【摘要】：目的:杜氏肌營養(yǎng)不良(Ducherme muscular dystrophy,DMD)是由肌營養(yǎng)不良蛋白(dystrophin)基因突變所致的一種伴X染色體連鎖的隱性遺傳病,是一種最嚴(yán)重的、致死性神經(jīng)肌肉疾病,目前尚無有效的治療方法。因此,在對DMD患者及攜帶者行基因診斷,以及高風(fēng)險(xiǎn)胎兒行產(chǎn)前診斷,都顯得尤為重要。本研究采用多重連接依賴性探針擴(kuò)增技術(shù)(MLPA),對DMD家系進(jìn)行基因診斷和產(chǎn)前診斷,探討MLPA在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法:收集廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院產(chǎn)前診斷與遺傳病診斷科就診的3個DMD家系(共10例),采集患兒及其母親的外周血,以及妊娠18-22周的羊水,提取DNA,運(yùn)用MLPA技術(shù)檢測DMD致病基因表達(dá)情況,同時(shí)行羊水細(xì)胞染色體核型分析產(chǎn)前診斷。結(jié)果:3個DMD家系中,家系I先證者屬于DMD外顯子49-50純合缺失,家系I母親屬于DMD外顯子49-50雜合缺失;家系II先證者1與2均屬于DMD外顯子45-47純合缺失,家系II母親屬于DMD外顯子45-47雜合缺失;家系III先證者屬于DMD外顯子45-52純合缺失,家系III母親屬于DMD外顯子45-52雜合缺失。產(chǎn)前診斷結(jié)果顯示:三個家系胎兒染色體核型分析正常,家系I胎兒為男性,DMD外顯子拷貝數(shù)均正常,為正常胎兒;家系II胎兒為男性,DMD外顯子45-47純合缺失,為男性患兒;家系III胎兒為女性,DMD外顯子拷貝數(shù)均正常,為正常胎兒;根據(jù)遺傳咨詢,家系I、III胎兒均正常,可繼續(xù)妊娠,家系II胎兒為男性患者,告知父母胎兒患病風(fēng)險(xiǎn),其父母商量后決定終止妊娠。結(jié)論:MLPA技術(shù)是一種能針對待測核酸靶序列進(jìn)行定性及定量分析的新型技術(shù),能一次性對DMD所有外顯子進(jìn)行重復(fù)和缺失突變的篩查。采用這一技術(shù),使得DMD家系的基因診斷和產(chǎn)前診斷,更為便捷、可信。
【圖文】：

圖 2-1 MLPA 技術(shù)原理示意圖Figure 2-1 the technical principle of MLPAMLPA 試劑盒 (SALSA MLPA PROBEMIX P034-A3/P035-A3)購自荷蘭MRC-Holland 公司，，包含 80 對不同的探針，被分為兩類：P034 和 P035，P034-A3 探針盒包含了檢測 DMD 基因外顯子 1~10，21~30，41~50，61~7探針，P035-A3 探針盒包含了檢測 DMD 基因外顯子 11~20，31~40，51~6070~79 探針，另有一個探針用于代替外顯子 1DP427c。實(shí)驗(yàn)操作步驟按照試劑盒說明書嚴(yán)格進(jìn)行。（1）變性、雜交：稀釋 50-200ngDNA 樣本溶于 5μl 洗脫緩沖液 TE 中在 98℃變性 5min，然后待冷卻至 25℃，再加入雜交混合液（P034-A3/P035-A3 探針混合物和 MLPAbuffer），混勻，95℃，1min，60℃，16h；

XY IIT 46，XY IIIT 46，XX圖 3-1 羊水染色體核型分析Figure 3-1 karyotype analysis of amniotic fluid3.1.2.MLPA 峰圖分析在圖中，橫坐標(biāo)表示基因的長度，縱坐標(biāo)表示信號熒光強(qiáng)度。根據(jù)峰信號的高低來推斷 DMD 基因是重復(fù)突變還是缺失突變。如果某個片段無峰信號則表示純合缺失，低于正常峰值則表示雜合缺失，高于正常峰值則表示重復(fù)。家系 I 先證者屬于DMD外顯子49-50純合缺失，家系I母親屬于DMD外顯子 49-50 雜合缺失，家系 I 胎兒為男性，未檢測出 DMD 外顯子重復(fù)或缺失，如圖 3-2；家系 II 先證者 1 與 2 均屬于 DMD 外顯子 45-47 純合缺失，家系 II 母親屬于 DMD 外顯子 45-47 雜合缺失，家系 II 胎兒為男性，檢測
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R746.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 李西華;趙蕾;胡超平;施億峗;周水珍;王藝;;復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院Duchenne型和Becker型肌營養(yǎng)不良癥數(shù)據(jù)庫的建立[J];中國現(xiàn)代神經(jīng)疾病雜志;2015年05期

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本文編號：2688693