本文關(guān)鍵詞：腫瘤細(xì)胞中YIPF2調(diào)控TNFRSF10B的分子機(jī)制

  更多相關(guān)文章： YIPF2 TNFRSF10B RAB GTPases 膜泡運(yùn)輸 細(xì)胞凋亡

【摘要】：研究目的TRAIL受體,又稱為死亡受體,在細(xì)胞外源性凋亡通路中發(fā)揮重要作用。TRAIL-R2,又稱為TNFRSF10B或DR5,被激活后向下游CASP級(jí)聯(lián)反應(yīng)傳遞凋亡信號(hào)。TNFRSF10B向質(zhì)膜的轉(zhuǎn)運(yùn)是其發(fā)揮功能所必需的。YIPF2(YIP1 Protein Family member 2)屬于YIP1家族蛋白,主要分布于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體,有可能在膜泡運(yùn)輸中發(fā)揮作用。我們?cè)谇捌谘芯恐邪l(fā)現(xiàn),YIPF2的轉(zhuǎn)錄水平在化療藥物處理的人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中明顯上調(diào)。同時(shí),這些處理誘導(dǎo)TNFRSF10B上調(diào)并引起細(xì)胞凋亡。本課題的研究目的是,探究YIPF2在TNFRSF10B于細(xì)胞內(nèi)組分間運(yùn)輸中的作用以及對(duì)化療藥物誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的調(diào)控作用。研究方法1.使用Western Blot檢測(cè)YIPF2和TNFRSF10B的表達(dá)水平在化療藥物處理的人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞內(nèi)的變化。2.在人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中使用基因沉默或質(zhì)粒轉(zhuǎn)染敲低或過(guò)表達(dá)YIPF2后,使用化療藥物pemetrexed(PEM)進(jìn)行處理。使用Western Blot檢測(cè)TNFRSF10B的表達(dá)水平以及下游CASP級(jí)聯(lián)反應(yīng)的活化,并使用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡。使用熒光共聚焦顯微鏡和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)TNFRSF10B在質(zhì)膜上的分布。3.使用蛋白質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)檢測(cè)YIPF2與TNFRSF10B的結(jié)合情況。4.在人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中使用基因沉默或質(zhì)粒轉(zhuǎn)染敲低或過(guò)表達(dá)YIPF2后,進(jìn)行和2.中相同的處理和實(shí)驗(yàn),尋找在YIPF2調(diào)控TNFRSF10B的膜泡運(yùn)輸中發(fā)揮作用的RAB蛋白。5.使用蛋白質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)確定YIPF2-TNFRSF10B復(fù)合物中所包含的RAB蛋白。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.YIPF2在化療藥物處理的人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中的表達(dá)增加,呈濃度和時(shí)間依賴性,并早于TNFRSF10B的上調(diào)。2.在人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中敲低或過(guò)表達(dá)YIPF2,分別減輕或增強(qiáng)化療藥物誘導(dǎo)的TNFRSF10B上調(diào)和由其導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡。3. YIPF2與TNFRSF10B在人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞內(nèi)結(jié)合并在胞質(zhì)共定位。4. RAB8與YIPF2-TNFRSF10B復(fù)合物結(jié)合并被YIPF2負(fù)調(diào)控。5.RAB8負(fù)調(diào)控YIPF2和TNFRSF10B的表達(dá)水平、TfNFRSF10B在質(zhì)膜上的分布以及化療藥物誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。6. YIPF2正調(diào)控RAB18, RAB18也正調(diào)控TTNFRSF10B的表達(dá)向質(zhì)膜的轉(zhuǎn)運(yùn)。7. YIPF2負(fù)調(diào)控RAB40c, RAB40c也負(fù)調(diào)控YIPF2和TNFRSF10B的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)論1. YIPF2調(diào)控TNFRSF10B的表達(dá)和膜泡運(yùn)輸。2. YIPF2通過(guò)調(diào)控TNFRSF10B調(diào)控腫瘤細(xì)胞凋亡。3. RAB8、RAB18和RAB40c參與到Y(jié)IPF2對(duì)TNFRSF10B調(diào)控中。
【關(guān)鍵詞】：YIPF2 TNFRSF10B RAB GTPases 膜泡運(yùn)輸 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R730.2
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 符號(hào)說(shuō)明11-14
• 前言14-62
• 1 課題研究背景14-26
• 1.1 癌癥簡(jiǎn)介14
• 1.2 靶向治療14-15
• 1.3 細(xì)胞凋亡15-26
• 2 腫瘤壞死因子受體超家族10B-TNFRSF10B(DR5)26-28
• 2.1 TNFRSF10B簡(jiǎn)介26-27
• 2.2 TNFRSF10B作用機(jī)制27
• 2.3 TNFRSF10B調(diào)控方式27-28
• 2.4 TNFRSF10B的膜泡運(yùn)輸28
• 3 YPFF228-52
• 3.1 YIPF2簡(jiǎn)介28-29
• 3.2 YIP1(Ypt1-Interacting Protein 1)蛋白29-31
• 3.3 YIP3蛋白31-34
• 3.4 其他的GDF蛋白34-45
• 3.5 哺乳動(dòng)物細(xì)胞中YIP1家族蛋白的主要特征、分布和功能45-52
• 4 RAB蛋白52-62
• 4.1 RAB蛋白簡(jiǎn)介52
• 4.2 RAB蛋白的結(jié)構(gòu)52-53
• 4.3 RAB蛋白的調(diào)控因子53-55
• 4.4 RAB蛋白的結(jié)合蛋白55-57
• 4.5 RAB蛋白級(jí)聯(lián)反應(yīng)57-59
• 4.6 本課題中所研究的RAB蛋白59-62
• 實(shí)驗(yàn)材料與方法62-80
• 1 實(shí)驗(yàn)材料62-67
• 1.1 實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞株及培養(yǎng)材料62
• 1.2 實(shí)驗(yàn)抗體62
• 1.3 siRNA與質(zhì)粒62-63
• 1.4 溶液和試劑63-67
• 2 儀器設(shè)備67-68
• 3 實(shí)驗(yàn)方法68-80
• 3.1 細(xì)胞培養(yǎng)68-69
• 3.2 基因克隆69-72
• 3.3 siRNA轉(zhuǎn)染72
• 3.4 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染72
• 3.5 SRB實(shí)驗(yàn)72-73
• 3.6 Western Blot73-76
• 3.7 免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)76-77
• 3.8 細(xì)胞爬片的準(zhǔn)備77-78
• 3.9 流式檢測(cè)蛋白在細(xì)胞表面的分布78-79
• 3.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析79-80
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果80-106
• 1 化療藥物誘導(dǎo)YIPF2表達(dá)上調(diào)80-83
• 1.1 化療藥物誘導(dǎo)YIPF2表達(dá)上調(diào)80-82
• 1.2 YIPF2分布在胞質(zhì)及質(zhì)膜上82-83
• 2 YIPF2調(diào)控TNFRSF10B的表達(dá)和分布83-88
• 2.1 YIPF2促進(jìn)TNFRSF10B表達(dá)上調(diào)83-85
• 2.2 YIPF2促進(jìn)TNFRSF10B在質(zhì)膜上的分布85-88
• 3 YIPF2通過(guò)調(diào)控TNFRSF10B影響人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞凋亡88-89
• 4 YIPF2可以與TNFRSF10B結(jié)合并在細(xì)胞內(nèi)共定位89-93
• 4.1 YIPF2可以與TNFRSF10B結(jié)合89-91
• 4.2 YIPF2與TNFRSF10B在細(xì)胞內(nèi)共定位91-93
• 5 YIPF2與TNFRSF10B和RAB蛋白的相互作用93-104
• 5.1 YIPF2與TNFRSF10B、RAB8相互結(jié)合93-95
• 5.2 RAB8負(fù)調(diào)控YIPF2和TNFRSF10B95-100
• 5.3 YIPF2通過(guò)調(diào)控RAB18調(diào)控TNFRSF10B100-103
• 5.4 YIPF2通過(guò)調(diào)控RAB40c調(diào)控TNFRSF10B的表達(dá)103-104
• 6 結(jié)果總結(jié)104-106
• 討論106-112
• 參考文獻(xiàn)112-122
• 致謝122-124
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文124-125
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表125

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