本文關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)OsC2H2-12基因水稻分子鑒定及耐冷性分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：水稻是世界上主要的糧食作物之一,對(duì)溫度極其敏感,容易受低溫影響而減產(chǎn)。在我國(guó)東北地區(qū),低溫冷害造成相當(dāng)嚴(yán)重的水稻減產(chǎn)。C2H2鋅指蛋白轉(zhuǎn)錄因子家族對(duì)提高植物逆境脅迫下的抗逆性具有重要作用,本研究利用C2H2家族中的OsC2H2-12基因的過(guò)量表達(dá)轉(zhuǎn)基因材料通過(guò)表型分析、生理生化指標(biāo)檢測(cè)、基因表達(dá)分析、亞細(xì)胞定位等方法進(jìn)行了水稻苗期低溫脅迫處理下的OsC2H2-12基因功能,其主要結(jié)果如下:1、對(duì)轉(zhuǎn)基因材料的分子檢測(cè)結(jié)果,篩選出了兩個(gè)轉(zhuǎn)OsC2H2-12基因的過(guò)量表達(dá)轉(zhuǎn)基因材料。Western blot分析結(jié)果,OsC2H2-12基因的目的蛋白在水稻中得到表達(dá),進(jìn)一步證明了OsC2H2-12基因已成功整合到水稻基因組中。2、種子低溫發(fā)芽率和苗期耐冷性鑒定結(jié)果,OsC2H2-12轉(zhuǎn)基因材料的種子低溫發(fā)芽率和苗期耐冷性均高于對(duì)照(Kitaake),表明OsC2H2-12基因可能參與水稻低溫脅迫的調(diào)節(jié)過(guò)程。3、利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)OsC2H2-12轉(zhuǎn)基因水稻及對(duì)照幼苗中OsC2H2-12基因的表達(dá)量進(jìn)行對(duì)比分析結(jié)果,遭受低溫脅迫時(shí)OsC2H2-12基因在轉(zhuǎn)基因水稻中的表達(dá)量最高達(dá)到對(duì)照的6倍,表明OsC2H2-12基因在水稻苗期低溫脅迫耐受機(jī)制中起到重要作用。4、通過(guò)Gateway系統(tǒng)構(gòu)建到PGWB5-GFP載體上,轉(zhuǎn)化擬南芥原生質(zhì)體,利用熒光倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察OsC2H2-12基因表達(dá),結(jié)果該基因被定位在細(xì)胞核中。5、在低溫處理?xiàng)l件下,OsC2H2-12轉(zhuǎn)基因材料與對(duì)照相比葉綠素降解緩慢,可溶性糖含量和可溶性蛋白含量增加,過(guò)氧化物酶活性提高,表明OsC2H2-12轉(zhuǎn)基因材料具有一定的耐冷性。
【關(guān)鍵詞】：水稻 C2H2轉(zhuǎn)錄因子 耐冷性 功能分析
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S511
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-11
• 第1章 緒論11-22
• 1.1 引言11
• 1.2 高等植物轉(zhuǎn)錄因子概述11-13
• 1.2.1 轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)11-12
• 1.2.2 轉(zhuǎn)錄因子的功能12
• 1.2.3 植物轉(zhuǎn)錄因子的分類(lèi)12
• 1.2.4 轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控作用12-13
• 1.3 轉(zhuǎn)錄因子與植物次生代謝的關(guān)系13-14
• 1.4 C2H2型鋅指蛋白的研究進(jìn)展14-16
• 1.4.1 C2H2型鋅指蛋白的功能區(qū)15
• 1.4.2 C2H2鋅指蛋白與植物生長(zhǎng)發(fā)育15
• 1.4.3 C2H2鋅指蛋白與植物抗逆性15-16
• 1.5 水稻耐冷性研究16-18
• 1.5.1 水稻耐冷生理變化16-17
• 1.5.2 水稻耐冷性QTL研究進(jìn)展17
• 1.5.3 C2H2型鋅指蛋白對(duì)水稻耐冷機(jī)制的調(diào)控17-18
• 1.6 研究技術(shù)與策略18-21
• 1.6.1 轉(zhuǎn)基因水稻的分子鑒定18-19
• 1.6.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)19
• 1.6.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR的基本原理19
• 1.6.4 基因表達(dá)分析19-20
• 1.6.5 轉(zhuǎn)基因水稻材料的耐冷性鑒定20
• 1.6.6 亞細(xì)胞定位分析20
• 1.6.7 免疫印記（Western Blotting）分析20
• 1.6.8 生理生化指標(biāo)分析20-21
• 1.7 研究目的及意義21-22
• 第2章 水稻OsC2H2-12轉(zhuǎn)基因材料的分子檢測(cè)及Western Blot檢測(cè)22-34
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料22-24
• 2.1.1 植物材料22
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)藥品22-23
• 2.1.2.1 基因測(cè)序及檢測(cè)22
• 2.1.2.2 Western Blot藥品及配置22-23
• 2.1.3 主要儀器23-24
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法24-26
• 2.2.1 分子檢測(cè)24-26
• 2.2.1.1 種子消毒24
• 2.2.1.2 轉(zhuǎn)基因株系的篩選24
• 2.2.1.3 基因組DNA的提取24-25
• 2.2.1.4 PCR引物設(shè)計(jì)25
• 2.2.1.5 PCR擴(kuò)增程序及體系25-26
• 2.2.2 Western Blot檢測(cè)26
• 2.3 結(jié)果與分析26-32
• 2.4 討論32-33
• 2.5 結(jié)論33-34
• 第3章 OsC2H2-12基因的亞細(xì)胞定位分析34-42
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料34
• 3.1.1 植物材料34
• 3.1.2 主要儀器34
• 3.1.3 實(shí)驗(yàn)藥品34
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法34-40
• 3.2.1 載體構(gòu)建34
• 3.2.2 PCR引物設(shè)計(jì)34-35
• 3.2.3 水稻總RNA提取35
• 3.2.4 反轉(zhuǎn)錄35-36
• 3.2.5 目的基因擴(kuò)增片段回收36-37
• 3.2.6 BP重組反應(yīng)37
• 3.2.7 LR重組反應(yīng)37-38
• 3.2.8 高純度小提中量試劑盒提取質(zhì)粒DNA38-39
• 3.2.9 擬南芥原生質(zhì)體制備及轉(zhuǎn)化39-40
• 3.3 結(jié)果與分析40-41
• 3.4 討論41
• 3.5 結(jié)論41-42
• 第4章 OsC2H2-12轉(zhuǎn)基因水稻低溫發(fā)芽率和苗期耐冷性鑒定42-46
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料42
• 4.1.1 植物材料42
• 4.1.2 主要儀器42
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法42-43
• 4.2.1 水稻芽期低溫脅迫處理42
• 4.2.2 水稻苗期低溫脅迫處理42-43
• 4.3 結(jié)果與分析43-45
• 4.3.1 OsC2H2-12轉(zhuǎn)基因株系低溫發(fā)芽率43-44
• 4.3.2 OsC2H2-12轉(zhuǎn)基因水稻苗期耐冷性鑒定44-45
• 4.4 討論45
• 4.5 結(jié)論45-46
• 第5章 低溫脅迫條件下OsC2H2-12基因在水稻苗期的表達(dá)分析46-51
• 5.1 實(shí)驗(yàn)材料46
• 5.1.1 樣品材料46
• 5.1.2 主要儀器46
• 5.1.3 實(shí)驗(yàn)藥品46
• 5.2 實(shí)驗(yàn)方法46-49
• 5.2.1 水稻苗期低溫脅迫處理及取材46
• 5.2.2 水稻葉片總RNA的提取46-47
• 5.2.3 cDNA的合成47-48
• 5.2.4 Real-timePCR引物的設(shè)計(jì)48-49
• 5.3 結(jié)果與分析49-50
• 5.3.1 RNA質(zhì)量檢測(cè)49
• 5.3.2 低溫脅迫下OsC2H2-12轉(zhuǎn)基因水稻苗期基因表達(dá)差異分析49-50
• 5.4 討論50
• 5.5 結(jié)論50-51
• 第6章 低溫脅迫下水稻苗期的逆境生理分析51-59
• 6.1 實(shí)驗(yàn)材料51
• 6.1.1 樣品材料51
• 6.1.2 主要儀器51
• 6.1.3 實(shí)驗(yàn)藥品51
• 6.2 實(shí)驗(yàn)方法51-54
• 6.2.1 水稻苗期低溫脅迫處理及取材51-52
• 6.2.2 葉綠素含量測(cè)定52
• 6.2.3 可溶性糖含量測(cè)定52-53
• 6.2.4 可溶性蛋白含量測(cè)定53
• 6.2.5 過(guò)氧化物酶活性測(cè)定53-54
• 6.3 結(jié)果與分析54-58
• 6.3.1 低溫脅迫對(duì)水稻葉綠素含量的影響54-55
• 6.3.2 低溫脅迫對(duì)水稻可溶性糖含量的影響55-56
• 6.3.3 低溫脅迫對(duì)可溶性蛋白含量的影響56-57
• 6.3.4 低溫脅迫對(duì)過(guò)氧化物酶的影響57-58
• 6.4 討論58
• 6.5 結(jié)論58-59
• 第7章 全文總結(jié)59-60
• 參考文獻(xiàn)60-68
• 作者簡(jiǎn)介68-69
• 致謝69

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 趙麗娟;易小婭;曾幼玲;;植物逆境相關(guān)C2H2型鋅指蛋白的研究進(jìn)展[J];分子植物育種;2016年03期

2 崔一鳴;畢伊紅;張丹丹;宋佳;;低溫冷害研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技;2015年24期

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9 王旭一;;水稻低溫冷害下生理研究進(jìn)展[J];北方水稻;2013年03期

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

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2 陳莫軍;水稻C2H2型鋅指蛋白家族轉(zhuǎn)基因材料的獲得及耐冷相關(guān)性狀分析[D];吉林大學(xué);2015年

  本文關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)OsC2H2-12基因水稻分子鑒定及耐冷性分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：327312