本文關(guān)鍵詞：miR-153和miR-520b對(duì)腫瘤細(xì)胞自噬的調(diào)控機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 自噬 miR-153 miR-520b 食管鱗癌 乳腺癌

【摘要】：自噬,又稱Ⅱ型程序性細(xì)胞死亡,是細(xì)胞正常的生命活動(dòng)之一,細(xì)胞在正常狀態(tài)下會(huì)保持較低的自噬水平,以此來作為一種細(xì)胞生存生長的保護(hù)機(jī)制,但是當(dāng)細(xì)胞受到來自內(nèi)外某種特定刺激時(shí),將發(fā)生異常自噬,microRNA作為一種非編碼RNA，，通過特異性結(jié)合靶基因的3’-UTR區(qū)域,抑制靶基因mRNA水平和翻譯。然而,至今仍有大量自噬相關(guān)microRNA有待發(fā)掘。本課題發(fā)現(xiàn)了兩種microRNA可以通過特異調(diào)控靶基因表達(dá),影響腫瘤細(xì)胞自噬水平,進(jìn)而影響細(xì)胞增殖、遷移、侵襲等生物學(xué)表型。采用篩選加驗(yàn)證的方法,前期工作首先是通過實(shí)驗(yàn)篩選出兩種理想的細(xì)胞模型,即確定研究的腫瘤細(xì)胞系,接著探索這兩種細(xì)胞模型發(fā)生自噬的最佳誘導(dǎo)條件；篩選環(huán)節(jié)是將所有未發(fā)表過的microRNA進(jìn)行篩選,在初步篩選出研究目標(biāo)后,工作重點(diǎn)就是對(duì)篩選結(jié)果進(jìn)行全方面多層面的驗(yàn)證。此外,還通過生物信息學(xué)的方法,對(duì)目標(biāo)microRNA的靶基因進(jìn)行預(yù)測,并采用實(shí)時(shí)定量PCR以及Western blot方法對(duì)預(yù)測結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證,從而完善了該調(diào)控機(jī)制。本研究首次發(fā)現(xiàn),miR-153和miR-520b均可顯著促進(jìn)食管癌KYSE450細(xì)胞和乳腺癌MCF-7細(xì)胞自噬；其中miR-520b是與癌基因CDCA7靶向結(jié)合使其沉默,且生物信息學(xué)提示,CDCA7與自噬相關(guān)基因CASP2互為ceRNA,CASP2可以通過競爭性結(jié)合miR-520b來調(diào)節(jié)CDCA7的表達(dá)。文獻(xiàn)報(bào)道,自噬相關(guān)基因CASP2的消耗會(huì)引起細(xì)胞自噬水平升高;故高表達(dá)miR-520b可以促進(jìn)細(xì)胞自噬。與此同時(shí),體外細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,miR-153和miR-520b可以顯著抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲�？偠灾�,這些結(jié)果表明miR-153和miR-520b是一種腫瘤生物治療的潛在靶分子。
【關(guān)鍵詞】：自噬 miR-153 miR-520b 食管鱗癌 乳腺癌
【學(xué)位授予單位】：北京化工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R73-3
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-16
• 第一章 緒論16-24
• 1.1 自噬概述16-19
• 1.1.1 自噬簡介16-17
• 1.1.2 自噬的檢測方法17-18
• 1.1.3 microRNA與腫瘤細(xì)胞自噬的關(guān)系18-19
• 1.2 microRNA簡介19
• 1.3 生物信息學(xué)19-21
• 1.3.1 生物信息學(xué)簡介19-20
• 1.3.2 常用的生物信息學(xué)軟件20-21
• 1.4 立項(xiàng)背景與研究意義21
• 1.5 本論文的主要研究內(nèi)容21-24
• 第二章 miR-153和miR-520b促進(jìn)腫瘤細(xì)胞自噬研究24-56
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料24-29
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑24-26
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備26-28
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)耗材28
• 2.1.4 相關(guān)溶液的配制28-29
• 2.1.5 實(shí)驗(yàn)對(duì)象29
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法29-38
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)29
• 2.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染29-30
• 2.2.3 蛋白樣品的制備30-31
• 2.2.4 Western blot實(shí)驗(yàn)31-33
• 2.2.5 RNA樣品的制備33-36
• 2.2.6 RT-qPCR實(shí)驗(yàn)36-38
• 2.2.7 激光共聚焦成像實(shí)驗(yàn)38
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論38-44
• 2.3.1 篩選研究對(duì)象38-39
• 2.3.2 蛋白質(zhì)水平驗(yàn)證39-42
• 2.3.3 細(xì)胞水平驗(yàn)證42-44
• 2.4 miR-153和miR-520b靶基因的預(yù)測及實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證44-51
• 2.4.1 對(duì)miR-520b靶基因的預(yù)測44-45
• 2.4.2 對(duì)miR-520b預(yù)測靶基因的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證45-49
• 2.4.3 對(duì)miR-153靶基因的預(yù)測49
• 2.4.4 對(duì)miR-153預(yù)測靶基因的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證49-51
• 2.5 注意事項(xiàng)51-53
• 2.5.1 細(xì)胞培養(yǎng)過程中的注意事項(xiàng)51-52
• 2.5.2 細(xì)胞中RNA提取過程中注意事項(xiàng)52
• 2.5.3 Western blot實(shí)驗(yàn)過程中的注意事項(xiàng)52-53
• 2.6 本章小結(jié)53-56
• 第三章 miR-153和520b在腫瘤中的細(xì)胞生物學(xué)功能研究56-68
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料56-58
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑56
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備56-57
• 3.1.3 實(shí)驗(yàn)耗材57-58
• 3.1.4 相關(guān)溶液的配制58
• 3.1.5 實(shí)驗(yàn)對(duì)象58
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果58-66
• 3.2.1 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)58-63
• 3.2.2 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)63-66
• 3.3 注意事項(xiàng)66
• 3.4 本章小結(jié)66-68
• 第四章 結(jié)論、創(chuàng)新點(diǎn)與展望68-70
• 4.1 本論文的結(jié)論68
• 4.2 本論文的創(chuàng)新點(diǎn)68-69
• 4.3 展望69-70
• 參考文獻(xiàn)70-74
• 致謝74-76
• 研究成果及學(xué)術(shù)論文76-78
• 作者和導(dǎo)師簡介78-79
• 碩士研究生學(xué)位論文答辯委員會(huì)決議書79-80

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