本文關(guān)鍵詞：5-Aza調(diào)控單核細(xì)胞白血病細(xì)胞增殖、分化和遷移的機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 5-Aza THP-1細(xì)胞 CCL2 CCR2 遷移 分化 增殖

【摘要】：背景與目的:5-Aza(5-氮雜胞嘧啶核苷)是一種甲基化抑制劑,為胞嘧啶核苷類似物,目前5-Aza已被美國(guó)FDA批準(zhǔn)用于MDS、急性白血病等腫瘤的臨床治療,其抗腫瘤的主要機(jī)制是去甲基化作用,激活因高度甲基化而沉默的基因,包括腫瘤抑制基因、轉(zhuǎn)錄因子、細(xì)胞周期抑制劑基因等。盡管5-Aza單獨(dú)應(yīng)用或與其它藥物聯(lián)用都展示了較好的臨床療效,但仍然發(fā)現(xiàn)其存在耐藥問(wèn)題。目前的研究認(rèn)為,導(dǎo)致耐藥的關(guān)鍵因素可能是5-Aza上調(diào)了與細(xì)胞遷移和侵襲相關(guān)的基因表達(dá),但具體的分子機(jī)制和調(diào)控過(guò)程仍然報(bào)道較少。本課題旨在研究5-Aza影響人急性單核細(xì)胞白血病THP-1細(xì)胞遷移、分化、增殖的可能機(jī)制,并探究可以解決這種不利影響的有效方案。方法:1.RT-PCR檢測(cè)5-Aza藥物刺激細(xì)胞后CCL2及CCR2表達(dá)的變化;利用ELISA法檢測(cè)經(jīng)5-Aza刺激后,細(xì)胞分泌的CCL2含量的變化;利用Trans Well實(shí)驗(yàn),檢測(cè)經(jīng)5-Aza、趨化因子受體阻斷劑及細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶阻斷劑處理細(xì)胞后,細(xì)胞的遷移率的改變;Western blot實(shí)驗(yàn),經(jīng)5-Aza刺激后的THP-1細(xì)胞中CCR2、p-ERK、p-AKT、ERK、AKT表達(dá)的變化。2.流式細(xì)胞儀檢測(cè)THP-1細(xì)胞經(jīng)5-Aza刺激后CD14+細(xì)胞比例;瑞氏-吉姆薩染色觀察THP-1細(xì)胞經(jīng)5-Aza刺激后,形態(tài)的改變。3.CCK-8實(shí)驗(yàn)和Brd U染色檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。結(jié)果:1.THP-1細(xì)胞經(jīng)5-Aza處理后,CCL2及CCR2基因表達(dá)上調(diào),CCR2蛋白表達(dá)上調(diào),細(xì)胞遷移率增加;5-Aza、CCR2抑制劑聯(lián)合用藥組,細(xì)胞遷移率降低;5-Aza、ERK阻斷劑聯(lián)合用藥組,細(xì)胞遷移率降低;5-Aza處理組,細(xì)胞P-ERK表達(dá)水平升高,ERK、P-AKT、AKT無(wú)明顯改變;2.流式細(xì)胞儀CD14檢測(cè),藥物處理組CD14+細(xì)胞比例約為未加藥組的1.3倍;形態(tài)學(xué)觀察:藥物處理組細(xì)胞出現(xiàn)向巨噬細(xì)胞變化的改變。3.在CCK-8試驗(yàn)顯示,不同濃度的藥物處理組,細(xì)胞增殖率逐漸減低;藥物處理組Brd U含量比例降低。結(jié)論:5-Aza引起CCL2、CCR2基因的表達(dá)上調(diào),引起P-ERK表達(dá)升高;5-Aza通過(guò)CCL2-CCR2-ERK信號(hào)通路的激活促進(jìn)THP-1細(xì)胞的遷移;5-Aza促進(jìn)THP-1細(xì)胞的分化;抑制THP-1細(xì)胞的增殖。
【關(guān)鍵詞】：5-Aza THP-1細(xì)胞 CCL2 CCR2 遷移 分化 增殖
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R733.7
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 縮略詞表8-11
• 第一章 緒論11-21
• 1 腫瘤細(xì)胞與趨化因子11
• 2 趨化因子CCL2與CCR2的生物學(xué)特性11-13
• 3 CCL2-CCR2信號(hào)在腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移過(guò)程中的作用13-15
• 4 CCL2-CCR2信號(hào)影響腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移性的臨床/實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)15-19
• 4.1 乳腺癌15-16
• 4.2 大腸癌16-17
• 4.3 前列腺癌17-18
• 4.4 其他癌癥18-19
• 5 CCL2-CCR2調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的其他表現(xiàn)19-21
• 第二章 材料與方法21-33
• 1 實(shí)驗(yàn)材料21-22
• 1.1 主要試劑21-22
• 1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器22
• 1.3 細(xì)胞系22
• 2 實(shí)驗(yàn)方法22-33
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)22-23
• 2.2 5-Aza影響THP-1 細(xì)胞遷移的機(jī)制研究23-31
• 2.3 5-Aza對(duì)THP-1 細(xì)胞分化的影響31-32
• 2.4 5-Aza對(duì)THP-1 細(xì)胞增殖的影響32-33
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果33-41
• 1 5-Aza對(duì)影響THP-1 細(xì)胞遷移的機(jī)制研究33-38
• 1.1 5-Aza通過(guò)調(diào)節(jié)CCL2-CCR2信號(hào)促進(jìn)THP-1 細(xì)胞的遷移33-36
• 1.2 CCL2-CCR2信號(hào)改變、ERK磷酸化在 5-Aza促進(jìn)THP-1細(xì)胞的遷移過(guò)程中的作用36-38
• 2 5-Aza對(duì)THP-1 細(xì)胞分化的影響38-39
• 2.1 流式細(xì)胞儀法檢測(cè)CD1438
• 2.2 5-Aza處理后細(xì)胞形態(tài)變化38-39
• 3 5-Aza對(duì)THP-1 細(xì)胞增殖的影響39-41
• 3.1 CCK-8 檢測(cè)細(xì)胞增殖39
• 3.2 BrdU實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖39-41
• 第四章 討論41-45
• 第五章 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-56
• 致謝56

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