本文關鍵詞：花絨寄甲熱休克蛋白基因表達研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：花絨寄甲(Dastarcus helophoroides Sharp)是天牛類林木蛀干害蟲的有效天敵昆蟲,在自然界中其生命活動無時無刻要承受很多不利于生長生存的影響因子的威脅,如極端的高低溫、氧化、饑餓等環(huán)境脅迫�；ńq寄甲經(jīng)長期的自然適應中,具備很強的環(huán)境適應能力。熱休克蛋白(Heat Shock Protein)作為生物體內(nèi)的應激蛋白,在調(diào)節(jié)和適應環(huán)境中的不良刺激以維持機體正常的生長發(fā)育的過程中具有重要作用。為闡明熱休克蛋白HSP70(Heat Shock Protein 70)與sHSP(small Heat Shock Protein)在花絨寄甲發(fā)育歷期及雌雄成蟲抵抗環(huán)境脅迫中的作用,利用實時熒光定量PCR技術分析其在發(fā)育階段和不同環(huán)境脅迫時表達情況。本研究的主要結果如下:從花絨寄甲成蟲轉錄組數(shù)據(jù)庫得到3條HSP70基因和3條小分子熱休克蛋白,即D.hHSP69.09、D.hHSP70.11、D.hHSP71.88及D.hsHSP11.06、D.hsHSP11.10和D.hsHSP20.99,其ORF大小分別為1980、1967、1910bp、444、574和789bp;編碼氨基酸個數(shù)為626、636、655、102、102和185;理論等電點為5.57、6.01、5.93、9.52、8.01和6.31;分子量大小為69.09kDa、70.11kDa、71.88kDa、11.06kDa、11.10kDa和20.99kDa。在花絨寄甲不同發(fā)育階段,最高表達量為:D.hHSP69.09在1齡幼蟲期,D.hHSP70.11和D.hHS71.88在雄蟲;D.hsHSP11.06和D.hsHSP11.10的最高的表達水平出現(xiàn)在2齡幼蟲階段,D.hsHSP20.09在5齡幼蟲階段。不同組織中的最高表達量為:D.hHSP69.09和D.hHSP70.11在卵巢,D.hHSP71.88和D.hsHSP11.06在脂肪體,D.hsHSP11.10和D.hsHSP20.99基因在精巢中表達量最高。D.hHSP69.09在雌蟲中表達量顯著高于雄蟲;D.hHSP70.11和D.hHSP71.88在雄蟲中表達量顯著高于雌蟲。HSP基因表達量最高時對應的溫度為35℃或38℃。HSP基因在41℃高溫刺激下,均出現(xiàn)時間效應。氧化劑處理后D.hHSP69.09、D.hsHSP11.10和D.hs HSP20.99在雌蟲中的表達量顯著高于雄蟲,D.hHSP70.11和D.hHSP71.88為雄蟲顯著高于雌蟲,且HSP基因表達量最高時所對應的濃度在20m M和30mM之間�；ńq寄甲雌蟲耐饑餓能力高于雄蟲。隨饑餓時間延長,雄蟲中HSP70基因表達量降低。雌成蟲中D.hHSP69.09在饑餓第2天時表達量略微上升;D.hHSP70.11在饑餓處理前4天表達量降低,后略微上升,第8天時表達量達到最高。D.hHSP71.88基因的表達量饑餓處理后上升,第8天表達量驟升。雄蟲中D.hsHSP11.06最大表達水平在第2天,雌蟲在第6~12天;D.hsHsp11.10雄蟲最大表達水平在第6~10天,雌蟲在第4天;D.hsHsp 20.99雄蟲最大表達水平在第6天,雌蟲在第4天。綜上所述,花容寄甲HSP70和sHSP基因均能響應各種環(huán)境脅迫,在其生長發(fā)育、繁殖與耐高溫、抗氧化、耐饑餓等過程中發(fā)揮重要作用。
【關鍵詞】：花絨寄甲 HSP70 sHSP 環(huán)境脅迫 RT-qPCR
【學位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S763.306.4
【目錄】：

• 摘要6-8
• abstract8-12
• 第一章 文獻綜述12-19
• 1.1 花絨寄甲研究進展12-14
• 1.1.1 花絨寄甲的生物學研究12-13
• 1.1.2 花絨寄甲的人工繁育方面研究13
• 1.1.3 花絨寄甲生物防治作用方面研究13
• 1.1.4 花絨寄甲的抗性研究13-14
• 1.2 熱休克蛋白的研究進展14-17
• 1.2.1 熱休克蛋白的發(fā)現(xiàn)與分類14-15
• 1.2.2 熱休克蛋白的結構特征15
• 1.2.3 熱休克蛋白的生物學功能15-17
• 1.3 本試驗的目的意義以及創(chuàng)新點17-18
• 1.3.1 本試驗的目的意義17-18
• 1.3.2 本試驗的創(chuàng)新點18
• 1.4 研究內(nèi)容及技術路線18-19
• 1.4.1 研究內(nèi)容18
• 1.4.2 技術路線18-19
• 第二章 材料與方法19-23
• 2.1 實驗材料19-20
• 2.1.1 試蟲19
• 2.1.2 實驗儀器19
• 2.1.3 實驗藥品19-20
• 2.2 花絨寄甲HSP基因的序列檢索20
• 2.3 HSP基因序列分析及進化樹構建20
• 2.4 花絨寄甲總RNA的提取、純化和鑒定20-21
• 2.4.1 利用TRIZOL Kit提取總RNA20
• 2.4.2 花絨寄甲總RNA的檢測20-21
• 2.4.3 cDNA第一鏈的合成和純化21
• 2.5 實時熒光定量PCR分析基因的表達21-23
• 2.5.1 實時熒光定量PCR(RT-qPCR)內(nèi)參引物、反應體系及反應條件的確定21-22
• 2.5.2 實時熒光定量PCR分析22
• 2.5.3 數(shù)據(jù)處理22-23
• 第三章 結果與分析23-41
• 3.1 花絨寄甲HSP70基因的分子特性與表達分析23-32
• 3.1.1 花絨寄甲HSP70基因cDNA的檢索及序列分析23-25
• 3.1.2 定量PCR25-32
• 3.2 花絨寄甲sHSP基因的分子特性與表達分析32-41
• 3.2.1 花絨寄甲sHSP基因cDNA的檢索及序列分析32-34
• 3.2.2 定量PCR34-41
• 第四章 討論41-44
• 4.1 花絨寄甲HSP基因的結構41
• 4.1.1 花絨寄甲HSP70基因的結構41
• 4.1.2 花絨寄甲sHSP基因的結構41
• 4.2 花絨寄甲HSP基因的時間和空間特異性41-42
• 4.2.1 花絨寄甲HSP70基因的時間和空間特異性41-42
• 4.2.2 花絨寄甲sHSP基因的時間和空間特異性42
• 4.3 花絨寄甲HSP基因在不同非生物應激中的表達特性42-44
• 4.3.1 花絨寄甲HSP70基因在不同非生物應激中的表達特性42-43
• 4.3.2 花絨寄甲sHSP基因在不同非生物應激中的表達特性43-44
• 第五章 結論、創(chuàng)新點和研究展望44-46
• 5.1 主要結論44
• 5.1.1 獲得3條HSP70和3條sHSP cDNA序列44
• 5.1.2 明確3條HSP70和3條sHSP基因的時間和空間分布特性44
• 5.1.3 明確3條HSP70和3條sHSP基因在不同非生物應激中的表達特性44
• 5.2 創(chuàng)新點44
• 5.3 研究展望44-46
• 參考文獻46-51
• 致謝51-52
• 作者簡介52

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 姜Z，

本文編號：328091