本文關(guān)鍵詞：靶向調(diào)控Pin1的microRNAs篩選

  更多相關(guān)文章： 肝癌細(xì)胞 靶向調(diào)控 miR-140-5p

【摘要】：研究目的:研究靶向調(diào)控Pin1的mi RNAs,探討其在肝癌發(fā)生發(fā)展中所起的作用,為肝癌的診斷和治療提供新的思路。研究方法:(1)應(yīng)用Western blot和Q-PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)分別從蛋白水平和m RNA水平檢測(cè)不同肝癌細(xì)胞系Hep G2,Huh7和Hep3B中Pin1的表達(dá)情況。(2)利用mi RNA靶基因預(yù)測(cè)軟件數(shù)據(jù)庫篩選出靶向調(diào)控Pin1的mi RNAs,然后通過雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn),Western blot實(shí)驗(yàn),以及Q-PCR實(shí)驗(yàn)進(jìn)行mi RNAs靶標(biāo)驗(yàn)證。研究結(jié)果:(1)與正常的肝細(xì)胞LO2相比,在肝癌細(xì)胞系Hep G2,Huh7及Hep3B中,Pin1蛋白高表達(dá),而Pin1 m RNA在Hep G2細(xì)胞中低表達(dá),在Huh7和Hep3B細(xì)胞中則是高表達(dá)的。(2)利用mi RNA靶基因預(yù)測(cè)軟件篩選出了4個(gè)mi RNAs(mi R-140-5p,mi R-429,mi R-200b,mi R-200c)。雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)和Western blot實(shí)驗(yàn)均顯示mi R-140-5p作用后,螢火蟲熒光素酶活性及Pin1蛋白下調(diào)最明顯。實(shí)驗(yàn)結(jié)論:(1)與正常肝細(xì)胞相比,Pin1蛋白在不同肝癌細(xì)胞系Hep G2,Huh7和Hep3B中高表達(dá);Pin1 m RNA在Hep G2細(xì)胞中低表達(dá),而在Huh7和Hep3B細(xì)胞中高表達(dá)。(2)mi R-140-5p是Pin1基因的靶標(biāo)mi RNA。
【關(guān)鍵詞】：肝癌細(xì)胞 靶向調(diào)控 miR-140-5p
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 英文縮略詞4-6
• 中文摘要6-7
• 英文摘要7-8
• 前言8-13
• 第一章 Pin1 在不同肝癌細(xì)胞系中的表達(dá)13-27
• 材料和方法13-22
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料和儀器13-16
• 1.1 主要試劑及其來源13-14
• 1.2 主要設(shè)備儀器及其來源14-15
• 1.3 細(xì)胞株15
• 1.4 引物15
• 1.5 試劑配制15-16
• 2. 方法16-21
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)16-17
• 2.2 細(xì)胞總蛋白的提取及濃度測(cè)定17-18
• 2.3 Western Blot分析18-19
• 2.4 Real-time PCR實(shí)驗(yàn)19-21
• 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析21-22
• 結(jié)果22-24
• 1. Pin1 蛋白在不同肝癌細(xì)胞系的相對(duì)表達(dá)水平.22
• 2. Pin1 mRNA在肝癌細(xì)胞株中的相對(duì)表達(dá)水平22-24
• 2.1 RNA樣品鑒定22-24
• 2.2 Real-time PCR反應(yīng)條件及特異性判定24
• 2.3 Real-time PCR結(jié)果分析24
• 討論24-27
• 第二章 靶向調(diào)控Pin1 的miRNA篩選及驗(yàn)證27-48
• 材料和方法27-39
• 1. 材料27-31
• 1.1 主要試劑及其來源27-28
• 1.2 主要設(shè)備儀器及其來源28-29
• 1.3 細(xì)胞株29
• 1.4 引物29-30
• 1.5 試劑配制30-31
• 2. 方法31-39
• 2.1 靶基因Pin1的生物信息學(xué)預(yù)測(cè)31
• 2.2 細(xì)胞培養(yǎng)31
• 2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染31-32
• 2.4 細(xì)胞總蛋白提取及濃度測(cè)定32
• 2.5 雙熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒構(gòu)建32-38
• 2.6 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)38
• 2.7 Western blot驗(yàn)證38-39
• 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析39
• 結(jié)果39-45
• 1. 靶向調(diào)控Pin1 的miRNAs的生物信息學(xué)預(yù)測(cè)39-40
• 2. 雙熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒的構(gòu)建40-42
• 2.1 pmir GLO-Pin1-3’UTR-wt質(zhì)粒的構(gòu)建40-41
• 2.2 pmir GLO-Pin1-3’UTR-mut質(zhì)粒的構(gòu)建41-42
• 3. 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)42
• 4. Western Blot實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證42-43
• 5. 雙熒光素酶報(bào)告基因突變回復(fù)實(shí)驗(yàn)43-45
• 討論45-48
• 總結(jié)48-49
• 參考文獻(xiàn)49-60
• 致謝60-61
• 綜述61-72
• 參考文獻(xiàn)66-72

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