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二穗短柄草BdFUL1和BdFUL2基因功能的初步分析

發(fā)布時間:2017-04-20 21:18

  本文關鍵詞:二穗短柄草BdFUL1和BdFUL2基因功能的初步分析,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。


【摘要】:禾本科植物水稻、玉米和小麥為世界的三大糧食作物,與我們的生活關系密切。合適的開花時間、正常的花發(fā)育是種子形成的基礎,并會進一步影響糧食的產(chǎn)量和質(zhì)量。短柄草,作為新型的禾本科模式植物,植株矮小,易于種植管理,花器官結構與小麥、水稻類似,而且其基因組也比較小,僅272 Mbp。因此,我們可以用二穗短柄草(Brachypodium distachyon)來研究禾本科中糧食作物的生物學問題。FUL(FRUITFULL)基因,為植物的MADS-box基因,參與調(diào)控植物的開花時間、花器官和種子的發(fā)育等,功能表現(xiàn)出不保守性。近幾年來,對FUL基因功能的研究有了一定的進展,特別是在模式植物擬南芥(Arabidopsis thaliana)和水稻(Oryza sativa Linnaeus)中。本論文以二穗短柄草BdFUL1和BdFUL2基因為對象,初步分析了該基因的功能。在此基礎上,又進一步構建了過表達載體和RNA干擾載體,并成功地將BdFUL2的過表達載體通過轉(zhuǎn)基因技術轉(zhuǎn)化到水稻植株中。本文的主要內(nèi)容及結果如下:1.在本實驗室竇艷華克隆分析到BdFUL1的兩個可變剪接體BdFUL1-1和BdFUL1-2的基礎上,又克隆到了BdFUL2基因,運用生物信息學的方法初步分析了BdFUL1和BdFUL2序列和蛋白結構,并構建了系統(tǒng)進化樹。結果顯示,BdFUL1與小麥的WFUL1和水稻的OsMADS14,BdFUL2與小麥的WFUL2和水稻的OsMADS15從屬同一分支,有較近的親緣關系,可能具有相似的功能。2.在本實驗室竇艷華初步分析了BdFUL1-1和BdFUL1-2在不同組織中的表達模式基礎上,又進一步分析了BdFUL1-1和BdFUL1-2在各輪花器官中的表達模式。對BdFUL2基因,分析了其在不同組織和各輪花器官中的表達模式。結果顯示,與BdFUL1不同,BdFUL2在幼根中的表達量并不高,而在成熟莖和花中的表達與BdFUL1的兩個可變剪接類似,都有比較高的表達量。在各輪花器官中的表達分析顯示,BdFUL1的兩個可變剪接BdFUL1-1和BdFUL1-2與BdFUL2類似,均在護穎、外稃中有較高表達,在內(nèi)稃中也有一定量的表達,而在內(nèi)輪的漿片、雄蕊、雌蕊中的表達則較少。3.本文分析了春化和未春化不同的處理條件下BdFUL1-1、BdFUL1-2和BdFUL2的表達量,以及高低溫、旱、鹽脅迫處理和激素處理條件下,BdFUL1-1和BdFUL1-2的表達量。春化和未春化處理分析結果顯示,在經(jīng)春化的抽穗后第一葉中,BdFUL1-1、BdFUL1-2和BdFUL2有高水平表達,且其表達量均高于春化和未春化處理條件下的其他葉和花。高低溫、旱、鹽脅迫處理和激素處理分析結果顯示,高低溫脅迫和激素ABA、6-BA、SA處理條件下,BdFUL1的兩個可變拼接的表達量均有所上升,而且提前終止的BdFUL1-1,其表達量要明顯高于完整的BdFUL1-2;旱脅迫PEG處理條件下,BdFUL1-1表達量下降。4.完成了BdFUL1和BdFUL2的3個過表達載體和4個RNA干擾載體的構建。并將BdFUL2的過表達載體通過轉(zhuǎn)基因技術成功地轉(zhuǎn)化到水稻植株,同時對轉(zhuǎn)基因水稻植株進行了BdFUL2基因表達量的檢測。結果顯示,轉(zhuǎn)基因水稻植株中檢測到BdFUL2基因的表達。以上這些試驗結果,生物信息學分析、表達模式分析、春化和未春化處理分析、高低溫旱鹽脅迫處理和激素處理分析顯示,BdFUL1和BdFUL2基因,在開花前期,受低溫春化作用的影響,在葉片中表達,誘導二穗短柄草開花,并在花器官發(fā)育中調(diào)控外輪花器官的發(fā)育。BdFUL1基因的兩個可變剪接體BdFUL1-1和BdFUL1-2可能在非生物脅迫下產(chǎn)生,其功能與應答環(huán)境脅迫有關。即翻譯不完整蛋白的BdFUL1-1的形成,可幫助二穗短柄草植株適應高低溫脅迫和激素變化。過表達載體和RNA干擾載體的構建,BdFUL2的過表達載體在水稻中的成功轉(zhuǎn)化,為進一步探究BdFUL1和BdFUL2基因調(diào)控植物開花時間和花器官以及種子發(fā)育等生物學功能奠定了基礎。
【關鍵詞】:二穗短柄草 水稻 花發(fā)育 FUL基因
【學位授予單位】:西北農(nóng)林科技大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2016
【分類號】:Q943.2
【目錄】:
  • 摘要5-7
  • Abstract7-12
  • 第一章 文獻綜述12-25
  • 1.1 植物花的發(fā)育13-21
  • 1.1.1 擬南芥、水稻、二穗短柄草和小麥花的結構13-15
  • 1.1.2 開花的決定15-17
  • 1.1.3 花的起始17-18
  • 1.1.4 花器官的發(fā)育18-21
  • 1.2 FUL基因研究進展21-24
  • 1.2.1 MADS-box基因和植物MADS-box基因21-22
  • 1.2.2 水稻和二穗短柄草中MADS-box基因22
  • 1.2.3 FUL基因的研究進展22-24
  • 1.3 本論文研究的目的及意義24-25
  • 第二章 材料與方法25-32
  • 2.1 材料25-26
  • 2.1.1 植物材料25
  • 2.1.2 菌株25
  • 2.1.3 質(zhì)粒載體25-26
  • 2.1.4 試劑、藥品與酶26
  • 2.1.5 儀器26
  • 2.2 實驗方法26-32
  • 2.2.1 生物信息學分析26
  • 2.2.2 表達模式的分析26
  • 2.2.3 未春化及脅迫處理分析26-27
  • 2.2.4 基因的克隆及載體的構建27-29
  • 2.2.5 水稻的轉(zhuǎn)化29-32
  • 第三章 結果與討論32-47
  • 3.1 結果與分析32-44
  • 3.1.1 生物信息學分析32-34
  • 3.1.2 表達特性的分析34-37
  • 3.1.3 基因的克隆及載體的構建37-42
  • 3.1.4 水稻的轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)基因植株的鑒定42-44
  • 3.2 討論44-47
  • 3.2.1 非生物脅迫誘導BdFUL1可變剪接的產(chǎn)生44-45
  • 3.2.2 BdFUL1和BdFUL2基因的功能45-47
  • 參考文獻47-54
  • 附錄54-55
  • 縮略詞表55-56
  • 致謝56-57
  • 作者簡介57

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