發(fā)布時間：2017-09-01 21:29

  本文關鍵詞：腫瘤細胞中YIPF2調控TNFRSF10B的分子機制

  更多相關文章： YIPF2 TNFRSF10B RAB GTPases 膜泡運輸 細胞凋亡

【摘要】：研究目的TRAIL受體,又稱為死亡受體,在細胞外源性凋亡通路中發(fā)揮重要作用。TRAIL-R2,又稱為TNFRSF10B或DR5,被激活后向下游CASP級聯反應傳遞凋亡信號。TNFRSF10B向質膜的轉運是其發(fā)揮功能所必需的。YIPF2(YIP1 Protein Family member 2)屬于YIP1家族蛋白,主要分布于內質網和高爾基體,有可能在膜泡運輸中發(fā)揮作用。我們在前期研究中發(fā)現,YIPF2的轉錄水平在化療藥物處理的人非小細胞肺癌細胞中明顯上調。同時,這些處理誘導TNFRSF10B上調并引起細胞凋亡。本課題的研究目的是,探究YIPF2在TNFRSF10B于細胞內組分間運輸中的作用以及對化療藥物誘導的細胞凋亡的調控作用。研究方法1.使用Western Blot檢測YIPF2和TNFRSF10B的表達水平在化療藥物處理的人非小細胞肺癌細胞內的變化。2.在人非小細胞肺癌細胞中使用基因沉默或質粒轉染敲低或過表達YIPF2后,使用化療藥物pemetrexed(PEM)進行處理。使用Western Blot檢測TNFRSF10B的表達水平以及下游CASP級聯反應的活化,并使用流式細胞術檢測細胞凋亡。使用熒光共聚焦顯微鏡和流式細胞術檢測TNFRSF10B在質膜上的分布。3.使用蛋白質免疫共沉淀實驗檢測YIPF2與TNFRSF10B的結合情況。4.在人非小細胞肺癌細胞中使用基因沉默或質粒轉染敲低或過表達YIPF2后,進行和2.中相同的處理和實驗,尋找在YIPF2調控TNFRSF10B的膜泡運輸中發(fā)揮作用的RAB蛋白。5.使用蛋白質免疫共沉淀實驗確定YIPF2-TNFRSF10B復合物中所包含的RAB蛋白。實驗結果1.YIPF2在化療藥物處理的人非小細胞肺癌細胞中的表達增加,呈濃度和時間依賴性,并早于TNFRSF10B的上調。2.在人非小細胞肺癌細胞中敲低或過表達YIPF2,分別減輕或增強化療藥物誘導的TNFRSF10B上調和由其導致的細胞凋亡。3. YIPF2與TNFRSF10B在人非小細胞肺癌細胞內結合并在胞質共定位。4. RAB8與YIPF2-TNFRSF10B復合物結合并被YIPF2負調控。5.RAB8負調控YIPF2和TNFRSF10B的表達水平、TfNFRSF10B在質膜上的分布以及化療藥物誘導的細胞凋亡。6. YIPF2正調控RAB18, RAB18也正調控TTNFRSF10B的表達向質膜的轉運。7. YIPF2負調控RAB40c, RAB40c也負調控YIPF2和TNFRSF10B的表達。實驗結論1. YIPF2調控TNFRSF10B的表達和膜泡運輸。2. YIPF2通過調控TNFRSF10B調控腫瘤細胞凋亡。3. RAB8、RAB18和RAB40c參與到YIPF2對TNFRSF10B調控中。
【關鍵詞】：YIPF2 TNFRSF10B RAB GTPases 膜泡運輸 細胞凋亡
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R730.2
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 符號說明11-14
• 前言14-62
• 1 課題研究背景14-26
• 1.1 癌癥簡介14
• 1.2 靶向治療14-15
• 1.3 細胞凋亡15-26
• 2 腫瘤壞死因子受體超家族10B-TNFRSF10B(DR5)26-28
• 2.1 TNFRSF10B簡介26-27
• 2.2 TNFRSF10B作用機制27
• 2.3 TNFRSF10B調控方式27-28
• 2.4 TNFRSF10B的膜泡運輸28
• 3 YPFF228-52
• 3.1 YIPF2簡介28-29
• 3.2 YIP1(Ypt1-Interacting Protein 1)蛋白29-31
• 3.3 YIP3蛋白31-34
• 3.4 其他的GDF蛋白34-45
• 3.5 哺乳動物細胞中YIP1家族蛋白的主要特征、分布和功能45-52
• 4 RAB蛋白52-62
• 4.1 RAB蛋白簡介52
• 4.2 RAB蛋白的結構52-53
• 4.3 RAB蛋白的調控因子53-55
• 4.4 RAB蛋白的結合蛋白55-57
• 4.5 RAB蛋白級聯反應57-59
• 4.6 本課題中所研究的RAB蛋白59-62
• 實驗材料與方法62-80
• 1 實驗材料62-67
• 1.1 實驗用細胞株及培養(yǎng)材料62
• 1.2 實驗抗體62
• 1.3 siRNA與質粒62-63
• 1.4 溶液和試劑63-67
• 2 儀器設備67-68
• 3 實驗方法68-80
• 3.1 細胞培養(yǎng)68-69
• 3.2 基因克隆69-72
• 3.3 siRNA轉染72
• 3.4 質粒轉染72
• 3.5 SRB實驗72-73
• 3.6 Western Blot73-76
• 3.7 免疫共沉淀實驗76-77
• 3.8 細胞爬片的準備77-78
• 3.9 流式檢測蛋白在細胞表面的分布78-79
• 3.10 統(tǒng)計學分析79-80
• 實驗結果80-106
• 1 化療藥物誘導YIPF2表達上調80-83
• 1.1 化療藥物誘導YIPF2表達上調80-82
• 1.2 YIPF2分布在胞質及質膜上82-83
• 2 YIPF2調控TNFRSF10B的表達和分布83-88
• 2.1 YIPF2促進TNFRSF10B表達上調83-85
• 2.2 YIPF2促進TNFRSF10B在質膜上的分布85-88
• 3 YIPF2通過調控TNFRSF10B影響人非小細胞肺癌細胞凋亡88-89
• 4 YIPF2可以與TNFRSF10B結合并在細胞內共定位89-93
• 4.1 YIPF2可以與TNFRSF10B結合89-91
• 4.2 YIPF2與TNFRSF10B在細胞內共定位91-93
• 5 YIPF2與TNFRSF10B和RAB蛋白的相互作用93-104
• 5.1 YIPF2與TNFRSF10B、RAB8相互結合93-95
• 5.2 RAB8負調控YIPF2和TNFRSF10B95-100
• 5.3 YIPF2通過調控RAB18調控TNFRSF10B100-103
• 5.4 YIPF2通過調控RAB40c調控TNFRSF10B的表達103-104
• 6 結果總結104-106
• 討論106-112
• 參考文獻112-122
• 致謝122-124
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術論文124-125
• 學位論文評閱及答辯情況表125

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