本文關鍵詞：參苓白術散對脾虛濕困型潰瘍性結腸炎大鼠結腸組織IL-4、IL-1β及p38MAPK基因蛋白表達的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究參苓白術散對脾虛濕困型潰瘍性結腸炎模型大鼠p38MAPK信號通路p38MAPK及細胞因子IL-1β、IL-4基因及蛋白表達的干預作用,從基因及蛋白角度探討參苓白術散治療脾虛濕困型UC的可能作用機制。方法:60只健康成年SPF級Wistar大鼠(體重180±20g),按隨機數(shù)字表法將其分為空白組與造模組。造模組實驗大鼠用復合因素法復制脾虛濕困型潰瘍性結腸炎大鼠模型,并給予相應治療:①造模組實驗大鼠空腹灌服精煉豬油2mL/只·d,隔日1次;②每日使空白組之外的大鼠站立于2cm深的水中8h;③大鼠飼養(yǎng)采取饑、飽失常法(隔日禁食不禁水法),并給予充足的飲水,連續(xù)造模21天;④將造模組實驗大鼠按體重編號,隨機數(shù)字表法分為模型組、參苓白術散高、中、低劑量組和SASP(柳氮磺胺吡啶)組。實驗大鼠分籠飼養(yǎng),雌雄各半,每組各10只;⑤空白組及模型組實驗大鼠給予2mL/只·d蒸餾水灌胃治療;⑥參苓白術散各治療組分別給予高、中、低劑量的參苓白術散濃煎藥液灌胃治療(劑量分別為24、12、6g·kg-1·d-1);⑦西藥組灌服SASP片劑水溶液(0.2g·Kg-1·d-1),每日一次,共計21天。取材及檢測:各組大鼠于最后一次治療后禁食不進水24小時,用5%水合氯醛0.3m L/100g麻醉后脫頸處死實驗大鼠。1股動脈取血,室溫靜置30min,置于離心管中離心5min(3000rm/min),取上層血清于無菌的凍存管內(nèi)-80℃冰箱保存,用于后續(xù)ELISA檢測。2截取病變部位結腸組織,并用生理鹽水反復沖洗干凈,記錄其結腸黏膜充血、壞死、潰瘍等。3取病變部位2~3厘米的結腸組織,以4%多聚甲醛固定,HE法染色。并記錄各組大鼠結腸組織的病理變化情況,其他結腸組織置于無酶凍存管中-80℃冰箱保存以備用于以后的RT-PCR及Western-blot檢測使用。結果:1與空白組相比較,模型組大鼠的結腸黏膜存在不同程度的充血、水腫、糜爛及潰瘍等病變,組間差異顯著(P0.01),有顯著統(tǒng)計學意義;鏡下:模型組大鼠結腸黏膜均伴有大量炎性細胞浸潤,肉芽、纖維性增生。藥物治療后參苓白術散組及SASP組大鼠結腸組織的局部炎癥、壞死、肉芽及纖維增生等病變情況不同程度減輕。結腸組織病理損傷及肉眼觀察評分低于模型組大鼠,組間存在顯著差異(P0.01),組間比較有統(tǒng)計學意義。2與空白組比較,模型組大鼠血清及結腸組織p38MAPK、IL-1β含量升高,IL-4含量顯著降低、組間差異顯著(P0.01)。參苓白術散中、高劑量組p38MAPK、IL-1β含量表達明顯降低,IL-4的含量顯著升高,組間差異顯著(P0.01)。柳氮磺胺吡啶組與參苓白術散高劑量組相比較,二者間p38MAPK、IL-1β、IL-4的含量表達無顯差異(P0.05),結果無統(tǒng)計學意義。3 p38MAPK、IL-1Β、IL-4的基因表達水平比較:與空白組相比,模型組大鼠的p38MAPK、IL-1β的含量顯著升高,IL-4的含量顯著降低,組間差異顯著(P0.01)。各參苓白術散治療組結腸組織中的p38MAPK、IL-1β基因表達不同水平下降,以中、高劑量下降最明顯,IL-4的基因表達量明顯升高,組間差異顯著(P0.01或P0.05)。參苓白術散高劑量組與西藥組比較,組間差異不明顯(P0.05)。4 p38MAPK蛋白表達水平比較:與空白組相比較,模型組p38MAPK蛋白表達水平明顯升高,組間差異顯著(P0.01),有統(tǒng)計學意義。各治療組大鼠結腸組織內(nèi)的p38MAPK的蛋白含量均有不同程度的降低。模型組與高劑量比較,組間存在顯著差異(P0.01)。各參苓白術散治療組結腸組織p38MAPK蛋白表達水平存在不同程度下降,以中、高劑量組最明顯,組間差異顯著(P0.01或P0.05)。參苓白術散高劑量組與西藥組比較,組間差異不明顯(P0.05)。結論:1參苓白術散能夠干預UC大鼠結腸組織及血清內(nèi)的IL-1β、IL-4、p38MAPK的含量水平,具有降低炎細胞浸潤、減輕局部炎癥反應、促進組織修復等作用。光鏡下觀察顯示參苓白術散中、高劑量治療組結腸黏膜的組織細胞形態(tài)較接近正常細胞形態(tài),表明參苓白術散有助于恢復結腸黏膜分泌及自我保護功能。2脾虛濕困型潰瘍性結腸炎模型大鼠血清及其結腸組織內(nèi)p38MAPK、IL-1β、IL-4蛋白含量及基因表達水平可以反映模型大鼠的病變輕重程度,具有一定的監(jiān)測意義。3參苓白術散的治療作用可能與下調(diào)UC模型大鼠結腸黏膜組織內(nèi)的IL-1β蛋白含量及基因表達水平,上調(diào)IL-4蛋白含量及基因表達水平,進而促進結腸黏膜組織的修復有關。4參苓白術散可降低UC大鼠結腸組織內(nèi)p38MAPK蛋白含量,抑制炎癥損傷及細胞凋亡,并促進損傷部位結腸黏膜修復,提示參苓白術散對于UC的治療作用機制可能與其降低結腸組織內(nèi)p38MAPK蛋白表達,調(diào)節(jié)細胞因子IL-1β、IL-4蛋白含量及基因表達有關。
【關鍵詞】：白細胞介素 p38MAPK 參苓白術散 脾虛濕困證 潰瘍性結腸炎
【學位授予單位】：甘肅中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R285.5
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-11
• 英文縮略詞表11-12
• 前言12-14
• 第一部分 實驗研究14-47
• 1 實驗材料14-15
• 1.1 實驗動物14
• 1.2 實驗藥物14
• 1.3 主要實驗試劑14-15
• 1.4 主要實驗儀器15
• 2 實驗方法15-22
• 2.1 造模與分組15-16
• 2.2 給藥方法16
• 2.3 一般狀況觀察16
• 2.4 待檢的樣本采集方法16
• 2.5 制備病理切片及 HE 染色鏡下觀察16-17
• 2.6 雙抗體夾心 ELISA 法測定大鼠血清 IL-1β IL-4 含量17-18
• 2.7 實時熒光定量 PCR 技術檢測大鼠結腸組織中 IL-4、IL-1β、p38MAPK 的基因表達18-21
• 2.8 結果分析21-22
• 3 Western blot 技術檢測 p38MAPK 相關蛋白表達22-25
• 3.1 UC大鼠結腸組織總蛋白的提取22-23
• 3.2 蛋白變性23
• 3.3 SDS-PAGE電泳23-24
• 3.4 免疫反應24
• 3.5 化學發(fā)光24
• 3.6 圖像分析24
• 3.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析24-25
• 4 主要技術路線圖25-26
• 5 實驗結果及分析26-33
• 5.1 大鼠一般生存狀況觀察26
• 5.2 各實驗組大鼠結腸組織大體形態(tài)學改變26-27
• 5.3 結腸組織病理切片鏡下表現(xiàn)27-28
• 5.4 各組大鼠結腸組織IL-1β 和IL-4 mRNA表達水平28-32
• 5.5 p38MAPK信號通路基因、蛋白表達變化32-33
• 6 討論33-38
• 6.1 UC實驗模型大鼠制備的合理性研究33-34
• 6.2 實驗指標選擇34-35
• 6.2.1 p38MAPK與UC34
• 6.2.2 IL-1β、IL-4 和UC34-35
• 6.3 實驗結果35
• 6.4 參苓白術散的臨床應用及研究35-37
• 6.5 實驗結果分析37-38
• 結語38-39
• 參考文獻39-42
• 附錄42-47
• 第二部分 文獻綜述47-60
• 綜述一 現(xiàn)代醫(yī)學有關UC的研究進展47-50
• 綜述二 中醫(yī)學對UC的研究進展50-56
• 參考文獻56-60
• 致謝60-61
• 研究生期間發(fā)表的論文61

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 朱丹;張怡;王毅;姬培震;張艷曉;鄒紅;;大鼠潰瘍性結腸炎(脾腎陽虛型)模型實驗研究[J];遼寧中醫(yī)藥大學學報;2015年05期

2 隋楠;田振國;;田振國通灌結合治療慢性非特異性潰瘍性結腸炎經(jīng)驗[J];遼寧中醫(yī)雜志;2014年08期

3 崔龍;;提高外科手術在潰瘍性結腸炎治療中的作用[J];中華結直腸疾病電子雜志;2014年03期

4 桑力軒;高楠;常冰;劉維新;姜敏;;DSS、TNBS、OXZ誘導結腸炎動物模型的對比[J];胃腸病學和肝病學雜志;2013年12期

5 孫娟;王鍵;胡建鵬;李姿慧;葉銘鋼;徐偉;;健脾化濕法對脾虛濕困證潰瘍性結腸炎大鼠血清干擾素-γ和白介素-4含量的影響[J];安徽中醫(yī)學院學報;2013年05期

6 李彥龍;伍春;廖志峰;田旭東;盧雨蓓;李生財;廖挺;陳世旺;張麗娜;劉則鵬;朱瑞海;;薏苡仁水提液對潰瘍性結腸炎大鼠血清IL-6、IL-10的影響[J];遼寧中醫(yī)藥大學學報;2013年09期

7 王倩;田慧;張力;;誘發(fā)潰瘍性結腸炎動物模型化學方法及評價[J];神經(jīng)藥理學報;2013年04期

8 孫娟;王鍵;胡建鵬;李姿慧;葉銘鋼;徐偉;;參苓白術散對脾虛濕困證潰瘍性結腸炎大鼠結腸菌群的影響[J];云南中醫(yī)學院學報;2013年04期

9 毛穎;王秀珍;張U

本文編號：320147