本文關(guān)鍵詞：小白菊內(nèi)酯增強人肺腺癌A549細(xì)胞對順鉑敏感性的實驗研究

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【摘要】：目的:肺惡性腫瘤無論是發(fā)病率還是致死率都居高不下,傳統(tǒng)化學(xué)療法通常作為晚期肺惡性腫瘤的主要治療手段,然后化療會隨著治療的推移而產(chǎn)生耐藥,且常常伴有多次化療后累積的毒副反應(yīng),因此尋找能夠增強化療藥物敏感性的新藥,這對于減少化療藥物的使用劑量從而降低化療藥物的毒副反應(yīng)具有重要的臨床價值。本實驗研究將從分子生物學(xué)水平,評價小白菊內(nèi)酯是否具有增強肺腺癌A549細(xì)胞對順鉑的敏感性,評價小白菊內(nèi)酯聯(lián)合順鉑對人肺腺癌A549細(xì)胞的協(xié)同增敏作用。方法:選取對數(shù)增長期人肺腺癌A549細(xì)胞經(jīng)不同劑量小白菊內(nèi)酯和(或)順鉑后,以MTT法檢測各組A549細(xì)胞活力、流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡,通過q值的比較得出二者是否具有協(xié)同抑制增殖、誘導(dǎo)凋亡作用;通過流式細(xì)胞術(shù)檢測各組細(xì)胞周期情況及RT-PCR法檢測凋亡抑制基因Bcl-2和凋亡基因Bax的mRNA表達情況,探討小白菊內(nèi)酯增敏順鉑的可能機制。結(jié)果:MTT結(jié)果顯示:小白菊內(nèi)酯濃度在10μmol/L以下,具有促進A549細(xì)胞增殖作用,小白菊內(nèi)酯濃度高于10μmol/L具有抑制人肺腺癌A549細(xì)胞增殖的作用;大劑量(20μmol/L)小白菊內(nèi)酯與順鉑聯(lián)用能夠明顯抑制人肺腺癌A549細(xì)胞的增殖(P0.05),通過q值計算,結(jié)果顯示二藥聯(lián)用與小白菊內(nèi)酯及順鉑單用相比有明顯的協(xié)同抑制A549細(xì)胞增殖作用。FCM方法檢測結(jié)果顯示:大劑量(20μmol/l)小白菊內(nèi)酯與順鉑聯(lián)用,共同作用于人肺腺癌A549細(xì)胞,相比于小白菊內(nèi)酯及順鉑單用組,二藥聯(lián)合組人肺腺癌A549細(xì)胞凋亡率為24.42%(早期凋亡與晚期凋亡細(xì)胞數(shù),P0.05)較對照組明顯增加且二藥聯(lián)用組G1+S期細(xì)胞比例增加(P0.05),通過q值計算比較,提示大劑量小白菊內(nèi)酯與順鉑聯(lián)用具有協(xié)同誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡作用。RT-PCR法顯示:大劑量小白菊內(nèi)酯和順鉑聯(lián)合與小白菊內(nèi)酯及順鉑單用相比可明顯下調(diào)聯(lián)合干預(yù)組A549細(xì)胞的Bcl-2 mRNA的表達,上調(diào)Bax mRNA的表達(P0.05)。結(jié)論:大劑量小白菊內(nèi)酯具有抑制人肺腺癌A549細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)其凋亡的作用,且小白菊內(nèi)酯可增強人肺腺癌A549細(xì)胞對順鉑敏感性,二藥聯(lián)用對人肺腺癌A549細(xì)胞具有協(xié)同抑制增殖、誘導(dǎo)凋亡作用,其作用機制可能與阻滯細(xì)胞周期、下調(diào)Bcl-2mRNA、上調(diào)Bax mRNA的表達有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：A549細(xì)胞 肺癌 順鉑 小白菊內(nèi)酯 協(xié)同作用
【學(xué)位授予單位】：甘肅中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-8
• 英文縮略詞表8-9
• 前言9-11
• 1、實驗材料11-14
• 1.1 實驗細(xì)胞11
• 1.2 實驗試劑11
• 1.3 實驗儀器11-12
• 1.4 主要實驗試劑的配制12-14
• 1.4.1 小白菊內(nèi)酯原液的配制12
• 1.4.2 PBS緩沖液的配制12
• 1.4.3 青、鏈霉素的配制12-13
• 1.4.4 DMEM低糖培養(yǎng)基的配制13
• 1.4.5 DMEM完全培養(yǎng)基的配制13
• 1.4.6 胰蛋白酶的配制13
• 1.4.7 MTT的配制13
• 1.4.8 SDS的配制13
• 1.4.9 MRNA引物的配制13-14
• 2、實驗方法14-19
• 2.1 細(xì)胞準(zhǔn)備14
• 2.1.1 細(xì)胞培養(yǎng)14
• 2.1.2 細(xì)胞計數(shù)14
• 2.2 MTT法篩選PTL及DDP對A549細(xì)胞的增殖抑制作用的藥物濃度14-15
• 2.2.1 MTT法原理14
• 2.2.2 實驗分組14-15
• 2.2.3 實驗步驟15
• 2.3 MTT法檢測低、中、高濃度PTL聯(lián)合DDP對A549細(xì)胞的增殖抑制作用15
• 2.3.1 實驗分組15
• 2.3.2 實驗步驟15
• 2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期分布15-17
• 2.4.1 細(xì)胞凋亡實驗原理15-16
• 2.4.2 細(xì)胞周期檢測原理16
• 2.4.3 實驗分組16
• 2.4.4 實驗步驟16-17
• 2.5 RT-PCR法測定BCL-2 和BAX的MRNA表達情況17-19
• 2.5.1 試驗原理17
• 2.5.2 實驗分組17
• 2.5.3 細(xì)胞培養(yǎng)17
• 2.5.4 總RNA提取17-18
• 2.5.5 RNA純度測定18
• 2.5.6 RNA濃度測定18
• 2.5.7 RNA的反轉(zhuǎn)錄18-19
• 2.5.8 REAL TIME PCR19
• 3、統(tǒng)計學(xué)分析19-20
• 4、實驗結(jié)果20-26
• 4.1 人肺腺癌A549細(xì)胞生長曲線及正常形態(tài)20-21
• 4.2 人肺腺癌A549細(xì)胞凋亡情況21
• 4.3 DDP及PTL作用于人肺腺癌A549細(xì)胞的有效濃度21-23
• 4.4 PTL聯(lián)合DDP對人肺腺癌A549細(xì)胞的增殖抑制作用23-24
• 4.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測PTL聯(lián)合DDP對A549細(xì)胞的影響24-25
• 4.6 實時熒光定量PCR結(jié)果25-26
• 5、討論26-33
• 5.1 小白菊內(nèi)酯聯(lián)合順鉑對人肺腺癌A549細(xì)胞的抗增殖作用26-30
• 5.1.1 細(xì)胞增殖26-27
• 5.1.2 小白菊內(nèi)酯有效濃度的篩選27-28
• 5.1.3 順鉑有效干預(yù)濃度的選取28
• 5.1.4 PTL聯(lián)合DDP對A549細(xì)胞的增殖抑制作用28-29
• 5.1.5 PTL聯(lián)合DDP對A549細(xì)胞細(xì)胞周期的影響29-30
• 5.2 小白菊內(nèi)酯聯(lián)合順鉑對人肺腺癌A549細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用30-32
• 5.2.1 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡30-31
• 5.2.2 凋亡抑制基因BCL-2 及凋亡基因BAX31-32
• 5.3 小白菊內(nèi)酯與氧化應(yīng)激32-33
• 6、結(jié)語33-34
• 6.1 結(jié)論33
• 6.2 研究結(jié)果的意義33-34
• 6.3 問題與展望34
• 7、參考文獻34-37
• 8、附錄37-44
• 8.1 公式37
• 8.1.1 協(xié)同計算公式37
• 8.1.2 細(xì)胞活力計算公式37
• 8.1.3 細(xì)胞抑制率計算公式37
• 8.2 各MRNA引物參數(shù)37
• 8.3 流式細(xì)胞術(shù)門框圖37-38
• 8.3.1 細(xì)胞周期門框圖37-38
• 8.3.2 細(xì)胞凋亡門框圖38
• 8.4 PCR溶解曲線圖38-39
• 8.5 IC_(50)統(tǒng)計結(jié)果39-41
• 8.6 性關(guān)性分析結(jié)果41-42
• 8.7 實驗剪影42-44
• 文獻綜述44-57
• 參考文獻53-57
• 致謝57-59
• 在學(xué)期間主要研究成果59

【參考文獻】

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本文編號：770099