料,利用農(nóng)桿菌GV3101和植物表達(dá)載體pCambia1301,通過采用不同的菌液注射量以及重懸液配方,對pCambia1301中報告基因GUS表達(dá)情況進(jìn)行檢驗最終獲得最佳的侵染方法,建立并優(yōu)化梨果實瞬時表達(dá)體系。結(jié)果顯示,選用選用以蒸餾水為溶劑配置終濃度5%葡萄糖,50 mM MES,2 m M磷酸鈉,0.1 m M AS的溶液重懸液、注射量為200?l時能達(dá)到最佳效果。3.選取pCambia1301質(zhì)粒載體,將克隆獲得的候選基因cDs引入載體的35S啟動子之后,成功構(gòu)建了pCambia1301-PbMYB10b,pCambia1301-PbMYB9和pCambia1301-PbMYB3瞬時表達(dá)載體,在白梨品種‘早酥’上進(jìn)行候選基因的瞬時表達(dá)實驗。結(jié)果顯示,PbMYB10b能夠促進(jìn)結(jié)構(gòu)基因PbDFR的表達(dá),是花青苷途徑的調(diào)控因子;PbMYB9能對PbANR基因和PbUFGT1基因的表達(dá)起作用,在花青苷代謝途徑起到重要作用;PbMYB3能夠促進(jìn)PbUFGT1、PbFLS基因的表達(dá)。4.以早酥梨組培苗葉片為材料利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤法進(jìn)行目的基因穩(wěn)定遺傳轉(zhuǎn)化實驗。
【關(guān)鍵詞】：花青苷合成 轉(zhuǎn)錄因子 基因功能驗證
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S661.2
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-10
• 第一章 文獻(xiàn)綜述10-17
• 1.1 引言10-11
• 1.2 植物花青苷研究11-15
• 1.2.1 花青苷總述11-12
• 1.2.2 植物花青苷生物合成的基因調(diào)控12-13
• 1.2.3 影響花青苷代謝的因素13-15
• 1.3 梨花青苷合成研究進(jìn)展及存在問題15-16
• 1.4 本研究的目的與意義16-17
• 第二章 材料與方法17-27
• 2.1 材料17-19
• 2.1.1 植物材料17
• 2.1.2 培養(yǎng)基及試劑的配置17-19
• 2.2 方法19-27
• 2.2.1 植物基因組DNA的提取19-20
• 2.2.2 PCR反應(yīng)克隆目的基因啟動子及基因全長20-21
• 2.2.3 PCR產(chǎn)物的連接與轉(zhuǎn)化21
• 2.2.4 陽性克隆的鑒定及測序21
• 2.2.5 植物瞬時表達(dá)21-24
• 2.2.6 酵母單雜交試驗24-26
• 2.2.7 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤法轉(zhuǎn)化目的基因26-27
• 第三章 結(jié)果與分析27-34
• 3.1 候選MYB基因啟動子、基因全長獲得及其內(nèi)含子分析27-28
• 3.2 梨活體果實瞬時表達(dá)體系的優(yōu)化28-29
• 3.3 候選MYB基因的瞬時表達(dá)功能驗證29-31
• 3.4 候選MYB轉(zhuǎn)錄因子與花青苷合成相關(guān)結(jié)構(gòu)基因間調(diào)控關(guān)系的單雜交驗證31-32
• 3.5 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤法轉(zhuǎn)化目的基因32-34
• 第四章 討論34-37
• 第五章 結(jié)論與創(chuàng)新點37-38
• 參考文獻(xiàn)38-44
• 附錄44-49
• 縮略詞49-50
• 致謝50-51
• 作者簡介51

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