基因工程是生物制藥專業(yè)的核心專業(yè)課,具有較強的理論性和實踐性�；蚬こ虒嶒灲虒W(xué)是基因工程教學(xué)的核心環(huán)節(jié),但目前普遍存在實驗內(nèi)容陳舊、教學(xué)方法枯燥、單元銜接散亂、演示性實驗偏多等缺點,極大地降低了基因工程實驗教學(xué)的效果。為了提高學(xué)生的實驗技能和創(chuàng)新能力,我們提出了整合型設(shè)計性基因工程綜合大實驗的教學(xué)模式。以重組人β-catenin原核表達和分離純化為核心內(nèi)容,從實驗準(zhǔn)備、實驗設(shè)計、實驗操作和實驗分析等方面,對基因工程實驗教學(xué)模式進行了改革和探索。實踐證明,整合型設(shè)計性基因工程綜合大實驗建立了從"分子設(shè)計到產(chǎn)品研發(fā)"的自由實踐教學(xué)模式,顯著提高了基因工程的教學(xué)質(zhì)量,提高了學(xué)生的實驗技能和綜合素質(zhì),是培養(yǎng)學(xué)生科研思維和創(chuàng)新能力的有效途徑。本文探索的整合型設(shè)計性基因工程綜合大實驗具有良好的推廣性和示范性,可為基因工程教學(xué)提供有益的參考。

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【部分圖文】：

圖1菌種復(fù)壯

由于E.coliDH5α是克隆菌株，不能表達β-catenin，因此需要將上述鑒定正確的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到表達宿主菌E.coliRosetta(DE3)中，以IPTG誘導(dǎo)β-catenin表達。在第三部分實驗中，各組在基于冷CaCl2化學(xué)轉(zhuǎn)化法制備的E.coliRosetta(....

圖3重組質(zhì)粒的感受態(tài)細胞轉(zhuǎn)化

各組繼續(xù)挑取經(jīng)卡那霉素抗性篩選的單菌落接種于LB液體培養(yǎng)基中震蕩培養(yǎng)，以IPTG誘導(dǎo)β-catenin表達，進行第四部分實驗內(nèi)容。各組的誘導(dǎo)菌株與陰性對照組相比，在預(yù)期相對分子質(zhì)量位置(77000)均有明顯的蛋白質(zhì)表達條帶呈現(xiàn)(圖4A)，這說明β-catenin誘導(dǎo)表達成功。在....

圖2重組質(zhì)粒的鑒定

圖3重組質(zhì)粒的感受態(tài)細胞轉(zhuǎn)化重組蛋白質(zhì)在大腸桿菌中的表達有胞內(nèi)可溶表達和包涵體表達兩種主要形式，但可溶表達形式的蛋白質(zhì)具有更好的生物學(xué)活性且方便純化。為了鑒定β-catenin的表達形式，在第五部分實驗中，各組獨自進行了表達形式鑒定實驗。綜合分析各組的數(shù)據(jù)，β-catenin雖....

圖4β-catenin原核表達與可溶性表達分析

獨立提交實驗報告是整合型設(shè)計性基因工程綜合大實驗教學(xué)的核心教學(xué)環(huán)節(jié)，是培養(yǎng)學(xué)生科學(xué)思維和科研素質(zhì)的重要手段[7-8]。綜合大實驗報告主要由六個相互銜接的基因工程核心實驗內(nèi)容組成，每個實驗內(nèi)容均由各組學(xué)生獨立完成了實驗準(zhǔn)備、實驗設(shè)計、實驗結(jié)果的分析與討論，按照論文格式獨立撰寫。對于....

本文編號：3945797